检索结果-内蒙古大学图书馆

分子影像学杂志 2018年第2期41卷 224-228页

作者：马迪夏仁品冯志坚杨筱燕付珏兰马各富昆明医科大学第二附属医院肾脏内科云南昆明650500 昆明医科大学第一附属医院移植科云南昆明650032 昆明医科大学第二附属医院石林天奇医院检验科云南昆明650500

目的探讨随机光学重构显微镜(STORM)在外泌体观察中的应用价值,并介绍外泌体在随机光学重构显微镜下的成像原理及方法。方法实验中在肾性甲旁亢患者原代培养的甲状旁腺细胞的培养液上清中加入EXOQUICK-TC外泌体沉淀剂来获取细胞培养上... 详细信息

目的探讨随机光学重构显微镜(STORM)在外泌体观察中的应用价值,并介绍外泌体在随机光学重构显微镜下的成像原理及方法。方法实验中在肾性甲旁亢患者原代培养的甲状旁腺细胞的培养液上清中加入EXOQUICK-TC外泌体沉淀剂来获取细胞培养上清中的外泌体,将外泌体膜表面的特异性跨膜蛋白CD63作免疫荧光标记后利用随机光学重构显微镜对外泌体行超高分辨率成像并测量外泌体直径。结果实验中随机光学重构显微镜成功的对继发性甲旁亢甲状旁腺细胞原代培养液上清中的外泌体行单分子定位、直径测量及超高分辨率成像。结论因随机光学重构显微镜具有独特的光学特性并突破了光学衍射极限的限制,较传统光学显微镜,能获得20～50 nm的分辨率,可对外泌体行单分子精确定位、直径测量、超高分辨率成像。基于STORM的成像优势,相信STORM及其他超高分辨率成像技术将在外泌体及外泌体参与的生物学过程的研究中发挥重要作用。

关键词：外泌体随机光学重构显微镜超高分辨率成像

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延展显微镜在细胞膜蛋白分布研究中的应用

延展显微镜在细胞膜蛋白分布研究中的应用

引用

作者：陈凯哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

近年来,超分辨荧光显微镜不仅可以对原位细胞膜上的蛋白进行特异性标记,而且还可以达到单分子精度,实现纳米级的成像,这对于研究细胞膜上的蛋白分布特点具有重要作用。然而,细胞膜上的蛋白分布紧密,这对蛋白标记又提出了新的挑战,最近... 详细信息

近年来,超分辨荧光显微镜不仅可以对原位细胞膜上的蛋白进行特异性标记,而且还可以达到单分子精度,实现纳米级的成像,这对于研究细胞膜上的蛋白分布特点具有重要作用。然而,细胞膜上的蛋白分布紧密,这对蛋白标记又提出了新的挑战,最近提出的延展显微镜将生物样品机械性放大进而突破了光学衍射,这就使得原本排列紧密的生物分子距离增加。本论文将延展显微镜（Expansion microscopy,ExM）与随机光学重构显微镜（Stochastic optical reconstruction microscopy,STORM）两种技术相结合,通过对扩展后的细胞膜上蛋白进行STORM成像,研究细胞膜上蛋白质的分布特点。采用延展显微镜操作方法将A549-GFP细胞黏附于凝胶上,利用转盘激光扫描共聚焦显微镜对凝胶扩展前后的细胞进行成像对比。结果显示,A549-GFP细胞随着凝胶的扩展,细胞也随之增大。细胞的增大倍数与扩展溶液中离子含量以及扩展时间都有关系,在去离子水中,细胞可获得最大倍数的扩展,各方向可达2.51±0.47倍。为了对细胞膜上蛋白质进行观察分析其分布特点,本论文分析对比了多种不同思路来制备扩展后的细胞膜,最终发现将细胞膜与凝胶共价靶向相连后,可以在扩展后的凝胶上撕取扩展后的细胞膜。利用上述制备的扩展后细胞膜经抗体特异性标记后,使用dSTORM进行成像发现,扩展后的细胞膜上Band III蛋白定位点密度从475.4±27.73μm-2减小到386.9±40.86μm-2,簇密度从1.373±0.0898μm-2减少到1.126±0.1066μm-2,扩展前较大的蛋白簇变小,细胞上蛋白簇的平均面积从11866±649.8 nm2减少到5749±546.4 nm2,簇内定位点数也减少,簇内平均点数140.1±9.927变为116.1±6.737。单个蛋白间距离也增加从47.61±2.62 nm变为77.81±5.21 nm。利用dSTORM对RNA aptamer标记的细胞膜外侧EpCAM蛋白进行成像也发现相同的结果,随着凝胶的扩展,细胞膜上蛋白簇的直径变小,簇内点数变少。而单个蛋白间距离增加,扩展前39.53±3.53 nm增加到扩展后92.11±6.75 nm,扩大了2.3倍。比抗体而言,RNA aptamer体积小,标记效率更高,荧光探针扩展后距离也增加更大,更有利于成像。这一研究成果证实延展显微镜和单分子定位显微镜两种超分辨显微镜的联合使用,对于研究细胞膜上蛋白的分布特点,阐明蛋白簇的形态结构具有重要意义。

关键词：凝胶延展显微镜随机光学重构显微镜细胞膜蛋白

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基于艾里光片照明的随机光学重构显微系统的研制

引用

工业控制计算机 2020年第7期33卷 72-74页

作者：李鑫王宇键中国科学技术大学精密机械与仪器系安徽合肥230027 中国科学技术大学合肥微尺度物质科学国家实验中心安徽合肥230027

基于单分子定位的随机光学重构显微镜(STORM)是观察亚细胞结构的重要工具,但是在实际应用中往往会受到多方面的限制。光片照明显微镜因为具有快速、高对比度、光损伤低等优点,在近些年也得到了快速的发展。但是传统的高斯光片照明因为... 详细信息

基于单分子定位的随机光学重构显微镜(STORM)是观察亚细胞结构的重要工具,但是在实际应用中往往会受到多方面的限制。光片照明显微镜因为具有快速、高对比度、光损伤低等优点,在近些年也得到了快速的发展。但是传统的高斯光片照明因为会快速的发散而使成像的视野受到了限制,而艾里光束作为一种无衍射光束,表现出良好的传播不变性,应用在光片照明显微镜中可以获得更大的视野。研制了一套基于艾里光片照明的随机光学重构显微系统,并在100×100μm视野范围内实现对Thy1-YFP小鼠脑片进行连续光学切面的二维超分辨成像。

关键词：随机光学重构显微镜艾里光束光片照明

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