检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2017年第10期37卷 1862-1867页

作者：毛雅元王春花张桂红张立河北远征药业有限公司河北石家庄050041 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157100 瑞普(天津)生物药业有限公司天津300399

为了克服鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗产品制备中存在的缺陷,通过对BHK-21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、原代鸡胚肝细胞、原代鸡胚肾细胞等六种细胞进行病毒适应性培养,采用PCR和免疫荧光(IFA)跟踪检测的方法成功... 详细信息

为了克服鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗产品制备中存在的缺陷,通过对BHK-21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、原代鸡胚肝细胞、原代鸡胚肾细胞等六种细胞进行病毒适应性培养,采用PCR和免疫荧光(IFA)跟踪检测的方法成功筛选出具有稳定病毒滴度的病毒适应性细胞——鸡胚肝细胞。然后采用新的克隆方法缩短了克隆时长并对筛选的鸡胚肝细胞进行克隆纯化,通过与原代鸡胚肝细胞进行比较,结果显示本试验所采用的克隆方法具有高几率的特点,并且能够克隆出高活性的鸡胚肝细胞,并能够繁殖较高效价的鸡传染性喉气管炎病毒,为解决鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗在生产上存在的瓶颈问题提供了重要的基础条件。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒适应性细胞鸡胚肝细胞

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鸡传染性喉气管炎病毒GZNY202112的分离鉴定及其TK、gD基因的遗传进化分析

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中国兽医科学 2023年第10期53卷 1270-1278页

作者：孙芸温贵兰徐飞李波杨婷胡璇贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵州贵阳550016 贵州省畜禽遗传资源管理站贵州贵阳550001

贵州省某养鸡场两栋鸡舍中的蛋鸡疑似发生了鸡传染性喉气管炎病毒感染,为确定该病病因,引物按已发表的TK基因引物序列进行合成,从发病鸡采集的病料中扩增出1259 bp大小的片段;将阳性病料组织处理后接种LMH细胞,盲传3代后发现LMH细胞出现... 详细信息

贵州省某养鸡场两栋鸡舍中的蛋鸡疑似发生了鸡传染性喉气管炎病毒感染,为确定该病病因,引物按已发表的TK基因引物序列进行合成,从发病鸡采集的病料中扩增出1259 bp大小的片段;将阳性病料组织处理后接种LMH细胞,盲传3代后发现LMH细胞出现CPE现象,收集其病毒液对其进行PCR鉴定、生长曲线的测定以及动物回归试验,确定分离到一株ILTV毒株,并将其命名为GZNY202112株。为了进一步了解其遗传特征,根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒TK基因、gD基因设计了特异性引物,使用DNAstar软件绘制遗传进化树。TK以及gD遗传进化分析结果显示该毒株与澳大利亚原产疫苗株CSW-1、V1-99亲缘关系最近,GZNY202112株可能与ILT疫苗株有关。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定遗传分析

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鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白间接竞争ELISA方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 704-709,728页

作者：郭鹏宇赵妍刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检... 详细信息

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检测纯化的rg G (P-rg G)与本研究室制备的g G蛋白单克隆抗体(MAb) 3C8的反应原性。将MAb 3C8采用Protein G亲和层析柱纯化后与HRP偶联(HRP-3C8),利用间接ELISA法测定纯化HRP-3C8的效价。结果显示,P-rg G与MAb 3C8发生了特异性反应,在30 ku处出现特异性条带。纯化的HRP-3C8效价达1∶51 200。以P-rg G作为包被抗原,以纯化的HRP-3C8作为检测抗体,通过对各反应条件优化后初步建立了ILTV g G蛋白间接竞争ELISA (ic-ELISA)检测方法。条件优化结果显示,P-rg G包被量为12.5 ng/孔,HRP-3C8抗体稀释度为1∶10 000,将待检样品与HRP-3C8抗体在37℃孵育40 min后加入ELISA板再反应20 min,TMB底物反应10 min。将待检样品的抑制率(PI)≥31.08%判为阳性;采用该方法分别检测ILTV、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV),通过计算PI,评估该方法的特异性;按照Reed-Muench法测定ILTV K317株的鸡胚半数感染量(EID_(50)),再将该病毒2倍倍比稀释(1∶10~1∶2 560)后,以该ic-ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;利用同批次和不同批次P-rg G分别包被ELISA板,采用该ic-ELISA方法检测ILTV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除了能检测ILTV外,其余相关病毒均为阴性结果;将ILTV稀释至1∶320时检测结果仍为阳性,相当于75 EID_(50)/0.1 m L;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法及荧光定量PCR (q PCR)分别检测50份临床ILTV、IBV和FPV感染鸡的口咽拭子和喉头组织、10份ILTV活疫苗,该方法检测结果显示,阳性检测率为73.3%(44/60),阴性率为26.7%(16/60)。q PCR的检测结果显示,阳性检测率为81.7%(49/60),阴性率为18.3%(11/60),二者的阴、阳性符合率分别为90.9%和87.8%,总符合率为88.3%。本研究建立的ILTV g G蛋白ic-ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于检测实验室和临床ILTV感染的不同样品,为ILTV及其疫苗的检测提供了新的技术手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gG蛋白单克隆抗体间接竞争ELISA

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鸡传染性喉气管炎病毒河南株gB基因真核表达载体的构建及表达

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江西农业大学学报 2009年第5期31卷 798-802页

作者：管倩崔保安陈红英杨明凡王振亚郭小参吕小丽王东方河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南牧翔动物药业有限公司河南郑州450008

根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因序列,设计并合成1对引物,以河南分离株(ILTV-HN)接种10日龄鸡胚,从含痘斑的绒毛尿囊膜中提取基因组DNA扩增gB基因,将扩增片段克隆入pGEM-TEasy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性... 详细信息

根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因序列,设计并合成1对引物,以河南分离株(ILTV-HN)接种10日龄鸡胚,从含痘斑的绒毛尿囊膜中提取基因组DNA扩增gB基因,将扩增片段克隆入pGEM-TEasy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序,结果表明克隆到ILTV-HN株gB基因,全长为2 629 bp,包含一个完整的开放阅读框。然后将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1-gB,转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过RT-PCR检测,转染细胞中含gB基因的mR-NA,间接免疫荧光检测,结果表明gB基因在CEF细胞中进行了瞬时表达。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gB基因真核表达载体表达

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鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

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中国家禽 2009年第10期31卷 44-45页

作者：龚中贵张齐孔意端黄淑坚王林川广东温氏食品集团有限公司广东云浮527439 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528231 华南农业大学兽医学院广东广州510642

传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。本病一年四季均可发生，以冬春季发病较为常见。2007年12月，新兴县周边一养殖户饲养50多日龄肉鸡最早发生一起疑似传染性喉气管炎病例，1... 详细信息

传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。本病一年四季均可发生，以冬春季发病较为常见。2007年12月，新兴县周边一养殖户饲养50多日龄肉鸡最早发生一起疑似传染性喉气管炎病例，1个星期内迅速传染到其它几个临近养户，该病发病率较高，死亡率在8％左右。采集出现典型症状病死鸡的的喉头、气管、支气管、肺等组织进行实验室病毒分离，具体情况如下：

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒病毒分离鉴定呼吸道传染病一年四季典型症状发病率接触性

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鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

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中国兽医杂志 2007年第12期43卷 36-37页

作者：陈红英张书松崔保安李新生金钺陈文河南农业大学牧医工程学院

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性上呼吸道传染病。主要危害成年鸡,常表现呼吸困难、气喘、咳出血样渗出物,产蛋鸡产蛋下降,发病率极高和较高的死亡率,给养鸡业带来严重的经济损失。该病自1925年由Ma... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性上呼吸道传染病。主要危害成年鸡,常表现呼吸困难、气喘、咳出血样渗出物,产蛋鸡产蛋下降,发病率极高和较高的死亡率,给养鸡业带来严重的经济损失。该病自1925年由May等首次在美国罗德岛发现以来,已在世界上广泛流行。20世纪90年代在国内相继发生该病。[第一段]

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒鸡产蛋下降鉴定分离呼吸道传染病呼吸困难经济损失成年鸡

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鸡传染性喉气管炎病毒江苏分离株的分离鉴定

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中国兽医杂志 2010年第12期46卷 19-21,I0003页

作者：高巍梅梅王桂军张建军柯浩扬州大学兽医学院江苏扬州225009 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 扬州威克生物工程有限公司江苏扬州225127

江苏某养殖场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)TK基因的1.3 kb大小片段;发病鸡喉头及分泌... 详细信息

江苏某养殖场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)TK基因的1.3 kb大小片段;发病鸡喉头及分泌物接种鸡胚后,在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上形成痘斑,产生特征性的多核巨细胞和核内包涵体;第3代分离毒的毒价为10-6.2EID50/0.2 mL;分离毒株可被ILT标准阳性血清中和,中和价为1∶40;人工发病试验显示,接种鸡有ILT典型的呼吸道症状和病理变化。以上结果表明,分离病毒为ILTV,将此分离株命名为XZ09。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定

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鸡传染性喉气管炎病毒套式PCR检测方法的建立及应用

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中国家禽 2011年第17期33卷 57-59页

作者：田莉莉李林辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州121000 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866

1材料和方法1.1病毒鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鸭瘟病毒（DPV）、伪狂犬病毒（PRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）、新城疫病毒（NDV）均由本实验室保存。

1材料和方法 1.1病毒鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鸭瘟病毒（DPV）、伪狂犬病毒（PRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）、新城疫病毒（NDV）均由本实验室保存。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 PCR检测方法传染性法氏囊病病毒减蛋综合征病毒应用伪狂犬病毒新城疫病毒鸭瘟病毒

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鸡传染性喉气管炎病毒地方株的分离鉴定

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河南农业科学 2008年第11期37卷 118-120页

作者：杨明凡崔保安陈红英王学斌魏战勇河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

对河南荥阳某养鸡场发病鸡喉头和气管等病料进行病毒分离,采用鸡胚尿囊膜接种和琼脂扩散试验对分离病毒进行鉴定。结果表明,所分离病毒为鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV),获得了1株ILTV河南分离株。参考GenBank收录的鸡传染性喉气管炎病毒... 详细信息

对河南荥阳某养鸡场发病鸡喉头和气管等病料进行病毒分离,采用鸡胚尿囊膜接种和琼脂扩散试验对分离病毒进行鉴定。结果表明,所分离病毒为鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV),获得了1株ILTV河南分离株。参考GenBank收录的鸡传染性喉气管炎病毒基因序列设计、并合成1对引物,以ILTV地方分离株的DNA为模板,PCR扩增出1条特异性条带,测序结果与GenBank收录序列的同源性达99.9%,说明分离病毒的这一段DNA序列相对保守。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定 PCR

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鸡传染性喉气管炎病毒对宿主细胞代谢的影响及其机制研究

鸡传染性喉气管炎病毒对宿主细胞代谢的影响及其机制研究

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作者：王志涛东北农业大学

学位级别：博士

禽α-疱疹病毒1型(Gallid alphaherpesvirus 1,Ga HV-1),又称传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV),属于疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科、传喉炎病毒属唯一成员,是危害全球养禽业的主要病原之一。与人α-疱疹病... 详细信息

禽α-疱疹病毒1型(Gallid alphaherpesvirus 1,Ga HV-1),又称传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV),属于疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科、传喉炎病毒属唯一成员,是危害全球养禽业的主要病原之一。与人α-疱疹病毒相似,ILTV感染后在宿主三叉神经节建立潜伏感染,目前尚无有效方法可以将其从宿主体内彻底清除。病毒-宿主代谢相互作用一直是抗病毒治疗的重要靶标。然而,对疱疹病毒与宿主代谢相互作用的系统研究目前仅局限于少数几种人类疱疹病毒,对ILTV的代谢需求所知甚少。为了阐明ILTV感染的基本代谢需求,本研究以ILTV易感但非受纳的鸡细胞系DF-1和ILTV受纳鸡细胞系LMH为模型,在ILTV感染细胞系的全基因组转录组分析基础上,通过对ILTV感染宿主细胞的整体代谢组学分析,结合功能验证,发现ILTV感染倾向于促进糖酵解向脂肪酸(FA)和核苷酸生物合成的代谢转变,并且独立于谷氨酰胺分解利用谷氨酰胺合成核苷酸,而对TCA循环活性没有明显的影响。此外,通过代谢组学分析在ILTV感染的鸡细胞中得出的上述代谢需求均在鸡胚肾细胞和鸡胚肝细胞中得到了进一步验证。并证实ILTV复制的不同阶段需要不同的代谢途径:葡萄糖和谷氨酰胺是病毒极早期基因ICP4转录和病毒复制后续步骤所必需的;而FA的合成是病毒组装必需的,但对于ILTV复制的其他上游步骤则不是必需的。与其他疱疹病毒一样,ILTV编码的病毒基因的表达是一种级联调控模式,其调控机制尚不清楚。ICP4是ILTV的极早期(IE)基因,在ILTV复制过程中对启动早期和晚期基因的转录发挥重要作用。在本研究中,通过全基因组水平转录组数据的生物信息学分析,推测AP-1是ILTV基因转录的关键调控因子。随后对AP-1家族关键成员的功能研究表明,Fos而非Jun通过AP-1调控ILTV感染,因为通过沉默基因Fos显著降低了ICP4的转录和随后的病毒粒子的产生。通过双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀实验发现,ICP4是Fos的直接靶基因,在其启动子内具有Fos的反应元件可以调控Fos。而Jun与ICP4启动子的物理结合和转录活性均未观察到。此外,Fos的敲除降低了两种合成TCA循环中间体OAA和ATP所必需的限速酶MDH1和ATP5A1的转录。随后在Fos沉默的细胞中通过补回OAA和ATP后ICP4的转录和病毒粒子的产生得到恢复,证明Fos对MDH1和ATP5A1的转录控制具有生物学意义。本研究表明,转录因子Fos作为ILTV感染的关键宿主调控因子,通过其在病毒和宿主两方面发挥功能,这可能拓展了目前对禽疱疹病毒与宿主相互作用的认知。病毒传播是抗病毒治疗的另一个重要靶标。前期研究证实原癌基因酪氨酸蛋白激酶(Src)是ILTV感染的关键宿主决定因子,我们进一步研究发现抑制Src促进ILTV在细胞间传播与病毒复制、感染细胞增殖、细胞外囊泡以及细胞间胞质直接联系均无关。目前已有宿主脂肪酸代谢对人类疱疹病毒感染影响的研究,且本研究也证实脂肪酸代谢是ILTV组装所必需的。为了进一步阐明Src抑制后导致ILTV在细胞间扩散的机制,在本研究中通过添加脂肪酸合成抑制剂TOFA和C75,利用流式细胞仪检测ILTV-EGFP阳性细胞率和细胞死亡情况,发现抑制Src后应用TOFA和C75降低了ILTV感染的阳性细胞以及增加了感染细胞的死亡,而这种降低可通过添加棕榈酸(PAL)得到恢复。因此,本研究表明脂肪酸代谢对于Src调控ILTV在细胞间扩散和细胞致病性的作用至关重要。我们前期的研究发现ILTV感染的细胞可以通过旁分泌途径抑制未感染细胞p53活性,而激活p53不仅抑制了ILTV感染引起的远端未感染细胞的凋亡和随后的病理损伤,而且显著延缓了ILTV的传播。肿瘤抑制因子p53在细胞应激中发挥关键作用,是细胞代谢的重要调节因子。为了解析p53在调控ILTV感染的宿主细胞代谢中的作用,本研究以ILTV受纳的鸡细胞系LMH为模型,通过对ILTV感染经p53处理宿主细胞的整体代谢组学初步分析,发现抑制p53后细胞糖酵解、TCA循环上游、磷酸戊糖途径和谷氨酰胺分解相关代谢物水平增加;而激活p53虽然也能引起磷酸戊糖途径相关代谢物水平的增加,但增加程度低于p53抑制。表明p53可能通过糖酵解、磷酸戊糖途径和谷氨酰胺分解等细胞代谢途径调控ILTV感染。本研究为更好地理解p53在调控细胞代谢适应病毒感染方面提供了借鉴。综上所述,本研究揭示了ILTV感染对宿主细胞代谢的影响以及宿主调控因子Fos、Src和p53在ILTV感染过程中对细胞代谢的调控及其机制,为解析ILTV与宿主细胞相互作用奠定基础。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒代谢组学 Fos Src p53

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