检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2025年

作者：崔利兵张志飞石晓娜许榜丰闫大为滕巧泱刘芹防李泽君焦培荣苑纯秀华南农业大学兽医学院中国农业科学院上海兽医研究所

为了制备识别鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gD蛋白的单克隆抗体，本研究以ILTV作为免疫原，采用杂交瘤技术制备融合细胞，再用酶联免疫吸附（ELISA）与间接免疫荧光（IFA）技术筛选能分泌特异性识别ILTVgD蛋白抗体的杂交瘤细胞，并对所... 详细信息

为了制备识别鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gD蛋白的单克隆抗体，本研究以ILTV作为免疫原，采用杂交瘤技术制备融合细胞，再用酶联免疫吸附（ELISA）与间接免疫荧光（IFA）技术筛选能分泌特异性识别ILTVgD蛋白抗体的杂交瘤细胞，并对所分泌的单抗进行特性研究。间接ELISA与IFA试验结果表明，本研究成功筛选到两株能分泌识别ILTVgD蛋白的杂交瘤细胞。细胞微量中和试验结果表明，两株杂交瘤细胞分泌的抗体均能中和ILTV。抗体亚型鉴定均为IgG1，轻链为 κ 链。ILTV gD蛋白单克隆抗体的制备与特性研究为ILTV gD中和表位的筛选与ILTV血清抗体检测方法的建立提供了基础。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒杂交瘤细胞技术单克隆抗体 gD蛋白

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鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定及遗传进化分析

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动物医学进展 2025年第3期46卷 57-63页

作者：袁辉刘丹刘敏吴琼李凌丹宾晨李伟李国攀陈红心周启立熊涛长江大学生命科学学院湖北荆州434000 武汉大北农农牧发展有限公司湖北武汉430000

荆州某鸡场出现了疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染,为确定该病病因,用PCR初步检测鸡传染性喉气管炎病毒为阳性;将阳性病料经处理后接种于SPF鸡胚绒毛尿囊膜,传至5代,收集出现痘斑和增厚的绒毛尿囊膜及尿囊液,对其进行PCR检测、病毒... 详细信息

荆州某鸡场出现了疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染,为确定该病病因,用PCR初步检测鸡传染性喉气管炎病毒为阳性;将阳性病料经处理后接种于SPF鸡胚绒毛尿囊膜,传至5代,收集出现痘斑和增厚的绒毛尿囊膜及尿囊液,对其进行PCR检测、病毒滴度测定及动物回归试验。确定分离到1株ILTV毒株,命名为JZCD202302株。参照GenBank公布的鸡传染性喉气管炎病毒WG株设计了gB、gC、gD、gE、gK、TK基因特异性引物,用MEGA6.0软件绘制了遗传进化树。gB-gC-gD-gE-gK-TK串联进化树分析结果显示,该毒株与澳大利亚疫苗相关野外重组流行毒株7b、ACC78、CL9和实验室疫苗重组株ILTV.157/19亲缘关系最近。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定进化树分析

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鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立

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西北农业学报 2024年第3期33卷 381-388页

作者：谢志勤谢芝勋张艳芳范晴谢丽基万丽军罗思思李孟张民秀曾婷婷黄娇玲王盛李丹韦悠李小凤任红玉阮志华广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁 530001

旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)绝对定量方法.根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)... 详细信息

旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)绝对定量方法.根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价其特异性、敏感性和重复性.结果显示,建立方法的最佳引物浓度为20 μmol/μL,最佳探针浓度为10 μmol/μL,最佳退火温度为56 ℃.特异性检测结果显示,建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株.敏感性检测结果显示,采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL.对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测,3次重复检测结果的变异系数均小于5％.对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测,采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份,荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份,ddPCR的阳性检出率(12.05％)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84％).结果表明,建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ILTV提供更好的技术支撑.

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR 定量检测

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鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白G对病毒吸附、侵入、复制和细胞间接合传染的影响

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中国科学（C辑） 2005年第3期35卷 238-245页

作者：孙照刚张曼夫中国农业大学生物学院动物分子病毒室北京100094

利用分离纯化的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)天然糖蛋白G及其制备的抗体处理,测定对ILT病毒(E3毒株和Zhonghai毒株)吸附、侵入、复制和病毒从细胞到细胞直接感染的影响.结果证明,ILTV天然糖蛋白G及抗糖蛋白G抗体对病毒的吸附和侵入无明... 详细信息

利用分离纯化的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)天然糖蛋白G及其制备的抗体处理,测定对ILT病毒(E3毒株和Zhonghai毒株)吸附、侵入、复制和病毒从细胞到细胞直接感染的影响.结果证明,ILTV天然糖蛋白G及抗糖蛋白G抗体对病毒的吸附和侵入无明显影响.添加糖蛋白G对病毒从CEL细胞到CEL细胞直接感染和病毒在CEL细胞上的复制的影响不明显,但添加抗糖蛋白G大鼠IgG却显著抑制病毒的复制,表现为噬斑变小,病毒复制曲线降低.激光共聚焦扫描显微镜观察结果显示ILTV糖蛋白G存在于鸡原代肝细胞核外周质及细胞膜上,并且糖蛋白G聚集在细胞融合部位.推测糖蛋白G可能促进了细胞的融合或参与病毒从细胞到细胞的直接感染,从而影响病毒复制和噬斑的形成.

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白G 吸附侵入细胞间激光共聚焦扫描接合 ILTV 病毒复制显微镜观察分离纯化肝细胞核细胞融合感染 IgG 细胞膜抗体天然毒株添加噬斑

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鸡传染性喉气管炎病毒安徽株AH-XY15的分离鉴定

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中国兽医科学 2016年第10期46卷 1287-1293页

作者：王瑞殷冬冬周晓雅梅楠张莉张雪梅周祺王勇王桂军安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

安徽省某鸡场120日龄蛋鸡发生疑似鸡传染性喉气管炎（ILT）,根据Gen Bank发表的鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）株g D基因设计合成1对特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出1 134 bp大小片段。将病鸡喉头气管及其分泌物处理后接种SP... 详细信息

安徽省某鸡场120日龄蛋鸡发生疑似鸡传染性喉气管炎（ILT）,根据Gen Bank发表的鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）株g D基因设计合成1对特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出1 134 bp大小片段。将病鸡喉头气管及其分泌物处理后接种SPF鸡胚,接种120 h后在绒毛尿囊膜（CAM）上形成典型痘斑,证实分离到1株鸡传染性喉气管炎病毒,命名为AH-XY15株。应用鸡胚传代的第4代病毒感染5日龄健康麻羽鸡,结果感染鸡出现了典型ILT临床症状,并能够从发病鸡喉头分泌物检出ILTV。应用PCR扩增分离株毒力基因TK基因和g B基因,序列分析显示,AH-XY15分离株TK、g B基因的核苷酸序列与国内WG株、国外USDA株以及国内疫苗株K317株同源性均在99%以上,氨基酸序列同源性在97%-99.8%之间。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定序列分析

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鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第8期34卷 642-646页

作者：赵妍孔聪聪张晓敏崔红玉石星明赵晓岩薛美胡顺磊闫帅牛秀杰李巧玲王玫王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 云南农业大学预防兽医系云南昆明650201

为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量... 详细信息

为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gB基因 TaqMan Real-time PCR

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鸡传染性喉气管炎病毒RPA-LFD检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1128-1132页

作者：马国和高冬生王增杨盼盼杨霞王新卫边传周赵军河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南牧业经济学院动物医学系河南郑州450046

为建立一种简便、快捷的现地检测鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的方法,本研究联合重组酶聚合酶扩增(RPA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RPA上、下游引物的5'端分别进行异硫氰酸荧光素和生物素标记,通过引物浓度、RPA反应时间和温... 详细信息

为建立一种简便、快捷的现地检测鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的方法,本研究联合重组酶聚合酶扩增(RPA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RPA上、下游引物的5'端分别进行异硫氰酸荧光素和生物素标记,通过引物浓度、RPA反应时间和温度等条件的优化建立了一种可以用于ILTV现地检测的RPA-LFD方法。该检测方法在30℃～42.5℃恒温反应20 min即可实现对ILTV目的基因片段的有效扩增;与其它常见禽病病原DNA无交叉反应;RPA扩增产物直接用胶体金侧向流免疫层析试纸条肉眼观察,最低检测限为100拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高100倍。结果表明,本研究建立的RPA-LFD检测方法灵敏度高,操作方便,可用于ILTV的临床快速检测。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒重组酶聚合酶扩增侧向流试纸条快速检测

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鸡传染性喉气管炎病毒gD基因的表达及间接ELISA检测方法的初步建立

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中国兽医学报 2009年第3期29卷 263-265,287页

作者：杨明凡崔保安张素梅陈红英李祥瑞南京农业大学动物医学院江苏南京210095 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

将含有ILTVgD糖蛋白基因的重组质粒pMD-T-gD用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,回收目的片段,将其连接到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-gD。将pET-gD转化到宿主表达菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达目的蛋白大小为... 详细信息

将含有ILTVgD糖蛋白基因的重组质粒pMD-T-gD用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,回收目的片段,将其连接到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-gD。将pET-gD转化到宿主表达菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达目的蛋白大小为55 000,Western blotting表明表达产物具有良好的免疫原性。表达的蛋白产物经纯化后作为ELISA包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG作为二抗,初步建立了间接ELISA诊断方法,并确定了抗原最佳包被浓度为24.5 mg/L;最佳血清稀释度为1∶80,初步确定ELISA判定标准为D450≥0.25判为阳性,小于0.25为阴性。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gD基因原核表达间接ELISA

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鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其原核表达

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 343-345页

作者：郑海洲柏佳宁边艳青赵宝华河北师范大学生命科学学院河北石家庄050016

根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌... 详细信息

根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌DH5α中,得到阳性重组菌株DH5α(pBV-gB)。该菌株在温控诱导下,SDS-PAGE电泳可见表达的特异蛋白。ELISA检测证明,表达的蛋白具有较好的反应原性。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒原核表达 gB基因 SDS-PAGE电泳 ELISA检测多克隆位点 B基因序列 PCR扩增 ILTV 基因片段表达载体定向克隆重组质粒质粒转化重组菌株特异蛋白反应原性基因组疫苗株受体菌

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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗株糖蛋白gB基因序列比较分析

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中国兽医学报 2000年第6期20卷 544-547页

作者：张绍杰孟松树仇华吉王柳倪键强何召庆王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018

根据已经发表的鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA2 株的 g B基因序列 ,设计了 1对引物 ,通过 PCR扩增了 ILTV王岗株的 g B基因 ,并克隆到 p UC1 1 9质粒的 Eco R 位点中 ,经酶切鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,g B基因长 2 6 1 ... 详细信息

根据已经发表的鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA2 株的 g B基因序列 ,设计了 1对引物 ,通过 PCR扩增了 ILTV王岗株的 g B基因 ,并克隆到 p UC1 1 9质粒的 Eco R 位点中 ,经酶切鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,g B基因长 2 6 1 9bp,包含完整的阅读框架。序列比较分析表明 ,ILTV王岗株的 g B基因核苷酸序列与英国的 Throne882和美国的 6 32 2个强毒株的 g B基因序列完全一致 ,而与澳大利亚 SA2 疫苗株g B基因核苷酸同一性为 99.8% ,氨基酸的同一性为 98.4 %。与澳大利亚 SA2 疫苗株 g B基因核苷酸和氨基酸序列比较发现 ,ILTV 3个强毒株 (王岗株 ,Throne 882株和 6 32株 ) g B基因的核苷酸序列在第 89位上均缺失 1个碱基 G,而在第 1 0 2位核苷酸处又插入了 1个碱基 A,从而引起了在氨基酸序列中第 2 9～ 32位 5个氨基酸的移码突变。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因序列分析

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