检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：孙占京华北理工大学

学位级别：硕士

目的探讨血浆脂蛋白a水平与老年钙化性主动脉瓣膜疾病的关系。方法选取2015年1月至2017年12月期间,在华北理工大学附属医院住院的钙化性主动脉瓣膜疾病（calcified aortic valve disease,CAVD）患者343人作为研究对象;选取同期住院年龄... 详细信息

目的探讨血浆脂蛋白a水平与老年钙化性主动脉瓣膜疾病的关系。方法选取2015年1月至2017年12月期间,在华北理工大学附属医院住院的钙化性主动脉瓣膜疾病（calcified aortic valve disease,CAVD）患者343人作为研究对象;选取同期住院年龄、性别相匹配的,心脏超声提示无主动脉瓣膜钙化、增厚的住院患者343人为对照组。收集两组患者的一般临床资料包括性别、年龄、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、高血压病史、冠心病病史、血浆脂蛋白a[Lp（a）]、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、尿酸（UA）、血钙（Ca）、血磷（P）、凝血指标、心脏超声指标等;对比分析整理两组的一般资料,将CAVD组依据主动脉瓣峰值流速分为硬化组和狭窄组,计数资料组间比较采用χ2检验,计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,多因素分析采用非条件二分类Logistic回归分析。结果1 CAVD组Lp（a）水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;2CAVD组高血压明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;3 CAVD组与对照组比较,性别、年龄、饮酒史、吸烟史、糖尿病史、TC、TG、HDL-C、LDL-C、载脂蛋白a[Apo（a）]、载脂蛋白b[Apo（b）]、Ca、P、UA、PT、INR、PTA、D2、APTT、TT未见明显差异（P>0.05）;4 Logistic回归分析显示lp（a）与CAVD有关（OR=5.486,P<0.001）,lp（a）是CAVD的危险因素;高血压与CAVD有关（OR=1.488,P=0.018）,高血压是CAVD的危险因素;5主动脉瓣狭窄组与硬化组比较,Lp（a）水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,性别、年龄、高血压史、饮酒史、吸烟史、糖尿病史、HDL-C、LDL-C、TC、TG未见明显差异（P>0.05）;6 CAVD病变程度的Logistic回归分析显示lp（a）与病变程度有关（OR=4.544,P<0.001）,lp（a）是CAVD病变程度的危险因素;7硬化组与对照组比较,射血分数下降（P>0.05）,余指标未见明显差异（P<0.05）,狭窄组与硬化组、对照组比较,左室后壁明显增厚,射血分数明显下降,左室舒张内径明显增大,室间隔增厚,差异有统计学意义（P<0.05）。结论1血浆脂蛋白a、高血压是CAVD的危险因素。2血浆脂蛋白a是CAVD病变程度的危险因素。3本研究尚未发现吸烟、饮酒史、糖尿病史,纤维蛋白原、D-二聚体、HDL-C、TC、TG、Ca、P、尿酸、Apo（a）、Apo（b）是CAVD的危险因素。图0幅;表10个;参170篇。

关键词：脂蛋白a 钙化性主动脉瓣膜疾病主动脉瓣狭窄

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Adropin在钙化性主动脉瓣膜疾病中的作用研究

Adropin在钙化性主动脉瓣膜疾病中的作用研究

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作者：王志杰华中科技大学

学位级别：硕士

目的:探讨Adropin在钙化性主动脉瓣膜疾病(Calcific Aortic Valve Disease,CAVD)中的作用及机制,寻找CAVD的治疗新靶点。方法:通过高脂喂养Apo E基因敲除小鼠,构建小鼠CAVD模型,提取造模成功的小鼠肝脏细胞RNA进行转录组学测序分析。收... 详细信息

目的:探讨Adropin在钙化性主动脉瓣膜疾病(Calcific Aortic Valve Disease,CAVD)中的作用及机制,寻找CAVD的治疗新靶点。方法:通过高脂喂养Apo E基因敲除小鼠,构建小鼠CAVD模型,提取造模成功的小鼠肝脏细胞RNA进行转录组学测序分析。收集2020年1月至2023年1月期间于华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科诊断CAVD患者的血清标本,ELISA法检测Adropin蛋白在血清中的表达变化。Adropin干预成骨培养基(Osteogenic Medium,OM)刺激的人主动脉瓣膜间质细胞(Human Aortic Valvular Interstitial Cells,h VICs),Western Blotting法等检测成骨样分化标志蛋白ALP和Runx2的表达情况。结果:高脂喂养的小鼠肝脏RNA转录组学分析显示,Adropin基因表达水平下调。ELISA法检测发现与正常对照组相比,轻度瓣膜钙化患者血清中Adropin水平降低(p<0.01)。Western Blotting法结果显示,Adropin干预后h VICs中ALP与RUNX2表达水平下调(p<0.05),NOTCH1表达水平上调(p<0.05)。免疫荧光法结果显示Adropin与NOTCH1表达变化同步。结论:Adropin是一种重要的代谢调节蛋白。小鼠CAVD模型中肝脏Adropin基因表达下调。在瓣膜轻度钙化时,血清中Adropin的水平下降。体外细胞实验表明Adropin可能通过上调NOTCH1表达减轻h VICs的成骨样分化。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病 Adropin NOTCH1

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基于调控网络识别钙化性主动脉瓣膜疾病关键基因的研究

基于调控网络识别钙化性主动脉瓣膜疾病关键基因的研究

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2015年中国生物医学工程联合学术年会

作者：曾伟顾雨宁郑洁黎桑王光兵饶妮妮电子科技大学 610054

本文以钙化性主动脉瓣膜疾病的调控网络为研究对象,构建调控网络和筛选关键基因并分析其在疾病发生发展中的生物意义。现有研究表明,MAPK 信号通路与钙化性主动脉瓣膜疾病密切相关。因此,通过KEGG 数据库查找到MAPK 信号通路中127 个与... 详细信息

本文以钙化性主动脉瓣膜疾病的调控网络为研究对象,构建调控网络和筛选关键基因并分析其在疾病发生发展中的生物意义。现有研究表明,MAPK 信号通路与钙化性主动脉瓣膜疾病密切相关。因此,通过KEGG 数据库查找到MAPK 信号通路中127 个与该疾病相关的基因,再通过文献搜索获得21 个该疾病相关的miRNA 作为筛选模板。以127 个基因作为底模板,通过TargetScan、Ensembl、Transfac 和NCBI 数据库建立miRNA-Gene、TF-Gene、miRNA-TF 以及TF-miRNA 的关系对,然后通过建立的四种关系对构建调控网络。以度和介数为网络特征参数对关键基因进行筛选,得到BCL2、CCND1、NLK、GSK3B、PPM1A、PIK3R3、NRAS 和MAP3K1 关键基因。通过GO 分析发现这些基因大多参与细胞增殖、分化、调控和炎症反应,这些是该疾病的诱发因素。本文筛选的关键基因具有作为新型分子药物标靶的潜力。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病调控网络关键基因

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主动脉瓣膜间质细胞焦亡在钙化性主动脉瓣疾病中的作用

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精准医学杂志 2023年第2期38卷 95-99,104页

作者：宗丽娟杜占慧游福蓉王勤拯张成邢泉生青岛大学附属妇女儿童医院心脏中心山东青岛266034 青岛大学附属妇女儿童医院普外科山东青岛266034

目的体外培养主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)并构建其钙化模型,探讨细胞焦亡在钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)中的作用。方法以钙化诱导培养基诱导AVICs钙化,依据细胞处理方式分为对照组(标准培养基培养)、钙化... 详细信息

目的体外培养主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)并构建其钙化模型,探讨细胞焦亡在钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)中的作用。方法以钙化诱导培养基诱导AVICs钙化,依据细胞处理方式分为对照组(标准培养基培养)、钙化组(钙化诱导培养基培养)和抑制剂组(VX-765预处理24 h后钙化诱导培养基培养),采用CCK-8法测定各组细胞的存活率,茜素红染色检测各组细胞钙结节表达水平,采用免疫印迹法检测各组细胞中钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1以及炎症因子IL-1β、IL-18的相对表达水平。结果与对照组相比,钙化组AVICs的钙结节增多,钙化相关蛋白OPN、RunX2及细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1相对表达水平均增高(t=4.586~15.842,P<0.01);与钙化组相比,抑制剂组AVICs的钙结节减少,钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18相对表达水平均降低(t=5.789~19.227,P<0.01)。结论AVICs钙化过程中存在细胞焦亡,应用VX-765干预钙化培养基诱导的AVICs可在一定程度上抑制细胞焦亡过程。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病主动脉瓣膜间质细胞细胞焦亡炎症 VX-765

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利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间选择

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南方医科大学学报 2022年第10期42卷 1532-1538页

作者：曾婧欣苏舒文冼高鹏曾庆春许顶立南方医科大学南方医院心内科器官衰竭防治国家重点实验室广东广州510515

目的探讨利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间。方法通过向8周龄小鼠右颈总动脉插入导管,在超声引导下将导管送至主动脉瓣口处损伤主动脉瓣膜,对导管损伤主动脉瓣膜后不同时间段的C57BL6小鼠主动脉瓣膜进行比较,将... 详细信息

目的探讨利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间。方法通过向8周龄小鼠右颈总动脉插入导管,在超声引导下将导管送至主动脉瓣口处损伤主动脉瓣膜,对导管损伤主动脉瓣膜后不同时间段的C57BL6小鼠主动脉瓣膜进行比较,将小鼠分为对照组、造模后4周、造模后8周与造模后16周组,从适应性喂养至造模结束取材均给予普通饲料饮食。使用超声检测小鼠心脏短轴缩短率、主动脉瓣膜峰值流速及主动脉瓣口面积,使用苏木素-伊红染色观察小鼠主动脉瓣膜厚度变化及瓣膜组织结构变化,利用茜素红染色检测小鼠主动脉瓣膜钙盐沉积情况,使用免疫荧光方法检测瓣膜成骨相关蛋白碱性磷酸酶表达。结果小鼠从造模8周后开始出现心脏短轴缩短率明显下降。导管损伤4周、8周、16周后小鼠主动脉瓣膜明显增厚(P=0.002),4周、8周和16周比较无统计学差异;导管损伤4周、8周、16周后钙盐沉积明显增多(P<0.0001),4周、8周和16周比较无统计学差异;4周、8周、16周后成骨相关蛋白ALP指标表达量明显升高(P=0.0016)。导管损伤4周、8周和16周ALP表达量相比无统计学差异。结论在保证小鼠生存率的情况下,导管损伤主动脉瓣膜4周后的小鼠模型即可模拟钙化性主动脉瓣膜疾病病理生理改变。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病动物模型导管损伤

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ATF6在钙化性主动脉瓣膜中的表达及意义

ATF6在钙化性主动脉瓣膜中的表达及意义

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作者：田军中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

背景及目的钙化性主动脉瓣膜疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是老年病人最常见的心脏瓣膜病,钙化是其主要的特征性病理改变。瓣膜间质细胞(Valvular interstitial cells,VICs)是心脏瓣膜中的主要构成细胞,现有研究结果证实,... 详细信息

背景及目的钙化性主动脉瓣膜疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是老年病人最常见的心脏瓣膜病,钙化是其主要的特征性病理改变。瓣膜间质细胞(Valvular interstitial cells,VICs)是心脏瓣膜中的主要构成细胞,现有研究结果证实,导致瓣膜钙化的细胞学基础包括VICs凋亡导致的被动钙盐沉积以及VICs向成骨细胞样细胞表型转化的主动调控过程。有研究发现ApoE鼠等CAVD模型中内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)信号的激活,但ERS蛋白在瓣膜钙化中的调控作用尚不明确,其对VICs凋亡、表型转分化、增生的作用研究报道较少。本课题研究就是基于以上研究背景,首先探索ERS蛋白在钙化瓣膜中的表达,分析其对VICs凋亡、表型转分化等的调控作用。方法为以上目的,本研究分为以下三部分:(一)ERS蛋白在体外细胞钙化模型中的表达研究:采用Ⅱ型胶原酶的方法分离培养来源于猪的主动脉VICs。用含10 mol/L胰岛素、50μg/ml抗坏血酸、2 mmol/L磷酸二氢钠的10%FBS DMEM钙化培养基培养VICs,诱导钙化。采用茜素红染色检测细胞模型内钙盐沉积。采用Western blot检测ERS蛋白在细胞模型中的表达。(二)活化转录因子6(Activating transcription factor 6,ATF6)在钙化性主动脉瓣膜组织中的表达研究:收集我科因CAVD行主动脉瓣膜置换术患者的钙化主动脉瓣组织,心脏移植受体的正常主动脉瓣组织作为对照,采用免疫化学法检测ATF6的表达,采用TUNEL染色检测细胞凋亡,采用茜素红染色检测组织内钙盐沉积。(三)ATF6对VICs生长和表型转化的调控研究:VICs感染靶向抑制ATF6的腺病毒(Ad-shRNA-ATF6),采用实时定量PCR、Western blot检测细胞中ATF6 mRNA及蛋白表达水平。构建VICs体外细胞钙化模型,并靶向抑制细胞模型中ATF6的表达。采用茜素红染色检测细胞模型内钙盐沉积。采用CCK-8、流式细胞分析检测VICs增殖和凋亡情况。采用Western blot检测凋亡信号通路蛋白和成骨细胞表型转化标志物表达的改变。结果(一)ERS蛋白在体外细胞钙化模型中的表达研究:茜素红证实在7天细胞模型中可见大量钙盐沉积。Western blot结果表明在钙化诱导过程中,ATF6的表达自第1天起开始逐渐升高,第3天达到高峰,与0天未处理细胞相比,均具有统计学意义(P<0.05);第3天后ATF6的表达开始下降,第7天的表达量与0天未处理细胞相比,无统计学意义(P>0.05)。与ATF6的表达趋势一致,活化转录因子4(Activating transcription factor 4,ATF4)和X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,Xbp1)表达也自第1天起开始逐渐升高,第3天升到高峰后开始下降,但各组细胞的表达量与0天未处理细胞相比,无统计学意义(P>0.05)。真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic initiation factor 2α,eif-2α)、生长停滞及DNA损害可诱导蛋白34(Growth arrest and DNA damage-inducible gene 34,GADD34)表达自第1天升高后降低,磷酸化真核生物翻译起始因子2α(Phosphated eIF-2α,p-eif-2α)自第2天起开始升高,各组细胞的表达量与未处理细胞相比,无统计学意义(P>0.05)。(二)ATF6在钙化性主动脉瓣膜疾病组织中的表达研究:免疫组织化学检测表明ATF6在CAVD瓣膜和正常瓣膜中的阳性表达分别为44.30±10.70%和9.03±7.14%,两者相比具有统计学意义(P<0.05)。TUNEL染色表明CAVD瓣膜中的凋亡率为84.76±9.30%,相关分析表明ATF6的表达量与凋亡呈正相关(r=0.62,P<0.05);茜素红钙化染色结果表明,瓣膜组织多为中重度钙化,但是与ATF6表达量相关性分析并无统计学意义(P>0.05)。(三)ATF6对瓣膜间质细胞生长和表型转化的调控研究:实时定量PCR和Western blot结果均显示感染Ad-shRNA-ATF6后VICs中ATF6表达明显下调(P<0.05)。茜素红染色表明靶向抑制体外细胞钙化模型中的ATF6表达后,钙盐沉积量显著减少(P<0.05)。流式细胞检测表明ATF6干扰组和对照组的凋亡率分别为2.34±0.75%、8.56±1.08%,两者相比具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8结果表明随着培养时间的延长,VICs的生长活性增高;自第2天起,ATF6干扰组细胞的生长活性明

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病瓣膜间质细胞内质网应激活化转录因子6 细胞凋亡

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趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用研究

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中国生物工程杂志 2019年第8期39卷 7-16页

作者：朱颖范梦恬李具琼陈彬张盟浩吴静红施琼重庆医科大学检验医学院临床诊断教育部重点实验室

目的:探究趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用和机制,为钙化性主动脉瓣膜疾病的早期干预和治疗提供新思路。方法:取非钙化主动脉瓣(3例)和钙化主动脉瓣(5例),免疫组织化学染色检测成骨相关转录因子Runx2、骨桥蛋... 详细信息

目的:探究趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用和机制,为钙化性主动脉瓣膜疾病的早期干预和治疗提供新思路。方法:取非钙化主动脉瓣(3例)和钙化主动脉瓣(5例),免疫组织化学染色检测成骨相关转录因子Runx2、骨桥蛋白OPN和骨钙蛋白OCN的表达;取3例非钙化的主动脉瓣,采用胶原酶连续消化法分离人主动脉瓣膜间质细胞,观察细胞形态及生长状态,并采用细胞免疫荧光进行表型鉴定。对成骨诱导培养的人主动脉瓣膜间质细胞分别过表达和干扰趋化因子受体CX3CR1,平行设置CM组、OM组和negative control+OM组,采用qPCR和Western blot检测Runx2、OPN和OCN的表达,Western blot检测AKT和p-AKT的表达。茜素红S染色评价晚期钙结节形成情况。结果:临床标本显示钙化的主动脉瓣较非钙化的主动脉瓣高表达CX3CR1(P <0. 05);成功分离人主动脉瓣膜间质细胞,α-SMA和Vimentin阳性,vWF阴性。与CM、OM、negative control组比较,CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达上调(P <0. 05),且茜素红S染色可见明显钙结节;与CM、OM、negative siRNA control+OM组比较,si CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达下调(P <0. 05),且茜素红S染色可见钙结节减少。结论:趋化因子受体CX3CR1可能通过AKT信号通路促进人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病人主动脉瓣膜间质细胞趋化因子受体CX3CR1 成骨分化

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PGRN调控自噬对主动脉瓣膜间质细胞成骨表型转化的影响及机制研究

PGRN调控自噬对主动脉瓣膜间质细胞成骨表型转化的影响及机制研究

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作者：安利钦重庆医科大学

学位级别：博士

背景:钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)是老年人最常见的瓣膜疾病之一,主动脉瓣膜置换术是唯一有效的治疗手段,但手术风险高且近1/3的患者不能耐受,因此探究其发生机制,进行早期诊断及干预尤为重要。颗粒蛋白... 详细信息

背景:钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)是老年人最常见的瓣膜疾病之一,主动脉瓣膜置换术是唯一有效的治疗手段,但手术风险高且近1/3的患者不能耐受,因此探究其发生机制,进行早期诊断及干预尤为重要。颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)是重要的炎症调控因子,在前期研究中发现在钙化瓣膜组织中PGRN降解片段显著增加,且自噬水平异常,因此探索PGRN/GRN、自噬对瓣膜钙化的调控机制有助于揭示CAVD发生的分子机制,发现CAVD潜在的干预靶点和诊断标志物。目的:1.首先探究PGRN/GRN、自噬与主动脉瓣膜钙化之间的相关性;2.探究PGRN和其降解片段是否通过调控自噬来影响主动脉瓣膜间质细胞(valvular interstitial cells,VICs)成骨表型转化及其具体机制;3.进一步明确在主动脉瓣膜钙化过程中PGRN降解增多的关键调节点,为CAVD的早期诊断及干预提供理论依据。方法:本研究分为三个部分:1.探索PGRN/GRN、自噬与主动脉瓣膜钙化之间的临床相关性。采用PCR、Western blot和免疫组化等方法检测non-CAVD组和CAVD组,以及钙化组和钙化旁组瓣膜组织中的PGRN、自噬指标LC3、p62以及成骨指标RUNX2、OPN的表达水平,并进行相关性分析;提取猪主动脉瓣膜间质细胞并进行表型鉴定。体外诱导VICs钙化,观察PGRN/GRN、自噬及VICs成骨表型转化指标的表达,进一步验证PGRN/GRN、自噬及VICs成骨表型转化之间的相关性。2.探索PGRN及其短片段对自噬的调节作用及其机制。体外添加PGRN重组蛋白,在正常和钙化诱导两种条件下,通过Western blot和转染GFP-LC3病毒检测VICs自噬水平的变化。用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红S(ARS)染色分别检测PGRN对VICs早晚期成骨分化的影响。PGRN激活VICs自噬水平后,加入自噬小体形成抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin,WORT)和自噬溶酶体形成抑制剂巴佛洛霉素A1(bafilomycin A1,Baf A1),通过Western blot和转染GFP-LC3病毒验证PGRN对自噬的具体调控过程。在正常和钙化诱导条件下,VICs感染Ad-45KD GRN,通过ALP染色和ARS染色检测其对VICs早晚期成骨分化的影响;Western blot检测自噬指标LC3、p62及成骨指标RUNX2和OPN的表达水平,检测45KD GRN对自噬的调控作用。Western blot检测钙化瓣膜中活化的信号通路以及PGRN和45KD GRN在VICs中作用的信号通路,并通过加入相关通路的激动剂或抑制剂,进一步验证PGRN和45KD GRN对自噬的调控机制。在GRN小鼠的原代成纤维细胞中,验证PGRN对自噬的调控作用。细胞免疫荧光检测PGRN对RUNX2入核的影响。3.对主动脉瓣膜中造成PGRN降解的酶类进行测定,以寻求早期的诊断指标和干预靶点。用PCR和Western blot分析钙化与钙化旁瓣膜组织以及体外钙化诱导条件下VICs中PGRN降解酶的表达差异,从中选出差异最显著的中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)。在体外加入NE特异性抑制剂Alvelestat,通过Western blot检测其对PGRN的降解、自噬指标、VICs成骨表型转化及相关信号通路的作用。结果:1.与非CAVD组相比,CAVD组中RUNX2的基因表达显著上调。蛋白水平检测显示:与钙化旁组相比,钙化组瓣膜组织中RUNX2、OPN显著升高,同时PGRN的降解片段45KD大小的GRN片段显著增高,且p62表达显著上调。相关性分析结果显示45KD GRN的增多以及自噬水平的异常与主动脉瓣膜钙化呈正相关。分离的原代猪VICs表型鉴定结果显示Vimentin、α-SMA阳性,同时CD31阴性。在钙化诱导条件下,VICs细胞的PGRN降解增多、自噬水平受阻,同时RUNX2、OPN的基因和蛋白表达上调,ALP染色和钙盐沉积增强,进一步证实PGRN的降解及自噬水平异常与VICs的成骨表型转化密切相关。2.在正常和钙化诱导条件下,PGRN重组蛋白可显著激活VICs自噬水平,抑制RUNX2、OPN的蛋白表达,抑制ALP染色和钙盐沉积。加入WORT阻断自噬后,PGRN对自噬的活化受到显著抑制且其对RUNX2的下调作用也得到部分逆转,证实PGRN可通过激活自噬抑制VICs的成骨表型转化。加入自噬溶酶体形成抑制剂Baf A1后,Baf A1+PGRN组LC3 Ⅱ的蓄积和自噬小体均明显高于单独的Baf A1组,证实PGRN可通过促进自噬小体的形成上调自

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病颗粒蛋白前体自噬中性粒细胞弹性蛋白酶成骨表型转化

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生物信息学联合机器学习探究主动脉瓣膜钙化潜在的诊断标志物

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重庆医科大学学报 2023年第12期48卷 1493-1500页

作者：张汝益杨芳管尤涛严树涓贵州中医药大学第一附属医院优生研究中心贵阳550001 昆明市延安医院病理科昆明650051 广州市妇女儿童医疗中心产前诊断中心广州510620

目的:通过机器学习方式从免疫、干细胞、成骨3个层面寻找主动脉瓣膜钙化潜在的诊断标志物。方法:利用R语言将高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中GSE51472、GSE12644和GSE554923个数据集的数据进行均一化后合并分析,... 详细信息

目的:通过机器学习方式从免疫、干细胞、成骨3个层面寻找主动脉瓣膜钙化潜在的诊断标志物。方法:利用R语言将高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中GSE51472、GSE12644和GSE554923个数据集的数据进行均一化后合并分析,得到差异表达基因。从Amigo数据库下载免疫、干细胞、成骨相关基因集分别与差异基因取交集,得到钙化瓣膜组织中异常表达的免疫、干细胞、成骨相关基因。利用机器学习方法对差异基因进行深度学习,寻找潜在的诊断生物标志物。进行基因富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析。临床标本结合细胞学实验验证诊断标志物的应用价值。结果:3个数据集合并分析得到102个差异基因,与免疫相关的有51个,与干细胞相关的有1个,与成骨相关的有2个。GSEA分析显示无论是免疫相关基因还是干细胞、成骨相关基因均涉及免疫调控通路。多种机器学习合并分析结果显示白介素受体7(interleu-kin 7 receptor,IL7R)最具有诊断钙化性主动脉瓣病的价值,但临床标本并不支持生物信息分析结果。细胞实验显示IL7R可以促进瓣膜间质细胞增殖、成骨钙化。结论:IL7R可能不是外周血诊断钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)的标志物,但是它在CAVD疾病演变过程中可能有重要作用,因此进一步探究IL7R在CAVD中的作用很有必要。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病机器学习生物标志物生物信息

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BMP9诱导可逆永生化小鼠瓣膜间质细胞成骨能力研究

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重庆医科大学学报 2023年第4期48卷 390-397页

作者：张汝益叶紫芊左国伟宫茂源陈芳严树涓贵州中医药大学第一附属医院产科优生中心贵阳550001 重庆医科大学检验医学院重庆400016 贵阳市第二人民医院检验科贵阳550081 贵州省人民医院产前诊断中心贵阳550499

目的:建立具有快速增殖能力的可逆永生化主动脉瓣膜间质细胞系。方法:体视显微镜下利用弹簧剪夹取瓣膜组织,胶原酶消化后加入逆转录永生化病毒,利用免疫荧光鉴定细胞是否属于间质细胞,显微镜观察细胞形态,结晶紫、CCK-8和流式细胞周期... 详细信息

目的:建立具有快速增殖能力的可逆永生化主动脉瓣膜间质细胞系。方法:体视显微镜下利用弹簧剪夹取瓣膜组织,胶原酶消化后加入逆转录永生化病毒,利用免疫荧光鉴定细胞是否属于间质细胞,显微镜观察细胞形态,结晶紫、CCK-8和流式细胞周期技术检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶染色和茜素红钙盐沉积实验检测细胞成骨能力,q-PCR及Western blot检测细胞成骨标志物。结果:经光镜观察和免疫荧光鉴定,成功取到瓣膜间质细胞。加入永生化病毒后,经光镜观察和免疫荧光确认瓣膜间质细胞未发生表型改变,且在永生化的细胞中能够检测到大量SV40T(P<0.001)。结晶紫染色、CCK-8(P<0.001)和流式细胞周期结果提示永生化后的瓣膜间质细胞增殖速度变快。加入成骨诱导因子骨形态发生蛋白-9(bone morphogenetic protein9,BMP9)后永生化瓣膜间质细胞表现出较好的成骨能力,多数成骨标志物在分子层面的RNA和蛋白水平明显升高。去永生化后瓣膜间质细胞形态无明显改变,q-PCR结果显示SV40T明显降低(P<0.001),细胞增殖能力明显下降,且细胞周期被阻滞在G_(0)/G_(1)期。在BMP9诱导下去永生化瓣膜间质细胞同样具有成骨分化能力,且绝大多数成骨标志物都明显上升。结论:本研究成功建立可逆永生化瓣膜间质细胞系,BMP9可诱导其成骨分化,用于后续钙化性主动脉瓣膜疾病研究。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病瓣膜间质细胞永生化骨形态发生蛋白

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