检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理学报 2001年第6期33卷 696-702页

作者：金静华余应年钱羽力浙江大学医学院病理生理教研室浙江大学医学院病理生理教研室杭州310031

用mRNA差异显示和反义技术筛选到一个片段 (片段 9)相关基因 (fragment 9relatedgene ,FNR基因 )具有抑制甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱发的哺乳类细胞非定标性突变发生的功能。为研究FNR基因的功能机制 ,利用双向凝胶电泳结合相应的 2D分... 详细信息

用mRNA差异显示和反义技术筛选到一个片段 (片段 9)相关基因 (fragment 9relatedgene ,FNR基因 )具有抑制甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱发的哺乳类细胞非定标性突变发生的功能。为研究FNR基因的功能机制 ,利用双向凝胶电泳结合相应的 2D分析软件比较反义阻断FNR基因的Vero pM amp-9-细胞和转染空载体的对照细胞Vero pM amp-在MNNG处理后细胞蛋白质组的表达差异。分析结果显示有 12个点仅在Vero pM amp-细胞中检测到 ,2个点仅在Vero pM amp- 9-细胞中检测到 ,统计结果显示有 2 4个点Vero pM amp- 9-细胞表达量高于Vero pM amp-细胞 (P <0 .0 5 ) ,其中有 7个点表达量高于 5倍以上 .说明该基因被反义阻断后有一系列基因表达水平的改变 ,同时也为进一步鉴定与识别非定标性突变发生相关的蛋白质及相应的基因提供线索

关键词：双向凝胶电泳蛋白质组差异表达突变非定标性

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反义技术分离筛选抑制Vero细胞非定标性突变的cDNA片段

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科学通报 1999年第4期44卷 393-398页

作者：胡文蔚余应年陈星若宋韬谢海洋浙江医科大学病理生理教研室杭州310031

甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)可诱发猴肾Vero细胞的遗传不稳定 ,在发生表达改变的表达序列标识 (EST)中 ,筛选到 1个片段 (片段 9) ,它的相关基因表达被阻断后 ,MNNG诱发的非定标突变率显著增高 (P <0 .0 5 ) .表明其相关基因的编码产物... 详细信息

甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)可诱发猴肾Vero细胞的遗传不稳定 ,在发生表达改变的表达序列标识 (EST)中 ,筛选到 1个片段 (片段 9) ,它的相关基因表达被阻断后 ,MNNG诱发的非定标突变率显著增高 (P <0 .0 5 ) .表明其相关基因的编码产物具有维持遗传稳定性 ,抑制哺乳类细胞非定标突变发生的功能 .

关键词：反义RNA 突变非定标性遗传不稳定 Vero细胞

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哺乳类细胞非定标性突变机制的研究

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健康研究 1997年第4期26卷 1-7页

作者：孙雪敏余应年陈星若杭州医学高等专科学校预防医学教研室 310012 浙江医科大学病理生理学教研室 310031

非定标性突变是发生在DNA损伤剂攻击部位之外的突变，其在哺乳类细胞的形成机制是一个亟待解决的课题。本文作为系统研究的一部分，首先观察化学诱变剂甲基硝基硝胍（MNNG）引起的非洲绿猴肾vero细胞非定标性突变率的时相变化，继而在... 详细信息

非定标性突变是发生在DNA损伤剂攻击部位之外的突变，其在哺乳类细胞的形成机制是一个亟待解决的课题。本文作为系统研究的一部分，首先观察化学诱变剂甲基硝基硝胍（MNNG）引起的非洲绿猴肾vero细胞非定标性突变率的时相变化，继而在突变率最高时点分别以RNA合成抑制剂和蛋白质合成抑制剂阻断基因转录和翻译，结果发现前者能使MNNG引起的非定标突变率下降到对照水平，而后者反而使突变率大大增高。提示非定标性突变形成过程中可能发生基因表达改变，并提出引起这种改变的细胞信号传导通路假设和今后的研究方向。

关键词：突变非定标性哺乳类细胞甲基硝基亚硝胍基因表达

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MNNG诱导猴肾vero细胞中的非定标性突变

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癌变．畸变．突变 1993年第2期5卷 1-6页

作者：张小山余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州310031

本研究用甲基硝基亚硝(MNNG)单独处理猴肾细胞后移去残余的诱变剂,然后将穿梭质粒pZ189(含有靶基因supFtRNA基因)引入细胞中复制,并在大肠杆菌MBM7070中筛选突变子。结果显示:0.2μmol/L MNNG处理组的突变频率较自发突变频率增加了3.1倍... 详细信息

本研究用甲基硝基亚硝(MNNG)单独处理猴肾细胞后移去残余的诱变剂,然后将穿梭质粒pZ189(含有靶基因supFtRNA基因)引入细胞中复制,并在大肠杆菌MBM7070中筛选突变子。结果显示:0.2μmol/L MNNG处理组的突变频率较自发突变频率增加了3.1倍,而0.2和2μmol/L MNNG处理组点突变频率分别为12.2×10^(-4)(43/35376)和6.2×10^(-4)(22/35712),比自发点突变频率2.1×10^(-4)(10/47741)分别增加了5.8倍和2.9倍,其卡方检验的P值均小于0.01。本研究首次证实了哺乳类细胞中存在着非定标性实变。

关键词：非定标性突变穿梭质粒 MNNG 质粒

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运用反义策略对人的两个突变相关基因hMMS2和CROC-1功能的初步研究

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作者：陈建明浙江大学

学位级别：博士

细胞遗传不稳定性（genetic instability）是存在于人类遗传疾病及肿瘤中的一种重要现象，可能在其发生中起主导作用。环境致癌性理化因子可诱发细胞遗传不稳定性。我们的研究发现化学致癌物MNNG可在哺乳动物细胞中诱发以非定标性突... 详细信息

细胞遗传不稳定性（genetic instability）是存在于人类遗传疾病及肿瘤中的一种重要现象，可能在其发生中起主导作用。环境致癌性理化因子可诱发细胞遗传不稳定性。我们的研究发现化学致癌物MNNG可在哺乳动物细胞中诱发以非定标性突变（nontargeted mutation）为特征的遗传不稳定性，并且认为可能是通过DNA损伤及非DNA损伤途径激活信号转导系统而诱导细胞内众多基因的表达发生改变，致使细胞内DNA聚合酶酶谱发生变化启用了低保真度的DNA聚合酶，从而导致细胞遗传不稳定性的形成。近年来的研究发现生物体细胞内存在有DNA损伤耐受机制，并且发现其实质就是DNA跨损伤合成（translesion synthesis，TLS）。自1996年以来，已在原核及真核生物细胞中陆续发现了多种参与跨损伤DNA合成的DNA 聚合酶，这类跨损伤合成酶能以无误（error-free）和/或易误（error-prone）（致突变，mutagenic）方式跨越（bypass）模板链上的DNA损伤，且大多数成员其复制保真度低下，缺乏3’→5’校正（proofreading）功能。 MMS2基因编码产物是酿酒酵母（***）细胞内无误性跨损伤DNA 合成旁路中的一个调节因子。MMS2基因的编码产物是一泛素缀合酶样蛋白（ubiquitin-conjugating enzyme-like protein，Ubc-like protein），其氨基酸序列及二、三级结构类似于泛素缀合酶（ubiquitin-conjugating enzyme，UBC，E2），但它由于缺乏关键性的一个半胱氨酸残基而不具备泛素缀合酶的泛素缀合活性。泛素缀合途径参与细胞的多种代谢过程，包括DNA损伤修复、细胞周期调控及应激反应等。泛素缀合酶样蛋白在体内可能以E2酶显性负变异体（dominant negative variant）的形式起作用，它可能是蛋白泛素化的新的调节因子。MMS2基因编码产物介导了酵母细胞内的二个分别以RAD5 和 RAD30为代表的无误性跨损伤 DNA合成旁路途径。研究发现酵母 mmsZ 基因无功效突变株对甲基甲磺酸及UV中度敏感，其自发突变率明显升高。 mmsZ基因突变株不影响REV3介导的易误性旁路途径，酵母mmsZ基因突变株表现为REV3依赖性增变表型。 hMMSZ、CROC－1是近年在人细胞中找到的两个与芽生酵母MMSZ基因同源的新基因，它们的编码产物也是泛素缀合酶样蛋白，与酵母MMSZ 基因编码产物分别具有约 50％和 75％的氨基酸序列相似性。已有的人体细胞研究资料提示，CROC－I基因可能通过调控细胞分化及改变细胞周期相的分布状态米参与人体细胞的癌变过程，它可能是人细胞的一个癌基因。 hMMSZ基因目前还无直接的人体细胞研究资料。但却发现hMMSZ和 CROC－1基因两者都能功能性补救酵母mmsZ基因缺陷株对烷化剂MMS及 UV的敏感性及自发性突变，并且还发现hMMSZ和酵母MMSZ基因两者都能在Rat－l细胞短暂共转染试验中转录檄活CghS－CAT报告基因。因此，推测hMMSZ、CROCI基因与酵母MMSZ基因之间功能保守。本研究是根据我们的遗传不稳定性形成机制理论结合酵母同源基因 MMSZ的功能而提出的，关键是为了研究hMMSZ、CROC．I基因与MtNNG 诱发的以非定标性突变为特征的人细胞遗传不稳定性形成之间的关系。为此，本研究运用反义策略分别构建了可诱导表达hMMSZ、CROCj基因反义RNA（antisense RNA）的真核细胞表达质粒，通过转染人羊膜FL细胞，分别建立可诱导反义阻断hMMy。CROC－1基因功能的人FL－hMMSZ－。 FL－CROC、广细胞系，以此作为实验模型，研究hMMSZ、CROC－1基因的一系列生物学功能。 hMMSZ、CROCI基因反义RNA表达质粒的构建用限制性内切酶分别从重组有hMMSZ、CROC－1基因全长C洲A序列的克隆质粒呷S十。 pBS－CIB上切出包含相应靶基因整个开放阅读框的CDNA片断，用修饰酶将切出的目的片断两端切平或补平，透析袋回收纯化目的片段。再用连接酶在已切平或补平的目的片断两端连上Sail连接于，经限制性内切酶Sal 酶切使目的片段两端生成Sail粘性末端，最后将目的片段分别克隆到改建的真核细胞地塞米松诱导表达载体pMAMneo－amp”的Sail位点上。通过限制性内切酶酶切图谱（Restriction map）分析，筛选出反向插入的重组质粒。构建好的 hMMSZ重组质粒经 Nhe、BstX双酶切后得到 553hp及 8．7 kb 2 条带，此即为反

关键词：基因 hMMS2 CROC-1 人羊膜FL细胞反义RNA 泛素缀合酶样蛋白跨损伤合成 DNA聚合酶基因克隆限制性内切酶逆转录-聚片酶链式反应定量逆转录-聚合酶链式反应序列分析穿梭质粒非定标性突变遗传不稳定性细胞分裂基因表达 DNA修复

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