检索结果-内蒙古大学图书馆

第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：胡志清井莹莹盛伟华刘铁连单云波杨吉成张日朱南康缪竞诚苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室江苏苏州 215123 苏州大学附属第一医院血液科江苏苏州 215006 苏州大学放射医学研究所江苏苏州 215007

目的:构建稳定表达抑瘤素M(OSM)基因的人胚肾成纤维细胞(293T细胞),将其作为饲层细胞,研究其对脐带血造血干/祖细胞体外扩增的作用。方法:将重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-OSM采用脂质体法转入293T细胞,通过zeocin加压筛选建立稳... 详细信息

目的:构建稳定表达抑瘤素M(OSM)基因的人胚肾成纤维细胞(293T细胞),将其作为饲层细胞,研究其对脐带血造血干/祖细胞体外扩增的作用。方法:将重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-OSM采用脂质体法转入293T细胞,通过zeocin加压筛选建立稳定的转基因细胞系,并采用RT-PCR方法和ELISA方法检测OSM表达水平.然后将构建好的转基因细胞作为饲养层,与免疫磁珠法分选的脐带血CD34+细胞共培养,观察培养后CD34+细胞的百分比,数量以及细胞表面标志CD54,CXCR4的表达.实验中应用空质粒载体组和293T细胞纽作为对照. 结果:RT-PCR和ELISA结果表明逆转录病毒载体介导的OSM基因在293T细胞中表达.应用OSM基因修饰的饲养层细胞培养7天后,CD34+细胞绝对数较培养前扩增了9.4倍,同时OSM基因修饰的饲养层细胞还可以减缓细胞表面标志CD54,CXCR4下降程度,提示OSM有助于保持脐带血造血干/祖细胞的归巢力. 结论:建立了稳定表达OSM的转基因细胞系,将其作为饲养层细胞可改善脐带血造血干/祖细胞体外培养的微环境,有助于保持其多能性和未分化性。

关键词：抑瘤素M基因饲养层重组逆转录病毒载体造血干细胞祖细胞体外扩增 OSM表达

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缺失突变型IκBα对HL-60细胞分化和凋亡作用的初步探讨

缺失突变型IκBα对HL-60细胞分化和凋亡作用的初步探讨

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第10届全国实验血液学会议

作者：王光平荆照政齐振华陈方平中南大学湘雅医院血液科中南大学湘雅医院医学实验中心中南大学湘雅医院血液科中南大学湘雅医院血液科

目的早期研究发现,不同类型的急性髓系白血病患者原代白血病细胞以及多种白血病细胞株如HL-60细胞均存在异常活化的NF-κB。活化后的NF-κB则可通过调节包括细胞凋亡和细胞周期控制在内的多种不同基因的表达,从而参与白血病细胞凋亡、... 详细信息

目的早期研究发现,不同类型的急性髓系白血病患者原代白血病细胞以及多种白血病细胞株如HL-60细胞均存在异常活化的NF-κB。活化后的NF-κB则可通过调节包括细胞凋亡和细胞周期控制在内的多种不同基因的表达,从而参与白血病细胞凋亡、细胞增殖与分化以及化疗药物抗性反应。NF-κB的活化受到多种因素的调节,其中IκBα为调控其活化的一种主要抑制蛋白,它能与NF-κB结合,阻止NF-κB从细胞质易位到细胞核转化成活化的NF-κB,而抑制NF-κB活化则可诱导细胞凋亡。为此,本研究构建了含有缺失突变型IκBα的重组逆转录病毒载体并将其质

关键词：突变型重组逆转录病毒载体 HL-60 凋亡作用细胞分化初步探讨

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永生化人肝细胞系的建立及其鉴定

永生化人肝细胞系的建立及其鉴定

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2008年浙江省感染病、肝病学术年会

作者：潘小平杜维波盛国平虞晓鹏曹红翠李君陈瑜黄建荣盛吉芳李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染内科传染病诊治国家重点实验室

人工肝(artificial liver)被认为是治疗肝衰竭的有效途径之一,在临床上得到广泛的应用。近年来,以肝细胞为基础的生物型人工肝(bioartificial liver,BAL)成为目前肝功能衰竭治疗的基础与临床研究的重点和热点。肝细胞是BAL的生物部分,... 详细信息

人工肝(artificial liver)被认为是治疗肝衰竭的有效途径之一,在临床上得到广泛的应用。近年来,以肝细胞为基础的生物型人工肝(bioartificial liver,BAL)成为目前肝功能衰竭治疗的基础与临床研究的重点和热点。肝细胞是BAL的生物部分,起着核心作用;其中,原代人肝细胞因其同源性和良好细胞代谢等功能,可视为:BAL最理想的细胞材料;但是,由于肝脏来源的短缺、肝细胞无法长期培养和体外增殖等问题是困扰人肝细胞作为BAL的细胞源的最大障碍。

关键词：永生化人肝细胞特异性标志物阳性对照细胞色素 RNA 永生化肝细胞重组逆转录病毒载体

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白细胞介素10基因转移抑制肾小球系膜细胞诱生炎症细胞因子

白细胞介素10基因转移抑制肾小球系膜细胞诱生炎症细胞因子

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中华医学会急诊医学分会复苏、灾害、中毒专业联合学术交流会

作者：李锦华余学清陈永雄张仕光中山医科大学附属第一医院中山医科大学附属第一医院中山医科大学附属第一医院中山医科大学附属第一医院

目的通过建立白细胞介素10(IL-10)的重组逆转录病毒载体基因转移系统,观察 IL-10对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesengial cell,GMC)中细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法通过构建的重组逆转录病毒载体PLX(IL-... 详细信息

目的通过建立白细胞介素10(IL-10)的重组逆转录病毒载体基因转移系统,观察 IL-10对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesengial cell,GMC)中细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法通过构建的重组逆转录病毒载体PLX(IL-10)SN将外源基因IL-10转移至大鼠GMC;1．应用聚合酶链反应(PCR),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA

关键词：肾小球系膜细胞白细胞介素重组逆转录病毒载体炎症细胞因子基因转移

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Notch1基因转染对人肝癌细胞Hep3B生长的影响及作用机制的研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2003年第3期10卷 180-184页

作者：齐润姿厉永建安华章于益芝杨小妍曹雪涛第二军医大学免疫研究所上海200433

目的 :研究逆转录病毒介导的Notch1(ICN)基因转染对人肝癌细胞生长的影响 ,并对其作用机制进行了探讨。方法 :采用磷酸钙沉淀法质粒共转染 2 93T细胞 ,制备出表达组成性活化形式的Notch1(ICN)和 /或绿色荧光蛋白 (GFP)的逆转录病毒载体M... 详细信息

目的 :研究逆转录病毒介导的Notch1(ICN)基因转染对人肝癌细胞生长的影响 ,并对其作用机制进行了探讨。方法 :采用磷酸钙沉淀法质粒共转染 2 93T细胞 ,制备出表达组成性活化形式的Notch1(ICN)和 /或绿色荧光蛋白 (GFP)的逆转录病毒载体MSCV ICN/GFP及对照逆转录病毒载体MSCV GFP ,并检测病毒滴度。用逆转录病毒感染人肝癌细胞Hep3B ,观察病毒的感染效率 ,MTT比色法测定瞬时表达Notch1(ICN)对Hep3B人肝癌细胞生长的影响 ,利用流式细胞仪分析细胞周期分布的变化 ,Westernblot方法检测细胞周期调控蛋白的变化。结果 :通过质粒共转染可获得具有较高滴度的重组逆转录病毒。MTT比色法显示瞬时表达Notch1(ICN)基因可以抑制人肝癌细胞Hep3B的生长 ,瞬时表达Notch1(ICN)基因可使Hep3B细胞周期停滞在G0 /G1期并上调细胞周期调控蛋白P5 3的表达水平。结论 :Notch1基因可通过影响细胞周期分布和P5 3蛋白的表达水平而抑制人肝癌细胞生长。

关键词：肝癌细胞组成性活化形式的Notchl(ICN) 重组逆转录病毒载体生长细胞周期

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活化的Notch1下调NF-κB对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

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中国热带医学 2009年第4期9卷 632-635页

作者：姚军钱翠娟伍欣星台州学院医学院浙江台州318000 台州市立医院浙江台州318000 武汉大学医学院病毒研究所湖北武汉437000

目的构建重组逆转录病毒表达载体pCLNRX-ICN,研究Notch1过度活化对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法通过逆转录病毒感染,将Notch1(ICN)基因导入并整合到HeLa细胞的基因组中。MTT法检测稳定表达ICN对HeLa细胞生长的影... 详细信息

目的构建重组逆转录病毒表达载体pCLNRX-ICN,研究Notch1过度活化对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法通过逆转录病毒感染,将Notch1(ICN)基因导入并整合到HeLa细胞的基因组中。MTT法检测稳定表达ICN对HeLa细胞生长的影响,并将阳性克隆细胞皮下接种裸鼠,观察ICN基因转染前后细胞系在裸鼠体内的致瘤能力,流式细胞仪分析细胞凋亡的变化,Western blot及EMSA检测转录因子NF-κB及相关基因的变化。结果成功建立了稳定表达ICN基因的宫颈癌细胞株HeLa-ICN。活化的Notch1显著抑制HeLa细胞体内外增殖能力。而且在诱导HeLa细胞发生凋亡的同时,活化的Notch1可上调HeLa细胞中IκBα的表达,并下调NF-κB活性及其调节基因Bcl-2、c-Myc和cyclin D1的表达。结论活化的Notch1可通过诱导细胞凋亡和下调NF-κB活性而抑制人宫颈癌细胞增殖。

关键词：宫颈癌细胞 Notch1 重组逆转录病毒载体 NF-κB 细胞凋亡

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HO-1高表达在保护造血干细胞抗氧化作用中的研究

HO-1高表达在保护造血干细胞抗氧化作用中的研究

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第13届全国实验血液学会议

作者：韦四喜王季石贵阳医学院附属医院血液科

目的:移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)最严重的并发症之一,另外移植前的预处理在杀死肿瘤细胞的同时可产生大量的氧自由基和炎性因子损伤供者造血干细胞(HSCs)。血红素氧合酶-1(HO-1)不仅能通过抗氧化应激、防止... 详细信息

目的:移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)最严重的并发症之一,另外移植前的预处理在杀死肿瘤细胞的同时可产生大量的氧自由基和炎性因子损伤供者造血干细胞(HSCs)。血红素氧合酶-1(HO-1)不仅能通过抗氧化应激、防止HSCs早熟衰老及抗细胞凋亡的作用对HSCs进行保护,还可以调节免疫功能,预防或减轻GVHD。本研究旨在探讨HO-1高表达在保护造血干细胞抗氧化中的作用及其机制,为提高allo-HSCT的成功率提供新的策略和实验依据。

关键词：细胞抗氧化高表达重组逆转录病毒载体

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膜结合型TNF-α基因在人胃癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 1995年第4期2卷 271-272页

作者：胡荫许佐良于杰张桂国北京医科大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所免疫室北京100034

TNF-α是一种具有抗肿瘤作用的细胞因子．它有二种形式，一种是26kD膜结合型，另一种是17kD分泌型，二者在体外均有细胞毒活性。我们利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体。用Lipofectin将逆... 详细信息

TNF-α是一种具有抗肿瘤作用的细胞因子．它有二种形式，一种是26kD膜结合型，另一种是17kD分泌型，二者在体外均有细胞毒活性。我们利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体。用Lipofectin将逆转录病毒载体及重组逆转录病毒载体引入包装细胞CRIP，

关键词： TNF-α基因人胃癌细胞肿瘤细胞生长表达包装细胞细胞毒活性体外重组逆转录病毒载体插入突变结合型

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ePNP自杀基因载体的构建及其表达

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肿瘤学杂志 2009年第4期15卷 303-305页

作者：李克强李文林饶泽昌赵林刘东海唐洪林石小玉宁波市第二医院浙江宁波315000 南昌大学医学院江西南昌330006 江西省医学科学研究所医学生物高技术重点实验室江西南昌330006

[目的]构建稳定表达ePNP(***)的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌***12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVS... 详细信息

[目的]构建稳定表达ePNP(***)的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌***12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因重组逆转录病毒载体大肠杆菌

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靶向激活慢性粒细胞白血病蛋白激酶PKR的寡核苷酸及其应用

靶向激活慢性粒细胞白血病蛋白激酶PKR的寡核苷酸及其应用

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作者：冯文莉曾建明王小中 400016 重庆市渝中区医学院路1号

本发明的目的是提供一种靶向激活慢性粒细胞白血病细胞蛋白激酶PKR的寡核苷酸序列及携带有该寡核苷酸序列的逆转录病毒双表达载体。根据BCR-ABL b3a2型mRNA融合位点左右各20bp序列设计互补序列SEQ1和SEQ2，序列两端设计酶切位点，为防... 详细信息

标准号: CN100490903C

本发明的目的是提供一种靶向激活慢性粒细胞白血病细胞蛋白激酶PKR的寡核苷酸序列及携带有该寡核苷酸序列的逆转录病毒双表达载体。根据BCR-ABL b3a2型mRNA融合位点左右各20bp序列设计互补序列SEQ1和SEQ2，序列两端设计酶切位点，为防止转录过早终止，其中一对核苷酸T-A被更换为C-g，向急变期慢粒白血病K562细胞株转入这种特殊设计的重组逆转录病毒载体，可以在K562细胞内转录并与BCR-ABLmRNA杂交形成足够长度的双链RNA，靶向激活PKR，导致K562细胞的凋亡，而对机体内的正常细胞没有任何影响。将有效成分核苷酸序列制成临床所需的药物，能有效的治疗慢性粒细胞白血病，填补了医学方面的又一个空白。

关键词：慢性粒细胞白血病转录寡核苷酸靶向重组逆转录病毒载体激活细胞白血病K562 核苷酸序列逆转录病毒表达载体互补序列特殊设计细胞蛋白序列设计正常细胞激酶核苷酸急变期细胞株凋亡酶切双链杂交终止填补融合医学

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