检索结果-内蒙古大学图书馆

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的急性上呼吸道传染病。该病分布于世界各地,可引起鸡的死亡和产蛋下降而造成严重的经济损失,被国际兽医局(OIE)列为B类疾病。目前国内外防制本病普遍采用弱毒疫苗。该疫苗虽然具有较好的免疫效果,但所有的弱毒疫苗都存在:毒力普遍偏强,接种后反应大;也能引起潜伏感染,使鸡终生带毒;可以由接种鸡传染给非接种鸡,在传播过程中毒力会返强等缺点。国内虽已有商业化的表达ILTV糖蛋白gB的重组鸡痘病毒,但免疫效果受FPV母源抗体的干扰。因此,急需研究更安全、有效的疫苗用于防制和消灭ILT。本实验室前期研究表明,外源基因插入不同复制非必需区影响重组鸡痘病毒抵抗母源抗体干扰的能力,其中利用本室构建的转移载体p12LS获得的rFPVs都表现出较大的抗母源抗体干扰优势。糖蛋白gB是ILTV的205kDa糖蛋白复合物,能诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫,是ILTV的主要保护性抗原和感染所必需蛋白,与病毒吸附和穿入细胞有关。本研究根据已发表的ILTV中国王岗株的gB基因序列,设计了一对特异性引物,通过PCR方法扩增了ILTV中国王岗株的gB基因,并将之克隆入pGEM-T easy载体后进行测序,得到了阳性质粒pTgB。将pTgB中的ILTV糖蛋白gB基因再亚克隆至鸡痘病毒(FPV)转移载体p12LS中,得到了p12LSgB。将p12LSgB转染被亲本鸡痘病毒LP感染的CEF。经蓝斑筛选、纯化后获得的同源重组病毒rFPV-ILTVgB通过PCR方法鉴定,证明其基因组中含有ILTV糖蛋白gB基因,间接免疫荧光试验(IFA)也证明该重组病毒在其感染的CEF中表达了ILTV糖蛋白gB。用该重组病毒rFPV-ILTVgB、商品化的ILTV弱毒苗及FPVLP株分组免疫35日龄的SPF鸡(每组10只鸡,分组隔离饲养)。并设非免疫对照组(5只鸡)。其中rFPV-ILTVgB和FPVLP株以106PFU/只的剂量、ILTV弱毒苗以1羽份/只的剂量进行免疫接种。免疫后21天用ILTV中国王岗株以0.4 mL剂量喉内接种攻毒,通过检测免疫后ILTV抗体水平、攻毒后发病率与死亡率等指标评价疫苗的免疫保护效力,比较重组鸡痘疫苗与常规弱毒苗之间的免疫效力差异。从攻毒后的免疫保护情况看,重组鸡痘病毒(50%的发病率和0%的死亡率)比非免疫对

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB 重组鸡痘病毒免疫效力

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鸡传染性喉气管炎和新城疫病毒双重PCR检测方法的建立

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中国畜禽种业 2020年第12期16卷 190-191页

作者：戴娜桑福建省南安市动物疫病预防控制中心 362300

为了构建鸡传染性喉气管炎病毒(Avian Infectious Laryngotracheitis, AILT)和鸡新城疫病毒(Newcastle disease, ND)双重检测方法,本文以鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒的基因保守序列为基础,进行2对特异性引物及2条非一致荧光基... 详细信息

为了构建鸡传染性喉气管炎病毒(Avian Infectious Laryngotracheitis, AILT)和鸡新城疫病毒(Newcastle disease, ND)双重检测方法,本文以鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒的基因保守序列为基础,进行2对特异性引物及2条非一致荧光基团标记的TaqMan探针设计与试验。优化、调整反应条件后,建立鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法。这种双重PCR检测方法对传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒监测灵敏度为10拷贝/L,相对于常规OCR检测方法灵敏度提高100倍,并且该PCR检测方法对禽流感病毒、鸡白血病病毒等检测结果均为阴性,具备良好的特异性,此外该检测方法批内和批间的重复变异系数都<2%。使用鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法对比常规的检验方法测试150份组织样品,达到100%的正确率,该方法可以作为鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒的快速检测手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒鸡新城疫病毒双重PCR检测方法建立试验

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力的研究

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力的...

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作者：张绍杰中国农业科学院

学位级别：博士

鸡传染性喉气管炎（Infection Lnyngotrcheitis Vrus，ILT）是由鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的一种急性上呼吸道传染病。该病分布于世界各国，我国在50年代发现本病，现己在许多省份流行。目前国内外预防本病所用的疫苗都... 详细信息

鸡传染性喉气管炎（Infection Lnyngotrcheitis Vrus，ILT）是由鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的一种急性上呼吸道传染病。该病分布于世界各国，我国在 50年代发现本病，现己在许多省份流行。目前国内外预防本病所用的疫苗都是弱毒疫茵，但所有的弱毒疫苗都存在以下缺点：（l）由于该病毒的毒力与免疫原性呈正相关，因此，现用的疫苗毒力普遍偏强，接种后反应大；（2）与ILTV强毒一样，其弱毒疫由株也能引起潜伏感染，潜伏感染的鸡将终主带毒；（3）疫苗病毒可以由接种鸡传染给非接种鸡，在鸡与鸡，鸡群与鸡群之间传插过程中毒力会返强，从而成为新的感染源；（4）到目前为止尚无有效方法可以鉴别强毒株和弱毒株。因此，研究新型安全且有效的疫苗用于ILT的防制十分必要。糖蛋白 gB是ILTV的主要保护性抗原，它能诱导机体产生体液和细胞介导的保护性免疫应答，是该病毒感染复制必需的蛋白。根据已经发表的ILTV SA。疫苗株的gB 基因序列，设计了一对特异性引物，然后通过PCR方法扩增了ILTV中国王岗株的gB 基因，并克隆到PUC质粒的EcORI位点中。序列分析结果表明克隆的PCR片段含有2619hp核昔酸，包含了完整的gB基因阅读框架。序列比较分析结果显示，ILTV 王岗株（强毒株）的gB基因核昔酸序列与英国的Throne 882株和美国的632株（二者均为强毒株）的 gB基因核昔酸序列完全一致，而与澳大利亚 SAZ株（弱毒株）的 gB基因核昔酸的同一性为99．8％，氨基酸的同一性为98．4％。三株ILTV强毒和弱毒比较，弱毒 gB基因在第 89位和第 102位分别发生了一个碱基的插入和缺失，结果导致5 个氢基酸的移码突变，即由强毒的“川＊－C卜11eJie－＊印”变成弱毒的 “GIy·切－Asn·Asn－Ser。将克隆到pUCllg中的ILTV糖蛋白gB基因再亚克隆至杆状病毒转移载体 pVL1393中，形成重组质粒甲VLgB。将pVLgB与杆状病毒线性DNA（BAC－N－Blue DNA）共转染Sffi昆虫细胞，经三轮蚀斑纯化，获得重组杆状病毒pVL－ILTVgB。通过PCR方法鉴定证明gB基因被正确插人到杆状病毒基因组中；直接免疫荧光试验结果也表明 ILTV gB基因在重组秆状病毒感染的 Sfg昆虫细胞中被表达。表达的糖蛋白 gB作为亚单位疫苗用于下一步的免疫试验。将克隆在pUCllg中的gB基因和大肠杆菌的L。Z基因分别亚克隆到禽痘病毒转移质粒中然后将其通过脂质体方法转染由鸡痘病毒S－FPV－017 t苗株感染的SPF I 张扭杰双达传贝佐顺气管炎间写怵蠢困且阑禹区们＠的构巨及江免沤戮力研灾 Zboo年6月鸡胚成纤维细胞中，通过蓝斑筛选出重组鸡痘病毒（rFPV－ILTVgB），并对其进行了 6 轮蚀斑纯化。该重组病毒通过PCR方法鉴定证明，其基因组中含有完整的ILTV gB基因：“巾悦＊＿．M删实验也证明了该重组病毒在其感染的sPr 4胚成纤维细胞中表达了 ILTV f蛋白gB。用重组鸡痘病毒rFPV－ILTVgB等接种6周龄的SPF鸡进行的免疫及攻毒保护试验共设立7组（每组】0只鸡）：第1组用商品化V弱毒疫苗点眼免疫：第2组用 rFPV－ILTVgB翅皮下注射免疫；第3组用鸡痘病毒弱毒疫苗翅皮下注射兔疫；第车组用rFPV－ILTVgB免疫2次，间隔2周；第5组用rFPV－ILTVgB一免，2周后用重组杆状病毒表达的 ILTV gB蛋白二免；第 6组用含 ILTV gB基因的重组质粒

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB 重组杆状病毒重组鸡痘病毒

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基于马立克病毒的传染性喉气管炎病毒载体疫苗研制

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2017年第1期38卷 1-5页

作者：张小荣刘怡黄海琼蒙杰蒋叶林吴艳涛扬州大学兽医学院/江苏省重要动物疫病与人兽共患病协同创新中心江苏扬州225009

以表达EGFP报告基因的重组I型马立克病毒疫苗株(CVI988/Rispens)rMDV-EGFP为母本病毒,通过同源重组的方法用表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB和gD基因的表达盒替换病毒rMDV-EGFP中的EGFP报告基因表达盒,分别获得了表达gB和gD基因的重组... 详细信息

以表达EGFP报告基因的重组I型马立克病毒疫苗株(CVI988/Rispens)rMDV-EGFP为母本病毒,通过同源重组的方法用表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB和gD基因的表达盒替换病毒rMDV-EGFP中的EGFP报告基因表达盒,分别获得了表达gB和gD基因的重组马立克病毒rMDV-ILTgB和rMDV-ILTgD。经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,证明重组病毒中插入的目的基因大小正确,且能够表达gB和gD目的蛋白。免疫效力试验结果表明:与弱毒疫苗相比,重组病毒rMDV-ILTgB和rMDV-ILTgD均可对ILTV强毒攻击提供更好的免疫保护。重组病毒免疫组试验鸡不仅在发病率、致死率和攻毒后体重增长等指标方面与攻毒对照组均存在显著差异,而且与常规弱毒疫苗免疫组在致死率和攻毒后体重增长指标方面也存在显著差异。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒重组马立克病毒 gB基因 gD基因免疫效力

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运用套式PCR检测传染性喉气管炎病毒核酸

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中国病毒学 2001年第3期16卷 265-269页

作者：黄庚明辛朝安广东省农业科学院兽医研究所广东广州510640 华南农业大学动物医学系广东广州510642

选择鸡传染性喉气管炎病毒保守TK基因的蛋白编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测鸡传染性喉气管炎病毒DNA的套式PCR法。通过检测ILTV感染的鸡胚绒毛尿囊膜、实验室病料和临床病料 ,结果表明 ,套式PCR法能... 详细信息

选择鸡传染性喉气管炎病毒保守TK基因的蛋白编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测鸡传染性喉气管炎病毒DNA的套式PCR法。通过检测ILTV感染的鸡胚绒毛尿囊膜、实验室病料和临床病料 ,结果表明 ,套式PCR法能检测出ILTV感染后的非免疫鸡胚和SPF鸡胚绒毛尿囊膜研磨液中的被稀释了10 5倍的病毒 (约 1fg的ILTVDNA) ,攻毒后第 10天还能从非免疫鸡和SPF鸡气管拭子中检出ILTV ,第 10天非免疫鸡气管拭子中ILTV的最大检出率为 7/ 10 ,第 10天SPF鸡气管拭子中ILTV的最大检出率为 8/ 10。对非免疫鸡和SPF鸡的气管拭子中ILTV最佳检出时间均在攻毒后第 5天。对临床样品中的ILTV的最大检出率为 7/ 7。经过核酸杂交验证 ,套式PCR法具有很高的特异性和敏感性 ,为从分子水平探讨ILTV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 TK基因套式PCR 检测病毒核酸

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