检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：盛继群武汉大学

学位级别：博士

蝎子是古老的物种,其种类、进化史及其毒素的多态性,引起世界各国科学家极大的研究兴趣。蝎子尾腺分泌毒液,其毒液中含有多种生物活性成分,主要有由蛋白质和非蛋白质两组分组成。蝎毒的蛋白质成分主要是一类由20～80个氨基酸小分子多肽... 详细信息

蝎子是古老的物种,其种类、进化史及其毒素的多态性,引起世界各国科学家极大的研究兴趣。蝎子尾腺分泌毒液,其毒液中含有多种生物活性成分,主要有由蛋白质和非蛋白质两组分组成。蝎毒的蛋白质成分主要是一类由20～80个氨基酸小分子多肽（通称为蝎毒素）,每一种蝎子其毒液中约含有50～100种蝎毒素,存在较强的多态性变化。现已证实,蝎毒素作用的靶目标为兴奋和非兴奋细胞质膜上的离子通道,蝎毒素与通道结合后可以引起通道电流的阻断或门控动力学的改变。蝎毒素可分为:Na+通道、K+通道、Cl-通道和Ca2+通道（主要存在于骨骼肌细胞浆膜上）毒素。分离新的蝎毒素基因,是采用分子生物学方法研究蝎毒素的前提与基础。构建cDNA文库对于分离目的基因,特别是多基因家族成员的蝎毒素基因具有特别重要的价值。以中国产东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch,BmK）毒腺组织为材料,成功地构建了一个高质量的cDNA文库。随机挑取14个克隆子,用PCR方法进行鉴定,结果表明,5个克隆子均含有插入片段,大小为300～600bp。采用通用引物测序的方法,从已构建的蝎毒腺细胞cDNA文库中筛选得到一个新的537bp的cDNA序列,被命名为BmTxKS4（GenBank登记号为AY278247）。BmTxKS4的cDNA的5′和3′端非编码序列（UTR）分别长111bp和189bp;有两个加尾信号AATAAA在距poly（A）上游37bp和14bp处。此序列含有一个234bp的开放阅读框（ORF）,编码78个氨基酸,其中包括21个氨基酸残基的信号肽、11个氨基酸残基的前肽,46个氨基酸残基的成熟肽,三对二硫键。根据cDNA推测所得的氨基酸序列分别与钾离子通道蝎毒素AGTX1、AGTX2、AGTX3、KTX1、Bs6、Pi3、Pi2、BmTx3、ChTx-a和BeKm-1分别有35.5%,35.5%,35.5%,35.5%,35.5%,35.5%,30.6%,27.8%,26.1%,25.0%,22.6%,的同源性。提取蝎总DNA,根据BmTxKS4 cDNA的5′和3′端非编码序列（UTR）设计PCR引物,从蝎总DNA中克隆到BmTxKS4的全长基因。序列分析发现BmTxKS4含有

关键词： BmTxKS4 钾离子通道毒素膜片钳 BmKBT 内含子

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蛇毒的神经毒素及其对神经传递的影响

引用

海峡药学 2008年第7期20卷 1-6页

作者：王晴川刘广芬福建医科大学蛇毒研究所福州350004

蛇毒中含有200种以上的神经毒素,对神经递质的传递环节有高度特异的亲和力,能激活或阻断不同神经受体和离子通道,影响递质的释放和代谢,因此可用于受体和离子通道的研究,作为受体和离子通道鉴定和分类的科学依据,并可开发为治疗某些疾... 详细信息

蛇毒中含有200种以上的神经毒素,对神经递质的传递环节有高度特异的亲和力,能激活或阻断不同神经受体和离子通道,影响递质的释放和代谢,因此可用于受体和离子通道的研究,作为受体和离子通道鉴定和分类的科学依据,并可开发为治疗某些疾病的特效药。

关键词：蛇毒神经毒素神经传递受体突触前神经毒素突触后神经毒素烟碱型神经毒素毒蕈碱型神经毒素钾离子通道毒素胆碱酯酶抑制剂

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不同标签辅助的IBTX原核表达纯化及活性鉴定

引用

现代生物医学进展 2014年第7期14卷 1207-1211页

作者：赵志文张峥刘浩文黄智刚吴颖华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

目的:在原核体系中建立高效表达纯化IBTX(Iberiotoxin)的工艺,并比较不同标签对IBTX生物活性的影响。方法:利用引物搭桥的方法,经PCR扩增,获得IBTX编码基因,以此为模板分别构建了表达质粒PET32a(+)-IBTX、pGex-6p-1-IBTX、pDuet-MBP-IB... 详细信息

目的:在原核体系中建立高效表达纯化IBTX(Iberiotoxin)的工艺,并比较不同标签对IBTX生物活性的影响。方法:利用引物搭桥的方法,经PCR扩增,获得IBTX编码基因,以此为模板分别构建了表达质粒PET32a(+)-IBTX、pGex-6p-1-IBTX、pDuet-MBP-IBTX,并将其转入***(BL21)分别表达带有硫氧还原蛋白(TRX)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的IBTX融合蛋白,在经过亲和层析、烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶酶切、C18反向层析纯化后真空冻干得到IBTX干粉,以电生理实验检测其生物活性。结果:在三种标签帮助下通过原核体系表达出的IBTX都能够特异性的阻断大电导Ca2+激活的钾通道(BK)电流,其中MBP帮助折叠的m-IBTX活性最佳。结论:建立了IBTX在MBP标签帮助下的原核表达纯化工艺,为进一步研究蝎钾离子通道α家族神经毒素及其突变体的原核表达奠定了基础。

关键词：钾离子通道毒素 IBTX 标签蛋白 BK

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