检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈晓东福建中医学院

学位级别：博士

目的：在细胞和分子水平观察体外培养的大鼠关节软骨细胞退变老化以及鹿茸多肽对这一变化的影响，并对软骨细胞复制性老化的机制以及鹿茸多肽的抗老化作用机制进行初步探讨。方法：1．采用酶消化法获取大鼠关节软骨细胞，应用台盼蓝排... 详细信息

目的：在细胞和分子水平观察体外培养的大鼠关节软骨细胞退变老化以及鹿茸多肽对这一变化的影响，并对软骨细胞复制性老化的机制以及鹿茸多肽的抗老化作用机制进行初步探讨。方法：1．采用酶消化法获取大鼠关节软骨细胞，应用台盼蓝排斥试验检测获取的软骨细胞活性。2．对软骨细胞退变老化进行观察，采用相差显微镜观察其生长情况，透射电镜观察细胞结构，阿力新蓝染色检测胞外基质硫酸GAG含量和结构，免疫细胞化学法和RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原鉴定软骨细胞，以MTT比色法描绘生长曲线、检测生长状态，组化法检测老化相关β-半乳糖苷酶，流式细胞仪分析细胞周期和增殖指数。3．将P3软骨细胞分为空白对照组、鹿茸多肽不同浓度组、硫酸氨基葡萄糖不同浓度组进行传代培养，同时以P2代软骨细胞为对照组，进行组化检测老化相关β-半乳糖苷酶，阿力新蓝染色检测胞外基质硫酸GAG含量和结构，MTT比色检测增殖，免疫细胞化检测PCNA和Ⅱ型胶原，RT-PCR检测Ⅱ型胶原、Aggrecan蛋白，流式细胞仪分析细胞周期和增殖指数等方法，对鹿茸多肽抗软骨细胞退变老化进行分子生物学研究。4．将连续三代P2、P3、P4代软骨细胞及鹿茸多肽干预后的P4代软骨细胞进行老化机制研究。采用免疫细胞化检测p16、pRb、E2F、CyclinD、CDK4等因子表达水平，TRAP—ELISA检测端粒酶活性，进而考察软骨细胞老化过程中各因子的变化，同时考察鹿茸多肽对这一过程的作用。结果：1．酶消化法软骨细胞的分离培养可以获得大量活性优良的软骨细胞，经鉴定可以表达硫酸GAG、Ⅱ型胶原。2．从P4代开始，软骨细胞老化相关β-半乳糖苷酶表达大幅度提高，细胞停滞于G1期，增殖能力减弱，出现去分化，证明软骨细胞开始退变老化。3．鹿茸多肽可以抑制老化相关β-半乳糖苷酶的表达、促进鼠软骨细胞增殖、减少G1期细胞含量、促进软骨细胞表型等，可以抑制软骨细胞退变老化，其抗软骨细胞退变老化作用优于硫酸胺基葡萄糖。4．在软骨细胞退变老化过程中，调控细胞周期和生长的因子表达出现如下变化：p16↑—pRb↑—E2F↓—CyclinD↑—CDK4。5．鹿茸多肽可以逆向调控老化相关调控因子的表达。结论：1．酶消化法软骨细胞的分离培养可以提供良好的软骨细胞。2．体外培养软骨细胞P4代开始老化。3．鹿茸多肽具有显著的抗软骨细胞退变老化作用，其作用强于硫酸胺基葡萄糖。4．在软骨细胞退变老化过程中，老化相关调控因子出现如下变化：p16↑—pRb↑—E2F↓—CyclinD↑—CDK4↓—端粒酶↓。5．鹿茸多肽鹿茸多肽可能通过下调软骨细胞p16、pRb、CyclinD的表达、上调软骨细胞E2F、CDK4、端粒酶的表达来实现其抗软骨细胞退变老化的作用。

关键词：骨性关节炎/中药疗法软骨细胞/病理生理学软骨细胞/药物作用老化/病理生理老化/药物作用

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鹿茸多肽促进软骨细胞增殖机制的初步探讨

鹿茸多肽促进软骨细胞增殖机制的初步探讨

引用

作者：邓凌霄福建医科大学

学位级别：硕士

目的通过研究相关信号传导通路中的关键分子,如受体TPK,立早基因c-fos基因,细胞周期相关激酶等在细胞和分子水平探讨鹿茸多肽促进软骨细胞增殖的机制,为鹿茸多肽在软骨损伤组织工程修复应用提供实验依据。有利于更好的开发利用该药。研... 详细信息

目的通过研究相关信号传导通路中的关键分子,如受体TPK,立早基因c-fos基因,细胞周期相关激酶等在细胞和分子水平探讨鹿茸多肽促进软骨细胞增殖的机制,为鹿茸多肽在软骨损伤组织工程修复应用提供实验依据。有利于更好的开发利用该药。研究结果可对软骨细胞增殖相关细胞信号途径进行验证。方法1以胰酶胶原酶消化法获取兔软骨细胞进行培养。2采用相差显微镜观察其生长情况,MTT法描绘生长曲线。3以不同浓度的鹿茸多肽(PAP)刺激软骨细胞增殖,48小时后用MTT法观察细胞增殖情况。4再将实验细胞分成空白对照组,鹿茸多肽组,酪氨酸受体激酶阻断剂Genistein与PAP共同刺激的软骨细胞组和单纯Genistein组。用MTT法和流式细胞仪观察Genistein对PAP增殖情况及生长周期的影响。用免疫组化SABC法检测细胞周期蛋白cyclinA在PAP作用下的表达变化。RT-PCR法检测原癌基因c-fos mRNA表达。结果PAP作用下c-fos mRNA与cyclinA表达增加,S期的细胞比例增高,明显的促进软骨细胞增殖。Genistein作用后PAP的促增殖作用受到明显的抑制。结论鹿茸多肽可能通过酪氨酸受体蛋白激酶介导,作用下游的信号,引发立早基因c-fos表达,促进cyclinA的表达,引起更多的细胞进入有丝分裂期,从而促进软骨细胞增殖。鹿茸多肽在软骨修复组织工程中有较好的应用前景。

关键词：骨性关节炎/中药疗法软骨细胞/药物作用软骨细胞/增殖鹿茸多肽/药物作用受体酪氨酸激酶/阻滞剂原癌基因 c-fos 细胞周期蛋白 CyclinA Genistein

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骨炎定促进血管内皮细胞增殖的血清药理学研究

引用

广州中医药大学学报 2006年第3期23卷 245-248页

作者：曹燕明徐海波张薇陈基长广州医学院第二附属医院骨外科广州510260 广州中医药大学研究生广州510405 广州中医药大学第一附属医院骨伤科广州510405

【目的】观察补肾益气活血方骨炎定对血管内皮细胞增殖的影响。【方法】将新西兰兔随机分为空白组和骨炎定低、中、高剂量组（剂量分别为2，5、5、10g/kg）；以骨炎定高剂量灌胃给药，连续7d，于最后1次给药后0，5、l、1．5、2、2，5、3... 详细信息

【目的】观察补肾益气活血方骨炎定对血管内皮细胞增殖的影响。【方法】将新西兰兔随机分为空白组和骨炎定低、中、高剂量组（剂量分别为2，5、5、10g/kg）；以骨炎定高剂量灌胃给药，连续7d，于最后1次给药后0，5、l、1．5、2、2，5、3、3．5、4h分别取血，分离含药血清，作用于人脐静脉内皮细胞，以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同时相的骨炎定含药血清对血管内皮细胞的增殖作用；并取给药后2h含药血清，部分灭活，比较灭活血清与不灭活血清对血管内皮细胞增殖的影响，以及检测不灭活含药血清不同作用时间（12、24、36h）对内皮细胞增殖的影响；以骨炎定低、中、高剂量灌胃给药，连续7d，取最后1次给药后2h含药血清，观察不同剂量骨炎定对血管内皮细胞增殖的影响。【结果】高剂量骨炎定给药后0．5～4h制备的含药血清对血管内皮细胞增殖均有显著促进作用（均P〈0．01），其中以给药后2h者作用最强；灭活与不灭活血清均对血管内皮细胞增殖具有促进作用（P〈0．01），且后者作用强于前者（P〈0．05）；不灭活含药血清作用12、24、36h后均对血管内皮细胞增殖具有促进作用（P〈0．01），且呈时效关系；低、中、高剂量骨炎定含药血清均对血管内皮细胞具有促进作用（P〈0．01），并呈量效关系。

关键词：骨性关节炎/中药疗法骨炎定/药物作用细胞培养兔

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