检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2001年第6期21卷 573-575页

作者：王凤阳张守峰赵君池海英孟庆文扈荣良殷震解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基... 详细信息

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo

关键词：重组逆转录病毒 neo^R基因生殖系细胞基因转移小鼠

来源：评论

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重组逆转录病毒介导针对hTERT的锤头状核酶抗结肠癌的实验研究

重组逆转录病毒介导针对hTERT的锤头状核酶抗结肠癌的实验研究

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作者：郝志明西安交通大学

学位级别：博士

该研究拟设计针对人端粒酶的关键组分—人端粒酶逆转录酶(hTERT)的锤头状核酶,并以重组逆转录病毒为载体将核酶基因导入结肠癌细胞SW480使核酶基因在细胞内表达,验证核酶抑制端粒酶的效果,以及端粒酶活性下降后,肿瘤细胞生长状态的变化... 详细信息

该研究拟设计针对人端粒酶的关键组分—人端粒酶逆转录酶(hTERT)的锤头状核酶,并以重组逆转录病毒为载体将核酶基因导入结肠癌细胞SW480使核酶基因在细胞内表达,验证核酶抑制端粒酶的效果,以及端粒酶活性下降后,肿瘤细胞生长状态的变化,为恶性肿瘤的治疗探索新的途径.结论:①该研究设计的针对hTERT mRNA的锤头状核酶有良好的体外及细胞内切割活性;②端粒酶活性降低后,肿瘤细胞可不经过端粒缩短和细胞衰老过程而快速死亡,死亡方式以凋亡为主,证实强力抑制端粒酶可致肿瘤细胞经"快捷通道"迅速凋亡,提示端粒酶有保护端粒和刺激肿瘤细胞增殖作用,而且是恶性肿瘤细胞存活所必需的因素;③重组逆转录病毒可作为结肠癌基因治疗的有效载体;④该研究构建的表达抗hTERT核酶的重组逆转录病毒在端粒酶阳性肿瘤的治疗中有潜在的应用价值.

关键词：端粒酶人端粒酶逆转录酶锤头状核酶重组逆转录病毒结肠癌细胞凋亡

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hEPO　cDNA重组逆转录病毒的构建

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生物化学与生物物理进展 1996年第2期23卷 150-153页

作者：瞿成奎魏汉东贺福初王立生吴祖泽军事医学科学院放射医学研究所

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的ｈＥＰＯｃＤＮＡ片段重组到逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ，ｐＬＮＣＸ中重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形... 详细信息

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的ｈＥＰＯｃＤＮＡ片段重组到逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ，ｐＬＮＣＸ中重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形成典型的Ｇ４１８抗性克隆，该克隆细胞染色体中成功地整合了ＥＰＯｃＤＮＡ，并且表达出有生物学活性的红细胞生成素（ＥＰＯ）产物。

关键词：红细胞生成素重组逆转录病毒载体基因转移

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重组逆转录病毒介导的肿瘤坏死因子基因转移与哺乳动物细胞表达

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中国兽医学报 1995年第3期15卷 228-234页

作者：黎诚耀高荣凯韩文瑜王世若费恩阁长春农牧大学畜牧水产系

以构建的重组肿瘤坏死因子逆转录病毒载体ｐＺＩＰＴＮＦＤＮＡ转染Ｃｏｓ７细胞，获得了ＴＮＦα暂时性表达。采用ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法，将ｐＺＩＰＴＮＦＤＮＡ导入了单向性逆转录病毒包装细胞ψ２，在Ｇ４１８选择下，克隆出了ψ... 详细信息

以构建的重组肿瘤坏死因子逆转录病毒载体ｐＺＩＰＴＮＦＤＮＡ转染Ｃｏｓ７细胞，获得了ＴＮＦα暂时性表达。采用ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法，将ｐＺＩＰＴＮＦＤＮＡ导入了单向性逆转录病毒包装细胞ψ２，在Ｇ４１８选择下，克隆出了ψ／ｐＺＩＰＴＮＦ细胞系。该细胞可产生重组ＴＮＦ逆转录病毒。本研究利用ψ／ｐＺＩＰＴＮＦ细胞分泌的重组逆转录病毒连续传代感染ψ２或ＰＡ３１７细胞以及病毒交替感染ψ２和ＰＡ３１７细胞，制备了高滴度单向和双向性重组ＴＮＦ逆转录病毒，其滴度可高达１．４×１０６，并发现获得的病毒滴度在传代感染的第３代达到高峰，随之趋于平衡。利用重组ＴＮＦ逆转录病毒感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，建立了３Ｔ３／ｐＺＩＰＴＮＦ细胞，该细胞的４８ｈ培养上清中可产生３２Ｕ／ｍＬ的ＴＮＦα。利用重组ＴＮＦ逆转录病毒直接感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞后的４８ｈ培养上清中，ＴＮＦα活性也可达到８Ｕ／ｍＬ。实验还观察到３Ｔ３／ｐｚＩＰＴＮＦ细胞有自身生长抑制现象。本研究结果成功地实现了重组逆转录病毒介导的ＴＮＦα基因在哺乳动物细胞中的转移与表达，为进一步实施肿瘤基因治疗奠定了基础。

关键词：重组逆转录病毒肿瘤坏死因子基因转移动物

来源：评论

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重组逆转录病毒介导的转蚓激酶基因兔

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中国实验动物学报 2007年第6期15卷 449-452,I0005页

作者：刘殿峰张嘉保张守峰任文陟姚伟张锐扈荣良吉林大学实验动物中心吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062 长春市标准化信息编码研究所吉林长春130011

目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清... 详细信息

目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清直接注射雄性兔的睾丸组织转染精原干细胞。结果病毒上清经NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。病毒注射3月龄兔睾丸组织,过1.5个月取其睾丸、肾、脾、肝、肺进行组织切片观察,结果正常。提取交配所得F0、F1代仔兔基因组,经PCR、Southern检测,转基因阳性率F0代为6.3%(2/32)、F1代为15.3%(2/13)。结论通过重组逆转录病毒直接注射3月龄兔睾丸组织可获得转基因兔,病毒对兔的脏器无损害。

关键词：蚓激酶重组逆转录病毒包装转染转基因

来源：评论

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含人组织型纤溶酶原激活剂cDNA重组逆转录病毒的制备及鉴定

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中华实验和临床病毒学杂志 1997年第1期11卷 50-52页

作者：崔宁彭鲁英宋后燕韩琴琴陈灏珠上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室上海市心血管病研究所

将人组织型纤溶酶原激活剂ｃＤＮＡ与逆转录病毒载体ＬＮＳＸ重组后转染病毒包装细胞ＰＡ３１７，形成完整的重组病毒颗粒，电镜下重组病毒呈散在分布，球形，直径９０～１８０ｎｍ，由囊膜、外壳和核心三部分组成。重组病毒颗粒感染Ｎ... 详细信息

将人组织型纤溶酶原激活剂ｃＤＮＡ与逆转录病毒载体ＬＮＳＸ重组后转染病毒包装细胞ＰＡ３１７，形成完整的重组病毒颗粒，电镜下重组病毒呈散在分布，球形，直径９０～１８０ｎｍ，由囊膜、外壳和核心三部分组成。重组病毒颗粒感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，在含Ｇ４１８培养基中筛选培养２周后计数阳性细胞克隆数，结果达６×１０８ＣＦＵ／Ｌ；被感染的受体细胞ＮＩＨ３Ｔ３高效表达具有纤溶活性的重组人组织型纤溶酶原激活剂。

关键词： cDNA 重组逆转录病毒转染感染基因治疗

来源：评论

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含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH_3T_3细胞的表达

引用

中国预防兽医学报 2001年第5期23卷 329-331页

作者：王凤阳孟庆文扈荣良池海英张茂林于康震殷震解放军军需大学全军基因工程实验室吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

构建了含有 3.7kbLacZ的重组逆转录病毒载体 ,转染包装细胞系PA317后 ,经G418筛选 ,得到了G418抗性的产毒细胞系 ,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清 ,感染NIH3T3细胞 ,经X_gal染色检测 ,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。

关键词：重组逆转录病毒 LacZ NIH3T3细胞基因表达外源基因转基因

来源：评论

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NGF和GDNF基因重组逆转录病毒体外感染神经干细胞及其鉴定

引用

解剖学报 2001年第4期32卷 297-300,T002页

作者：阮奕文王传恩王宁利谢瑶姚志彬中山医科大学解剖学教研室与脑研究室广州510089 中山医科大学眼科中心广州510089

目的　探讨神经干细胞 (NSC)直接作为基因靶细胞能否被重组逆转录病毒感染以及感染后目的基因的表达。　方法　分别用NGF和GDNF基因重组逆转录病毒上清液感染NSC 2d ;G418筛选后加入bFGF扩增培养 ;取感染后的NSC培养液 (NGF GDNF条件培... 详细信息

目的　探讨神经干细胞 (NSC)直接作为基因靶细胞能否被重组逆转录病毒感染以及感染后目的基因的表达。　方法　分别用NGF和GDNF基因重组逆转录病毒上清液感染NSC 2d ;G418筛选后加入bFGF扩增培养 ;取感染后的NSC培养液 (NGF GDNF条件培养液 )培养PC12细胞和中脑腹侧神经元 ;用免疫组织化学染色方法检测中脑腹侧多巴胺神经元的形态改变以及感染后NSC对目的基因的表达。　结果　经G418筛选后 ,约 5 0 %感染NGF和GDNF基因重组逆转录病毒的NSC呈G418抗性 ;这些感染后的NSC开始分化 ,分裂球向四周长出放射状突起 ,部分细胞沿突起向外迁移生长 ;感染NGF基因的NSC呈星形 ,胞体较大 ,突起较粗。感染GDNF基因的NSC呈梭形 ,胞体较小 ,突起较长。经NGF条件培养液培养的PC12细胞 ,数量增多 ,突起明显变长。经GDNF条件培养液培养的中脑多巴胺神经元 (TH阳性细胞 )其胞体亦增大 ,突起伸长。大部分G418抗性的NSC出现NGF和GDNF免疫染色。　结论　神经干细胞可直接作为基因靶细胞 ,能被NGF和GDNF基因重组逆转录病毒有效感染而表达和分泌有生物学活性的NGF和GDNF。

关键词：神经干细胞重组逆转录病毒基因表达感染 NGF基因 GDNF基因

来源：评论

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用重组逆转录病毒重建大鼠脑皮质星形胶质细胞端粒酶活性及其功能的研究

用重组逆转录病毒重建大鼠脑皮质星形胶质细胞端粒酶活性及其功能...

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作者：王全师西安交通大学

学位级别：博士

该研究的目的是为了阐明使用hTERT作为目的基因治疗中枢退行性疾病或将转导了hTERT的神经细胞作为移植细胞治疗中枢神经退行性疾病的有效性和安全性问题.结论:使用分子生物学方法和重组病毒技术我们成功的构建了表达hTERT和GFP两种重组... 详细信息

该研究的目的是为了阐明使用hTERT作为目的基因治疗中枢退行性疾病或将转导了hTERT的神经细胞作为移植细胞治疗中枢神经退行性疾病的有效性和安全性问题.结论:使用分子生物学方法和重组病毒技术我们成功的构建了表达hTERT和GFP两种重组逆转录病毒.使用差异种植技术分离获得了新生大鼠脑皮质星形胶质细胞.用重组病毒感染分离的大鼠脑皮质星形胶质细胞,再建了细胞的端粒酶活性,保持和延长了端粒,克服了细胞的复制衰老,延伸了细胞生命周期.应激加害实验结果表明过表达端粒酶的细胞能拮抗应激诱导的凋亡和坏死,提高了细胞损伤后恢复增殖的速度,但它没有拮抗应激诱导衰老作用.裸鼠接种实验和细胞集落形成实验表明转导hTERT的大鼠脑星形胶质细胞没有成瘤作用.该文研究结果提示hTERT具有抗复制衰老、抗应激凋亡和坏死、延伸细胞生命周期的生物学作用,可以用来预防和治疗中枢神经退行性疾病,但该基因的生物安全性还需做大量研究来确定.

关键词：端粒端粒酶端粒酶逆转录酶细胞生命周期衰老凋亡星形胶质细胞重组逆转录病毒

来源：评论

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反义RNA重组逆转录病毒逆转录套式PCR检测方法的建立

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中国兽医科技 2005年第8期35卷 611-614页

作者：曹素芳孟庆文于康震单文鲁郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

为探求一种快速检测反义RNA重组逆转录病毒效价的新方法,用脂质体介导法将反义RNA重组逆转录病毒载体pLXSA、pLXSB分别转染包装细胞系PA317,经G418筛选,获得数个稳定的产毒细胞克隆,择优挑选7个细胞克隆扩增培养,收集细胞上清,用异硫氰... 详细信息

为探求一种快速检测反义RNA重组逆转录病毒效价的新方法,用脂质体介导法将反义RNA重组逆转录病毒载体pLXSA、pLXSB分别转染包装细胞系PA317,经G418筛选,获得数个稳定的产毒细胞克隆,择优挑选7个细胞克隆扩增培养,收集细胞上清,用异硫氰酸胍-酚一步法提取病毒RNA,进行逆转录套式PCR,检测细胞上清中的反义RNA重组逆转录病毒效价,同时用传统方法(小鼠成纤维放大法)进行测定。2种方法检测结果的比较表明,逆转录套式PCR法的特异性和敏感性均高于小鼠成纤维放大法,是一种敏感性高、特异性强、操作简便、快速的检测逆转录病毒效价的新方法。

关键词：重组逆转录病毒反义RNA 逆转录套式PCR 病毒效价

来源：评论

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