检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：齐迎春中国人民解放军医学院

学位级别：博士

背景与目的：骨骼肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）损伤是临床常见的病理生理过程，缺血部位的循环重新建立后，局部组织细胞的结构、功能损伤可能会进一步加重，还将导致多种远隔脏器的损伤，甚至引起全身炎症反应综合症（sys... 详细信息

背景与目的：骨骼肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）损伤是临床常见的病理生理过程，缺血部位的循环重新建立后，局部组织细胞的结构、功能损伤可能会进一步加重，还将导致多种远隔脏器的损伤，甚至引起全身炎症反应综合症（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）、器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS)，危及患者生命。肺是最易受损的远隔器官之一，肺损伤是骨骼肌IR、下肢严重创伤的常见并发症，严重时可出现急性肺损伤(acute lung injury，ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distresssyndrome，ARDS)，与危重患者的高病死率明显相关。骨骼肌缺血再灌注后肺损伤的发生机制错综复杂，可能涉及炎症反应、水肿、氧化应激、神经体液因子的激活、免疫紊乱以及硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）/胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)体系的下调、肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renninangiotensin aldosterone system，RAAS）的激活等多个环节，共同作用导致肺功能的急剧减退。然而骨骼肌缺血再灌注后肺损伤的早期诊断及治疗并不理想，其中的免疫炎性损伤、水代谢障碍机理，以及与H2S/CSE体系、RAAS的关系尚未明确，一直都是临床及科研工作研究的热点。本研究通过：一、以我院双侧全膝关节置换术患者为研究对象，联合采用Calra细胞分泌蛋白(Clara cell secretionprotein, CC16)及肿瘤坏死因子α (Tumor necrosis factor, TNF α)、白介素(Interleukin, IL)中IL-1β、IL-6、IL-8炎性因子水平作为肺损伤外周血标记物，探讨双侧全膝关节置换术后炎性损伤及肺泡-毛细血管膜受损在肺损伤过程的作用。二、在双膝关节置换术临床观察的基础之上，建立大鼠后肢IR及复合创伤模型，模拟止血带所致的缺血再灌注及双膝关节置换术中骨及软组织的复合创伤的病理生理过程，观察单纯IR及复合创伤所致肺损伤的程度，及肺组织损伤标记物CC16水平的差异，同时关注水通道蛋白1(Aquaporins1，AQP1)、水通道蛋白5(Aquaporin5，AQP5)及TLR4(Toll-like receptors4)-髄样分化初级反应基因88(Myeloid differentiation primary-response gene88, MyD88)-核因子κB(nuclearfactor-κB, NF-κB)通路的表达，进一步探讨骨骼肌缺血再灌注及复合创伤后肺组织免疫炎性反应、肺组织水转运障碍的机制。三、给予硫氢化钠(sodium hydrosulfide, NaHS)及炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine, PPG)干预肺组织内源性H2S水平，或给予螺内酯拮抗醛固酮（aldosterone，Ald）受体，深入寻求缺血再灌注损伤过程中介导肺组织损伤的关键分子和信号通路，探索干预及治疗肺损伤的可行、有效的靶点。方法：第一部分：行双膝关节置换手术病人15例，以Elisa或Liminex观察术前、术后4h、术后12h外周血肺泡-毛细血管膜损伤的特异性标记物CC16及TNFα、IL-1β、IL-6、IL-8炎性损伤标记物变化。第二部分：雄性Wistar大鼠22只，制备大鼠双侧后肢IR模型及后肢复合创伤模型，随机分为3组，即①正常对照组(n=8)；②IR组(n=8)；③复合创伤组(n=6)。观察肺组织HE染色及电镜结果、以Real-time PCR法检测肺组织CC16mRNA表达来评估肺损伤程度；计算肺组织湿/干重比值，采用免疫组化、Real-time PCR方法Western-blot、Real-time PCR方法检测肺组织AQP1、AQP5的表达，评价肺水肿的形成，探讨水转运障碍机制；以类似方法检测TLR4-Myd88-NF-κB通路mRNA及蛋白水平的变化，探究肺组织免疫炎性损伤机制。第三部分：雄性Wistar大鼠40只，制备大鼠双侧后肢IR模型，随机分为5组，每组8只，即①正常对照组；②IR组；③IR+NaHS组：IR模型制作前腹腔注射NaHS0.78mg/kg；④IR+PPG组：IR模型制作前腹腔注射PPG60mg/kg；⑤IR+螺内酯组：IR模型制作前每天予螺内酯20mg/kg灌胃，共持续6天，评价肺损伤及肺水肿程度，采用免疫组化、Real-time PCR，以及Western-blot方法检测肺组织AQP1、AQP5的表达，以及TL

关键词：骨骼肌缺血再灌注硫化氢醛固酮 Toll样受体4 水通道蛋白

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骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的免疫机理及调控研究

骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的免疫机理及调控研究

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作者：陈雯中国人民解放军医学院

学位级别：博士

背景与目的：四肢手术如全膝关节置换术等使用止血带等可引起骨骼肌缺血再灌注损伤并通过炎症反应氧化应激等途径引起远隔重要器官甚至全身多器官损伤，其中以心血管系统的损伤最为重要。我们前期对骨骼肌缺血再灌注心肌损伤的机制进行... 详细信息

背景与目的：四肢手术如全膝关节置换术等使用止血带等可引起骨骼肌缺血再灌注损伤并通过炎症反应氧化应激等途径引起远隔重要器官甚至全身多器官损伤，其中以心血管系统的损伤最为重要。我们前期对骨骼肌缺血再灌注心肌损伤的机制进行了初步研究，发现炎细胞在心肌组织的聚集活化、全身及心肌局部炎性细胞因子的激活、过度的氧化应激及氧化－抗氧化体系的失衡、醛固酮的持续激活是骨骼肌缺血期及再灌注期心肌损伤的重要病理学基础，但其中的免疫调控机制还不是十分清楚。近来研究发现以高迁移率族蛋白B1（high-mobility groupbox protein1，HMGB1）及Toll样受体4（Toll-like receptor，TLR4）激活为特征的固有免疫系统激活在心、肺、肝、肾等脏器缺血再灌注损伤中具有重要作用。髄样分化初极反应基因88（Myeloid differentiation primary-response gene88，MyD88）是TLR4主要的衔接蛋白，TLR4和MyD88结合后可以激活下游的核因子-kB（NF-kB）信号通路，促发炎症反应。而HMGB1-TLR4-MyD88-NF-kB信号通路在骨骼肌缺血再灌注致远隔心肌损伤中的作用还不清楚，也未见研究报道。本研究通过：一、观察全膝关节置换术后患者单核细胞和中性粒细胞TLR4表达及血浆炎性细胞因子IL-6的变化，以及手术后细胞免疫、体液免疫及心肌损伤指标TnI的变化，明确全膝关节置换术致心肌损伤的作用及术后免疫功能的改变。二、观察HMGB1-TLR4-MyD88-NF-kB信号通路以及炎性细胞因子IL-6、IL-10、IL-17HMGB1在大鼠骨骼肌缺血再灌注心肌细胞损伤中的作用，及H2S和螺内酯（Spiron）对该信号通路及炎性细胞因子的调控作用，进一步深入研究骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的心肌局部免疫调控变化，并寻求有效的干预途径。同时观察HMGB1-TLR4-MyD88-NF-kB信号通路以及炎性细胞因子IL-6、IL-10、IL-17在大鼠骨骼肌缺血再灌注合并骨折及软组织创伤后心肌损伤中的作用，对严重的肢体复合伤造成心肌损伤的免疫机理进行初步探讨。方法：第一部分：双膝关节置换（术中须用止血带）手术病人15例，观察时间点：术前、术后4h、术后12h，采用自身对照研究。观察患者手术前后血浆肌钙蛋白-I（TnI）及IL-6、IgG、IgM、IgA水平的变化，利用流式细胞学技术观察患者手术前后淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及单核细胞和中性粒细胞TLR4表达的变化。第二部分：雄性Wistar大鼠46只，应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血再灌注模型，随机分为6组，除IR+创伤组有6只大鼠外，其余各组均有8只大鼠：(1) C组：正常对照组。(2)IR组：缺血4小时再灌注4小时组。（3）IR+创伤组：大鼠双下肢结扎后，制造骨骼肌缺血再灌注加右股骨骨折及软组织损伤的复合创伤模型。骨骼肌缺血时间和再灌注时间同IR组。（4）IR+NaHS组：结扎前及再灌注前腹腔注射H2S供体硫氢化钠（NaHS）0.78mg/kg。（5）IR+PPG组：结扎前及再灌注前腹腔注射CSE酶抑制剂炔丙基甘氨酸（DL-propargylglycine，PPG）60mg/kg。（6）IR+Spiron组：结扎前每天给予Spiron (20mg/kg)灌胃持续6天。观察各组大鼠心肌细胞凋亡的改变及血浆心肌酶TnI的变化，观察大鼠血浆及心肌IL-6、IL-10、IL-17、HMGB1水平的变化，以Western Blot方法检测大鼠心肌HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κBp65、P-NF-κBp65蛋白含量，以Real time PCR方法检测大鼠心肌HMGB1、TLR4、MyD88mRNA表达，以免疫组化法观察大鼠心肌TLR4、P-NF-κBp65的表达。结果：第一部分：全膝关节置换术后4小时血浆单核细胞及中性粒细胞表面TLR4表达、IL-6、TnI水平较术前明显上升(P<0.05)，炎性细胞因子IL-6水平术后12小时较术后4小时继续显著上升(P<0.05)，血浆单核细胞及中性粒细胞表面TLR4表达及TnI水平术后12小时持续处于高水平，较术后4小时没有继续上升（P>0.05）。全膝关节置换术后12小时T淋巴细胞亚群CD4+的数量及CD4+/CD8+细胞比值明显下降(P<0.05)。全膝关节置换术后IgG、IgM、IgA水平没有明显变化（P>0.05）。第二部分：与正常对照组比较，骨骼肌缺血再灌注组大鼠血浆TnI水平及心肌凋亡指数明显升高，血浆及心肌IL-6、IL-10、IL-17、HMGB1水平显著上升，心肌HMGB1、TLR4、MyD88、P-NF-κBp65蛋白含量明显上升，心肌HMGB1

关键词：骨骼肌缺血再灌注心肌损伤免疫硫化氢醛固酮

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骨骼肌缺血再灌注致心肌损伤蛋白质组学研究

骨骼肌缺血再灌注致心肌损伤蛋白质组学研究

引用

作者：曾源军医进修学院解放军总医院军医进修学院

学位级别：博士

研究目的 　　差异蛋白质组学为我们提供了全面、系统了解创伤应激心肌损伤表达差异的工具。为深入探讨骨骼肌缺血再灌注创伤致心肌损伤的生物学机制，本研究采用蛋白质组学技术，较全面、高通量地筛选鉴定骨骼肌缺血... 详细信息

研究目的 　　差异蛋白质组学为我们提供了全面、系统了解创伤应激心肌损伤表达差异的工具。为深入探讨骨骼肌缺血再灌注创伤致心肌损伤的生物学机制，本研究采用蛋白质组学技术，较全面、高通量地筛选鉴定骨骼肌缺血再灌注心肌损伤的相关蛋白质，旨在发现缺血再灌注心肌损伤中尚未研究报道的蛋白及其在心肌损伤过程中的作用。 　　研究方法 　　1、建立大鼠骨骼肌缺血再灌注心肌损伤模型：雄性Wistar大鼠20只，分为2组：假手术组（sham)10只，缺血再灌注(IR)组（缺血4小时、再灌注4小时)10只。实验结束后，下腔静脉取血，观察指标：血清CK,CYCS；肌钙蛋白T；心肌HE染色；心脏超声对模型动物的心脏功能进行评价。 　　2、大鼠心肌蛋白双向凝胶电泳及结果分析：再灌注结束后，取左心室部分放入液氮冷冻。心肌组织全蛋白提取后行双向凝胶电泳(2-DE)，经凝胶染色、扫描后获得2-DE图谱，运用ImageMaster2DPlatinum5.0凝胶图像分析软件对2-DE凝胶图像进行差异表达分析,差异明显蛋白点经胶内酶切后以纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱NanoUPLC-ESI-MS/MS进行分析，通过Mascot数据库检索鉴定差异蛋白质。 　　3、在大鼠骨骼肌缺血再灌注心肌损伤模型上，采用Westernblot及免疫组化验证候选差异蛋白的表达。 　　研究结果 　　1、大鼠骨骼肌缺血4小时再灌注4小时后造成心肌损伤（肌钙蛋白升高，HE染色大体结构改变），心脏收缩功能下降。 　　2、以假手术组及模型组心肌蛋白行双向电泳，得到聚焦良好、显色清晰、相似性高的2-DE图谱，以Imagemaster软件对各组图谱分析后得到15个差异表达蛋白点，差异点分布在pI5.0-8.0、分子量14.0kDa-66.0kDa之间。其中9个蛋白点上调，6个蛋白点表达下调，将各点行胶内酶解、质谱分析后获得差异表达蛋白谱。 　　3、通过分析差异表达蛋白谱，发现其功能涉及到细胞骨架相关蛋白：myozenin，心脏型肌球蛋白结合蛋白；能量代谢相关蛋白：NADH脱氢酶（泛醌）1α亚复合体亚单位10，磷酸丙糖异构酶，腺苷酸激酶同工酶1，苹果酸脱氢酶，琥珀酰辅酶A转移酶，细胞色素C氧化酶亚单位VIa；应激相关蛋白：αB-晶状体蛋白，辅酶Q7，热休克蛋白B7；其他蛋白：细胞因子诱导凋亡抑制因-1（CIAPIN1），功能定位未知的推测蛋白。 　　4、我们用Westernblot及免疫组化方法回复验证了不同类别的三种蛋白（CIAPIN1、myozenin和TIM）在两组动物心肌组织中的表达变化，证实了2-DE结果的可靠性，为下一步功能验证提供可靠的实验依据。 　　结论 　　1、成功复制骨骼肌缺血再灌注心肌损伤动物模型。该模型操作简便可靠，重复性好，可以模拟与临床相近的损伤，为下一步研究提供了可靠的实验模型。 　　2、成功获得分辨率高、重复性好的假手术组及骨骼肌缺血再灌注心肌蛋白电泳图谱。比较分析差异组间发现15个差异点，鉴定得到的差异蛋白质涵盖了细胞骨架相关、能量代谢相关、应激反应相关及其他蛋白，其中包括未在心肌损伤研究中报道过的蛋白。 　　3、用Westernblot及免疫组化方法回复验证了不同类别的三种蛋白（CIAPIN1、myozenin和TIM）在两组动物心肌组织中的表达变化与双向电泳一致，为进一步功能验证提供可靠的实验依据。

关键词：心肌损伤骨骼肌缺血再灌注生物学机制蛋白质组学技术免疫组化方法动物模型

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硫化氢通过抑制炎性细胞因子及氧化应激保护大鼠骨骼肌缺血再灌注的心肌损伤

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南方医科大学学报 2013年第4期33卷 554-558页

作者：陈雯刘宁张颖齐迎春杨靖邓昭阳李晓玲谢晓华解放军总医院南楼综合外一科北京100853

目的研究外源性硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注的炎性细胞因子和氧化应激的影响,探讨其对骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的具体保护机制。方法雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组⑥正常对照组(c组,8只);⑥缺血再灌注组(ischemiareperfusion,IR... 详细信息

目的研究外源性硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注的炎性细胞因子和氧化应激的影响,探讨其对骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的具体保护机制。方法雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组⑥正常对照组(c组,8只);⑥缺血再灌注组(ischemiareperfusion,IR组,8只):应用止血带结扎双下肢构建大鼠骨骼肌缺血再灌注模型,缺血4 h再灌注4 h;⑥NaHS组(8只)和PPG组(7只):在上述骨骼肌缺血再灌注的模型中,分别于缺血前及再灌注前腹腔注射NaHS 14μmol/kg、炔丙基甘氨酸(PPG)50 mg/kg。观察4组大鼠心肌组织病理、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及血浆和心肌髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(T-SOD、CuZn-SOD)的变化。以免疫组化法观察心肌细胞TNF-α的表达。结果与c组比较,IR组血浆CK-MB明显上升,血浆及心肌MPO、MDA水平明显上升,T-SOD、CuZn-SOD水平明显下降(P<0.05),与IR组比较,NaHS干预后血浆CK-MB明显降低,同时,血浆及心肌MPO、MDA水平明显下降,T-SOD、CuZn-SOD水平明显上升(P<0.05);PPG组上述指标同IR组没有明显改变(P>0.05)。心肌TNF-α免疫组化可见IR组心肌胞浆棕色染色颗粒较正常对照组明显增多,NaHS干预后后心肌胞浆棕色染色颗粒明显减少。结论给予H2S的供体NaHS可以通过降低中性粒细胞浸润及前炎症细胞因子激活、抑制氧化应激反应对骨骼肌缺血再灌注的心肌损伤发挥保护作用。

关键词：骨骼肌缺血再灌注心肌损伤硫化氢炎性细胞因子氧化应激

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运动终板在骨骼肌缺血再灌注过程中病理变化的实验研究

运动终板在骨骼肌缺血再灌注过程中病理变化的实验研究

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作者：王晓刚天津医科大学

学位级别：硕士

[目的]：探讨骨骼肌缺血再灌注过程中运动终板的病理变化及组化变化并为临床工作提供理论依据。 [方法]：1.分组：选取健康成年Wistar大鼠48只，雌雄各半，随机分为6组，每组8只。(正常组，缺血3小时组，缺血4.5小时组，缺血4.5小时... 详细信息

[目的]：探讨骨骼肌缺血再灌注过程中运动终板的病理变化及组化变化并为临床工作提供理论依据。 [方法]：1.分组：选取健康成年Wistar大鼠48只，雌雄各半，随机分为6组，每组8只。(正常组，缺血3小时组，缺血4.5小时组，缺血4.5小时再灌注1.5小时组，缺血4.5小时再灌注24小时组，缺血4.5小时再灌注2周组) 2.动物模型：采用腓肠肌内侧头肌瓣的动物模型，充分游离肌肉，缝扎两端腱腹移形处，用血管夹夹闭腓肠肌内侧头肌支血管，保留坐骨神经的腓肠肌支制成缺血模型。 3.于相应时间段取肌肉标本，分别行氯化金压染观察运动终板的形态学变化;乙酰胆碱酯酶结合琥珀酸脱氢酶的组织化学染色对酶学变化进行半定量分析;观察肌肉宏观变化为临床工作提供依据。 4.另外补充5只大鼠，分别做成正常组;缺血4.5小时组;缺血4.5小时再灌注24小时组模型。每只大鼠的标本均行氯化金染色后切片;HE染色;电镜观察其超微结构的变化以兹对比和辅助观察。 [结果]：1.在没有任何治疗的情况下，缺血4.5小时肌肉再灌注后，随时间延长肌肉功能进行性下降，最终出现坏死的肌肉组织外露、粘连和肌肉挛缩。 2.再灌注各组的NMJ的数量较对照组明显减少，有统计学意义。 3.缺血3小时、4.5小时组的NMJ数量较对照组没有显著性差异。 [结论及临床相关性]：***比肌纤维更能耐受缺血损伤。 2.再灌注后，NMJ随肌纤维的大面积坏死迅速溃变崩解，但NMJ乃至神经纤维溃变比肌纤维坏死的程度轻、发生晚。 3.在肌纤维受损区，坏死肌纤维所属的NMJ及神经纤维最终也会完全溃变崩解，由肉芽组织取代。 4.研究结果暗示，如果不对坏死肌肉实施进一步清创，缺血再灌注损伤将不会停止。

关键词：运动终板缺血再灌注骨骼肌病理变化骨骼肌缺血再灌注骨科病理学

来源：评论

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硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注所致心肌损伤的保护作用

引用

中华保健医学杂志 2011年第3期13卷 196-199页

作者：陈雯张颖齐迎春任青爱杨靖邓昭阳谢晓华解放军总医院南楼临床部综合外一科北京100853

目的研究外源性硫化氢(H2S)对大鼠骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的保护作用。方法选雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组:(1)正常对照组(8只);(2)缺血再灌注组(8只),应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血再灌注模型,缺血4h再灌注4h;(3)硫氢化钠(N... 详细信息

目的研究外源性硫化氢(H2S)对大鼠骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的保护作用。方法选雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组:(1)正常对照组(8只);(2)缺血再灌注组(8只),应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血再灌注模型,缺血4h再灌注4h;(3)硫氢化钠(NaHS)组(8只),缺血前及再灌注前腹腔注射NaHS0.78mg/kg;(4)炔丙基甘氨酸(PPG)组(7只),缺血前及再灌注前腹腔注射PPG50mg/kg。观察各组心肌病理、血浆H2S、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(TnT)及心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性的变化。结果与正常对照组比较,缺血再灌注组血浆H2S及心肌CSE活性明显下降,血浆CK-MB、TnT明显升高(P<0.05)。与缺血再灌注组比较,NaHS组血浆H2S浓度升高59%(P<0.05),心肌CSE活性升高93%(P<0.05),血浆CK-MB降低29%(P<0.05),血浆TnT降低67%(P<0.05);PPG组血浆H2S浓度下降20%,但无统计学差异,心肌CSE活性降低38%(P<0.05),血浆心肌酶学改变无统计学差异。心肌病理提示,缺血再灌注组心肌明显肿胀、血管充血,心肌细胞间可见明显分叶核粒细胞浸润,红细胞漏出增多,NaHS组干预后心肌损伤明显减轻。结论外源性H2S补充可以减轻骨骼肌缺血再灌注所致的心肌损伤。

关键词：骨骼肌缺血再灌注心肌损伤硫化氢

来源：评论

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