检索结果-内蒙古大学图书馆

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定

中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 441-444页

作者：王云峰智海东王玫仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5... 详细信息

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5× 10 6 PFU ,接种后 3天出现局部反应 ,5天局部肿胀达到最大 ,接种鸡无其它全身反应 ,精神、食欲以及发育等均不受影响 ,说明重组病毒对试验鸡是安全的。取其中的 2 0 0 0 0 3批疫苗 ,用生理盐水作 2 10 -2 ～ 2 10 -5稀释后 ,翅内侧无血管处皮下接种 4 0日龄SPF鸡 ,免疫后 4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株 ,结果表明 ,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力 ,在接种剂量为 2 10 -2 ～ 2 10 -40 .1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应 ,当接种剂量为 2 10 -50 .2ml/鸡时可以使部分试验鸡 ( 5 /15 )产生局部反应 ,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)。攻毒试验结果进一步证明 ,当接种剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力 ,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒 10 2株的攻击 ,降低鸡群的发病率和病死率。这些结果说明。

关键词：传染性喉气管炎鸡痘重组鸡痘病毒疫苗最小免疫剂量安全性试验

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表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性

引用

中国兽医学报 2003年第4期23卷 347-349页

作者：冀德君彭大新刘红旗陈素娟吴艳涛高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点实验室江苏扬州225009

将表达 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至 30代 ,取第 10、2 0、30代重组病毒作为受检代次 ,进行外源基因片段的克隆与测序 ,以间接免疫荧光试验检验各代次的表达 ,并以第 10、2 0、30代重组鸡痘病毒疫苗进行免疫保... 详细信息

将表达 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至 30代 ,取第 10、2 0、30代重组病毒作为受检代次 ,进行外源基因片段的克隆与测序 ,以间接免疫荧光试验检验各代次的表达 ,并以第 10、2 0、30代重组鸡痘病毒疫苗进行免疫保护效力试验。对各代次模板进行 PCR反应 ,分别扩增出特异的 1.7kb外源基因片段 ,酶切位点与原始代次相同 ;各代次外源基因序列与原始序列相比 ,仅有 1个碱基发生变化 ,不涉及氨基酸的变化 ;免疫荧光试验显示各代次均有显著表达 ;各免疫组在免疫后第 7、10、14、2 0天的 HI抗体效价 (log2 )逐渐上升 ;攻毒后第 5天各免疫组排毒率与对照组相比差异显著 ,各免疫组之间无显著差异。结果表明 :此重组载体疫苗具有较好的遗传稳定性 ,经过 30代的传代后外源插入基因及其表达未见变化 ,免疫保护效力亦与原代一致。

关键词：禽流感 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗遗传稳定性基因表达

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 426-429页

作者：王云峰智海东王玫仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有... 详细信息

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有白斑出现 ,说明病毒纯度不够 ;经过 16代纯化的病毒 (rFPV -ILTVgB -C16)对细胞的嗜性加强 ,病毒的效价进一步升高 ,2 0代传代后蓝斑率仍然为 10 0 % ,PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第 5 ,10 ,15 ,2 0代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种 2周龄SPF鸡 ,2 0天后分为两组 ,分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株攻击 ,结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击。鸡体内病毒传代试验表明 ,重组病毒在接种部位仅存在 6天 ,之后就检测不到病毒 ,重组病毒通过SPF鸡连续传代 ,不存在病毒返祖的可能。由此可以得出一个结论 ,rFPV -ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的 ,无论是在体外传代 ,还是在体内均可以稳定遗传 ,不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能 ,完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。

关键词：传染性喉气管炎病毒鸡痘重组鸡痘病毒疫苗遗传稳定性

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H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护试验

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2002年第2期23卷 13-16页

作者：冀德君刘红旗彭大新高崧吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

应用表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原(SPF)鸡群,于免疫后采血测定HI抗体效价,并于免疫后第21天攻毒,攻毒后2～13d进行泄殖腔棉拭子采样,接种鸡胚测排毒情况。... 详细信息

应用表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原(SPF)鸡群,于免疫后采血测定HI抗体效价,并于免疫后第21天攻毒,攻毒后2～13d进行泄殖腔棉拭子采样,接种鸡胚测排毒情况。各免疫组在免疫后7～20d的HI抗体效价逐渐上升,但不同剂量组间、不同传代代次间有差异;攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少,且不同攻毒毒株组间无差异。重组苗组在攻毒后第2天仅有8%排毒,第5天则无排毒;灭活油苗组在攻毒后第2、5、7天分别有52%、12%、4%排毒,直到第9天才不排毒;空白攻毒组在攻毒后2～13d排毒率由92%缓慢降至8%。结果表明:研制的表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒载体疫苗具有较高的免疫保护效力,不低于灭活油苗,且在抑制早期排毒、防止群内传播方面优于灭活油苗。

关键词： H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫保护试验血凝素基因

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共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究

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高技术通讯 2004年第8期14卷 20-23页

作者：张洪勇金宁一葛淑敏尹革芬郑敏李子健江文正解放军军需大学解放军基因工程重点实验室长春130062

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游，构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1，与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR、... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游，构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1，与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR、IFA及Western blotting检测，成功获得能正确表达目的蛋白的重组鸡痘病毒株vU-TAL3CP1。并与FMDV重组核酸疫苗免疫小鼠实验表明，各实验免疫组均能诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫反应，其中以重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫效果好于其它实验各组。

关键词： FMDV 重组鸡痘病毒疫苗重组核酸疫苗免疫原性口蹄疫病毒

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表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性研究及免疫保护效力试验

表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性研究及...

引用

作者：冀德君扬州大学

学位级别：硕士

禽流感（avian influenza，AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染和/或疾病综合征。H9亚型AI近年来在我国部分地区流行，造成了养禽业尤其是养鸡业的严重损失。目前预防AI还没有理想的疫苗，现有的疫苗主要有灭活油乳剂疫苗，但其... 详细信息

禽流感（avian influenza，AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染和/或疾病综合征。H9亚型AI近年来在我国部分地区流行，造成了养禽业尤其是养鸡业的严重损失。目前预防AI还没有理想的疫苗，现有的疫苗主要有灭活油乳剂疫苗，但其使用受到一些限制：这一途径生产的疫苗成本高，疫苗应用后会严重影响现有技术条件下的禽流感疫情监测，并且存在安全隐患，可能造成人为散毒。一个更好的选择是重组鸡痘病毒疫苗。AIV的血凝素（hemagglutinin,HA）是主要的保护性抗原，许多株表达各种亚型AIV—HA基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫后均可对相应亚型的不同毒株（包括高、低致病力毒株）的攻击产生近100％的免疫保护性，而且重组病毒载体疫苗应用后不会干扰以传统检测方法为基础的禽流感疫情监测，具有较好的应用前景。本实验室根据近年来禽流感血清学调查的结果，选用优势株F株（H9N2）研制成功表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒疫苗，本研究中，以此重组鸡痘病毒载体疫苗在生产工艺、遗传稳定性和免疫保护效力三方面开展研究。 1 生产工艺的初步研究对重组鸡痘病毒疫苗的生产工艺的初步研究主要是根据鸡痘细胞苗的生产工艺进行，在4个主要环节上进行考察：细胞培养、病毒接种比例、后处理以及冻干步骤。 1．1 细胞培养：采用胰酶连续消化方法生产鸡胚成纤维细胞，所生产的细胞产量可稳定在2亿细胞/10日龄胚以上，每3000ml转瓶仅需5-6枚鸡胚即可形成致密单层。 1．2 病毒接种比例：在3000ml和500ml转瓶体系中采用固定细胞数量连续改变病毒接种比例的方法进行试验，培养72小时左右，此时已可观察到80％以上的细胞收缩或变圆，即可收获计数。实验结果表明，0.2-0.3PFU/细胞的接种比扬州大学硕士学位论文之例较适合，可获得较高的病毒产量。 1 .3后处理:收获时弃去大部分上清，针对细胞团块采用低温磁转子高速搅拌，再冻融1一2次，或超声波裂解后，置一20℃/-70℃保存备用。经过搅拌、冻融或超声波裂解处理，细胞团块得到分散，溶液中细胞碎片分布均匀且直径很小。计数后发现，经过搅拌、冻融或超声波裂解处理后所得计数结果基本一致，而未经搅拌处理的样品的计数结果存在10一100倍差异。冻融前后计数结果显示，冻融1一3次后，病毒空斑数略有上升，冻融3次以上，病毒空斑数大幅下降。结果表明:收获后经过搅拌、冻融或超声波裂解处理有助于使产品匀质，但冻融操作次数不宜多。 1.4冻干步骤:将冷冻保存的病毒原液解冻后，按适当比例与冻干保护剂混合，以 2 mF瓶量分装于无菌小瓶中，置冻干机内冻干。冻干结束后，抽样计数检测。结果显示，冻干后制品所含的病毒抗原效价高于冻干前制品的效价。 2遗传稳定性研究为考察此重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性，将表达Hg亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至30代，取第10、20、30代重组病毒作为受检代次，进行外源基因片段的克隆与测序，以间接免疫荧光试验检验各代次在细胞培养上的表达，并以第10、20、30代重组鸡痘病毒疫苗在SPF鸡上进行免疫保护效力试验。对各代次模板进行PCR反应，分别扩增出特异的1 .7Kb外源基因片段，酶切位点（第30代）与原始代次相同;各代次外源基因序列与原始代次序列相比，仅有1个碱基可能发生变化，不涉及氨基酸的变化;免疫荧光试验显示各代次均有显著表达;各免疫组在免疫后第7、10、14、20天的Hl抗体效价（fo乡）逐渐上升;攻毒后第5天各免疫组排毒率与对照组相比差异显著，各免疫组之间无显著差异。实验结果表明:此重组载体疫苗具有较好的遗传稳定性，经过30代的传代后外源插入基因及其表达未有变化，免疫保护效力亦与原代一致。 3免疫保护效力试验应用表达Hg亚型禽流感病毒（avi

关键词：重组鸡痘病毒疫苗血凝素遗传稳定性免疫保护效力

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抗禽流感或传染性喉气管炎两种重组鸡痘病毒疫苗联合免疫的相互影响

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中国动物传染病学报 2009年第1期17卷 7-14页

作者：王云峰石星明王玫杨春富徐灵龙童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

"表达H5N1禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV-AI)疫苗"以及"表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILT)疫苗"均已在实现商业化生产。由于两种疫苗使用了相同的载体病毒,如何使用才能减少相互干... 详细信息

"表达H5N1禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV-AI)疫苗"以及"表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILT)疫苗"均已在实现商业化生产。由于两种疫苗使用了相同的载体病毒,如何使用才能减少相互干扰而产生最好的免疫效果。本研究设计了三个试验组:1)免疫rFPV-AI后间隔4周接种rFPV-ILT;2)rFPV-AI和rFPV-ILT混合后接种;3)将rFPV-AI和rFPV-ILT分别在两个翅膀同时免疫。结果表明,试验鸡接种rFPV-AI后4周接种rFPV-ILT,对传染性喉气管炎病毒WG株攻击的保护率为60%(6/10),低于rFPV-ILT单独免疫组的保护率(100%,10/10);rFPV-AI和rFPV-ILT混合后免疫组对禽流感病毒强毒攻击的保护率为80%(8/10),对传染性喉气管炎病毒强毒攻击的保护率为70%(7/10),而rFPV-AI和rFPV-ILT分两点同时接种对两种病毒攻击均能产生完全保护。本试验结果建议将这两种相同载体的重组病毒疫苗分两点同时接种以避免相互之间的干扰。

关键词：禽流感传染性喉气管炎重组鸡痘病毒疫苗联合免疫

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鸡痘疫苗对禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力的影响

鸡痘疫苗对禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力的影响

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中国微生物学会兽医微生物专委会学术年会中国畜牧兽医学会生物制品学分会第九次学术研讨会

作者：乔传玲李呈军李泽君田国彬陈化兰于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

禽流感病毒(AIV)HA和NA双基因重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡本产生100％抵抗H5N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)的攻击.而当鸡群已进行鸡痘疫苗免疫或者感染了鸡痘病毒的情况下,此重组疫苗的免疫效力如何?还不为人知,本研究首先对SPF试... 详细信息

禽流感病毒(AIV)HA和NA双基因重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡本产生100％抵抗H5N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)的攻击.而当鸡群已进行鸡痘疫苗免疫或者感染了鸡痘病毒的情况下,此重组疫苗的免疫效力如何?还不为人知,本研究首先对SPF试验鸡接种商品化的鸡痘弱毒疫苗,既而在免疫后的不同间隔时间接种重组疫苗,免疫后检测鸡群的HI抗体水平,同时用100LD<,50>的HPAIV H5N1进行攻击.结果两种疫苗同时接种和间隔在内周(或以上)时,鸡痘疫苗对重组苗的免疫效力不构成影响,对禽流感的保护仍为100％,而两次免疫的间隔时间在职、2、3周时,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响.

关键词：鸡痘疫苗禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力 DNA重组

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口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗免疫原性研究

口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗免疫原性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：马呜潇金宁一尹革芬鲁会军李昌田明尧李霄金明兰辽宁医学员畜牧兽医学院锦州 121001 中国人民解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室长春 130062 云南农业大学动物科技学院 650201 中国人民解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室长春 130062 辽宁医学员畜牧兽医学院锦州 121001

本研究通过小鼠免疫试验,对本室已经筛选到的共表达O型、A型和AsiaI型FMDV复合多表位免疫原基因OAAT与猪IL-18基因的重组鸡痘病毒vUTA-IL18-OAAT的免疫原性进行了研究,小鼠免疫试验结果表明,口蹄疫三价重组鸡痘病毒vYTA-IL18-OAAT能有... 详细信息

本研究通过小鼠免疫试验,对本室已经筛选到的共表达O型、A型和AsiaI型FMDV复合多表位免疫原基因OAAT与猪IL-18基因的重组鸡痘病毒vUTA-IL18-OAAT的免疫原性进行了研究,小鼠免疫试验结果表明,口蹄疫三价重组鸡痘病毒vYTA-IL18-OAAT能有效激发机体的细胞和体液免疫反应,与阴性对照组相比,T细胞亚类数量、CTL杀伤活性,抗O型、A型和Asia1型FMDV的特异性抗体水平差异显著。

关键词：重组鸡痘病毒疫苗口蹄疫免疫原性 IL-18基因特异性抗体

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共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究

共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究

引用

中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：张洪勇金宁一葛淑敏尹革芬马鸣潇李子健江文正复旦大学医学院解放军军需大学解放军基因工程重点实验室解放军军需大学解放军基因工程重点实验室解放军军需大学解放军基因工程重点实验室解放军军需大学解放军基因工程重点实验室白求恩医科大学解放军军需大学解放军基因工程重点实验室

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游,构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1,与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞,经RT-PCR、IFA... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游,构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1,与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞,经RT-PCR、IFA及Western blotting检测,成功获得正确表达目的蛋白的重组鸡痘病毒株vUTAL3CP1。并与FMDV重组核酸疫苗免疫小鼠实验表明,各实验免疫组均能诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫反应,其中以重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫效果好于其它实验各组。因此,本项研究可能为FMD的免疫预防探讨新的疫苗株及免疫方法。

关键词： FMDV 重组鸡痘病毒疫苗重组核酸疫苗联合免疫

来源：评论

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