检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 235-237,266页

作者：袁捷刘德莉周广东苗春雷崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下... 详细信息

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下。术后8周,HE染色观察组织结构,碱性磷酸酶(AKP)染色和骨钙素(OCN)免疫组化检测功能蛋白,激光共聚焦显微镜下对GFP进行示踪观察。结果 8周后,大体可见组织工程化新骨形成,组织学示新生骨小梁围绕材料孔隙生成,AKP染色和OCN免疫组化结果阳性,并可见新生组织内有呈绿色的GFP标记细胞,β-TCP部分降解。结论组织工程化骨组织学结构与松质骨小梁类似。新生组织表达GFP,证实组织工程化骨组织的形成来源于供体细胞。

关键词：绿色荧光蛋白标记技术组织工程骨组织重组逆转录病毒载体 β-磷酸三钙供体细胞

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草酸代谢基因在成人骨髓间充质干细胞中的表达及意义

草酸代谢基因在成人骨髓间充质干细胞中的表达及意义

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作者：阳旭明广州医学院

学位级别：硕士

目的：将产甲酸草酸杆菌（OF）草酸分解基因Frc和Oxc分别克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1和pBaBE-puro，共转染正常成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)，使Frc和Oxc基因在hMCSs中稳定表达，并获得分解草酸的功能。<br>　　方法... 详细信息

目的：将产甲酸草酸杆菌（OF）草酸分解基因Frc和Oxc分别克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1和pBaBE-puro，共转染正常成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)，使Frc和Oxc基因在hMCSs中稳定表达，并获得分解草酸的功能。<br>　　方法：提取本实验室保存的OF基因组DNA为模板进行扩增，根据Frc（NCBI登录号为OFU82167）、Oxc基因序列（NCBI登录号为M77128）进行分析，设计引物，PCR反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳,将 Frc、Oxc基因的胶回收产物和pLEGFP-N1、pBaBE-puro载体进行酶切，连接酶连接过夜，转化大肠杆菌DH5α、菌落PCR，酶切鉴定、测序；逆转录病毒包装细胞采用磷酸钙法转染细胞，培养后收集病毒上清液感染正常成人骨髓间充质干细胞，使用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖情况，绘制生长曲线；TRIzol法提取总RNA后行cDNA，再上机行荧光定量PCR,用相对定量Q-PCR法比较三组细胞mRNA表达差异；使用蛋白提取试剂盒，按步骤分别进行提取总蛋白，经电泳、转膜、封闭过夜、加入一抗二抗孵育、化学发光、显影定影等，Western blot检测转染后myc-FCOAT和flag-OCOAD在hMSCs细胞中的表达；离子色谱法测定转基因后细胞培养液中草酸浓度,鉴定其分解草酸的能力；使用SPSS13.0统计学软件分析数据，P<0.05表示差异有统计学意义。<br>　　结果：重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-myc-Frc、pBaBE-puro-flag-Oxc构建成功； Frc和Oxc片段电泳大小分别约为1287bp和1753bp,胶回收产物和pLEGFP-N1、pBaBE-puro载体分别进行酶切、连接、转化、电泳后，其大小与理论一致，测序后与GenBank一致；逆转录病毒载体感染的hMSCs细胞的生长特性未受到影响；Q-PCR检测示hMSCs稳定组的mRNA的表达量显著高于hMSCs对照组和hMSCs组，差异具有显著统计学意义（P<0.01）；Western blot结果示hMScs稳定组能分别显示约48KD和65KD的特异性明亮条带，而hMSCs组和hMSCs对照组都未显示特异性条带；离子色谱仪检测hMSCs稳定组培养液中草酸浓度明显低于相应时间点上hMSCs对照组、hMSCs组和空白对照组培养液中的草酸浓度,并且差异有显著性意义(P<0.01),而后三组培养液中的草酸浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。<br>　　结论：克隆Frc和Oxc基因，构建了该基因的真核表达载体pLEGFP-N1-myc-Frc、pBaBE-puro-flag-Oxc，Frc和Oxc能在体外转入hMSCs中，在mRNA和蛋白水平均可检测到Frc和Oxc基因在hMSCs中的稳定表达,并使草酸分解能力明显增强，有望通过基因工程和干细胞技术治疗高草酸尿,尤其是为治疗内源性高草酸尿奠定基础。

关键词：高草酸尿成人骨髓间充质干细胞草酸代谢基因重组逆转录病毒载体琼脂糖凝胶电泳

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凋亡素基因导入与表达对人类结肠癌细胞影响的实验研究

凋亡素基因导入与表达对人类结肠癌细胞影响的实验研究

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作者：王娜暨南大学

学位级别：硕士

目的:构建强力霉素可调控凋亡素基因表达的重组逆转录病毒载体,观察强力霉素调控下凋亡素基因的表达情况及其对人结肠癌细胞的致凋亡作用。方法:将凋亡素基因克隆入逆转录病毒载体pRevTRE中,构建出重组载体pRevTRE-VP3。调节载体质... 详细信息

目的:构建强力霉素可调控凋亡素基因表达的重组逆转录病毒载体,观察强力霉素调控下凋亡素基因的表达情况及其对人结肠癌细胞的致凋亡作用。方法:将凋亡素基因克隆入逆转录病毒载体pRevTRE中,构建出重组载体pRevTRE-VP3。调节载体质粒pRevTet-on和反应载体质粒pRevTRE-VP3,分别经PT67细胞包装出有感染力但无复制能力的缺陷型病毒。两种病毒依次感染目的细胞Lovo,经抗生素持续筛选,获得双重稳定的抗性细胞株Lovo/on-VP3。向培养液中加入强力霉素启动凋亡素基因的表达,通过PCR、RT-PCR、荧光染色及流式细胞等技术,观察Lovo/on-VP3细胞中凋亡素基因的表达及细胞的凋亡变化情况。

关键词：结肠癌强力霉素凋亡素基因重组逆转录病毒载体基因表达细胞凋亡 RT-PCR

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人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达细胞克隆SMMC7721-TNF的建立及其部分生物学特性的初步观察

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中国肿瘤生物治疗杂志 1995年第4期2卷 275-276页

作者：冯学胜汤钊猷叶胜龙郑仲承戈凯刘新垣上海医科大学肝癌研究所上海200032 中国科学院上海生物化学研究所上海200031

用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721，G418筛选后，随机挑选10个细胞克隆，扩大培养，检测细胞培养液上清中TNFα的水平，将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学... 详细信息

用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721，G418筛选后，随机挑选10个细胞克隆，扩大培养，检测细胞培养液上清中TNFα的水平，将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学特性。Southern Blot证明TNFα基因完整地整合在细胞基因组中，

关键词： SMMC7721 人肝癌细胞 TNFα基因观察细胞克隆高表达转染重组逆转录病毒载体细胞培养液病毒颗粒

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肝癌基因治疗现状

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胃肠病学 1999年第1期4卷 43-45,48页

作者：苏进根朱上林王天翔上海第二医科大学附属瑞金医院外科 200025

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TK基因/GCV对瘢痕组织成纤维细胞增生的体外抑制研究

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 121-122页

作者：张晓志彭朝晖吴小兵韩虹徐钤第一军医大学分子生物学研究所广州510515

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是在创伤延迟愈合期间,由于过度胶原沉积而形成的突出皮肤表面或从原损伤部位侵入周围正常皮肤的增殖性瘢痕组织,是整形外科和皮肤科难治疾病之一。传统的临床治疗由于缺乏充分的分子生物学基础,目前仍无一种明确... 详细信息

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是在创伤延迟愈合期间,由于过度胶原沉积而形成的突出皮肤表面或从原损伤部位侵入周围正常皮肤的增殖性瘢痕组织,是整形外科和皮肤科难治疾病之一。传统的临床治疗由于缺乏充分的分子生物学基础,目前仍无一种明确有效的方法,主要问题是难以控制其复发。我们通过逆转录病毒载体GTK介导HSV-TK基因转移联合9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(更昔洛韦,ganciclovir,

关键词：瘢痕组织 HyTK基因细胞增生体外抑制成纤维细胞分子生物学研究增生性瘢痕和瘢痕疙瘩重组逆转录病毒载体细胞凋亡基因治疗

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含抗凋亡基因bol-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定

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国际眼科杂志 2006年第4期6卷 781-782页

作者：李素芳魏锐利金玲第二军医大学长征医院眼科中国上海市200003

目的：构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法：将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3．1中切下，定向插入逆转录病毒载体PLNCx2中，酶切鉴定；脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67，G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。... 详细信息

目的：构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法：将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3．1中切下，定向插入逆转录病毒载体PLNCx2中，酶切鉴定；脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67，G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果：双酶切鉴定，成功构建重组逆转录病毒载体；重组逆转录病毒转入包装细胞PT67，经G418筛选。形成了抗性克隆，并测得病毒滴度为3×10^11cfu，L提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论：含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。[著者文摘]

关键词：抗凋亡基因bcl-2 逆转录病毒重组体酶切鉴定基因重组逆转录病毒重组逆转录病毒载体 pcDNA3.1 包装细胞系 bcl-2基因脂质体法稳定表达

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消化疾病的基因治疗

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胃肠病学 1999年第1期4卷 3-5页

作者： EdwinC.Ouyang GeorgeY.wu DivisionofGastroenterology-Hepatology DepartmentofMedicineUniversityofConnecticutHealthCenterFarmingtonConnecticutUSA

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含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定

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国际眼科杂志 2006年第4期6卷 781-782页

作者：李素芳魏锐利金玲武警上海总队医院眼科中国上海市201103 第二军医大学长征医院眼科中国上海市200003

目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双... 详细信息

目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。

关键词：抗凋亡基因bcl-2 逆转录病毒重组体酶切鉴定基因重组逆转录病毒重组逆转录病毒载体 pcDNA3.1 包装细胞系 bcl-2基因脂质体法稳定表达

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造血干祖细胞移植的细胞生物学基础

造血干祖细胞移植的细胞生物学基础

引用

中国科协首届学术年会

作者：唐佩弦军事医学科学院基础医学研究所

造血干细胞的定义本来应是功能性的。它必须是:(1)移植后可长期(永久)重建造血;(2)同时兼有髓系和淋巴系多向分化的潜能。早期造血祖细胞的功能是:(1)移植后可短期重建造血;(2)髓系祖细胞仅有髓系(红、粒、单、巨各系)分化潜能,

关键词：祖细胞体外扩增细胞生物学重组逆转录病毒载体

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