目的:本文第一部分以环糊精及其衍生物和离子液体作为背景缓冲溶液添加剂,研究其对柯诺辛(C)和柯诺辛B(CB)分离和富集的影响,建立了一种快速、灵敏、有效的场放大在线富集-毛细管电泳法以对C和CB进行分离与富集,并将该方法用于分析钩藤药材及其制剂中。本文第二部分研究了环糊精改良的胶束毛细管电动色谱法(CD-MEKC)对钩吻中四种主要生物碱分离的影响,建立了一种快速、实用的毛细管电泳法分离钩吻碱甲(GM)、钩吻素子(KM)、胡蔓藤碱乙(HMT)和钩吻素己(GS),并用于钩吻饮片及其制剂中钩吻生物碱的分离和定量测定。方法:采用BECKMAN毛细管电泳仪,二极管阵列检测器(DAD),未涂层毛细管柱(40.2 cm×75μm id,有效长度为30 cm)。(1)研究了影响分离和富集的因素:缓冲溶液的浓度和p H、添加剂的浓度、水柱时间、进样时间以及分离电压。同时分离测定以及在线富集C与CB的最优条件为:含130 m M羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)和10 m M四丁基铵-L-谷氨酸(TBA-L-Glu)的40 m M磷酸二氢钠溶液(p H 6.1)为运行缓冲溶液,分离电压为20 k V;以10 k V在进样端引入水柱(50s),而后在0.5 psi的压力下进样4 s;(2)研究了缓冲溶液的浓度和p H、胆酸钠(SC)和2,6-二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)的浓度以及分离电压对分离的影响,同时分离和定量测定GM、KM、GS和HMT的最优电泳条件为:含12.5 m M SC和120 m M DM-β-CD的磷酸二氢钠溶液(40 m M、p H 6.3)为缓冲溶液,运行电压为15 k V,温度为25°C。进样条件:0.5 psi,4 s。结果:在最佳实验条件下,C和CB的线性关系良好,相关系数R分别为0.9993和0.9992;分析物可在12 min内完成分离,分离度为2.5,富集倍数为700～900;日内精密度<2.7%,日间精密度<3.7%;实际样品的回收率在98.1～101.3%之间。最佳毛细管电泳条件下,四种钩吻生物碱线性关系均良好,相关系数R在0.9971～0.9995之间;分析物可在11 min内完成分离,分离度在1.8-3.4之间;四种生物碱的日内精密度<2.9%,日间精密度<4.1%;实际样品的回收率在96.5～101.6%之间。结论:使用毛细管电泳场放大在线富集技术可以同时分离C和CB,并可实现两种分析物的在线富集与定量测定。本文所建立的方法简单,可用于测定钩藤药材及其制剂中C和CB的含量。CD-MEKC法可用于钩吻中4个钩吻生物碱的分离测定。本文所建立的毛细管电泳方法有效、实用、操作简便,可用于测定钩吻药材及制剂中钩吻生物碱的含量。
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