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第五届南京农业大学畜牧兽医学术年会----家禽高效养殖与重大疫病防控研讨会

作者：李兆龙程晓霞朱小丽王劭陈仕龙林锋强陈少莺福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州 350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州 350013 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州 50013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州 350013

根据GenBank登录的传染性喉气管炎病毒(ILTV)的TK基因序列设计并合成l对特异性引物,以ILTV疫苗株DNA为模板,建立了检测ILTV TK基因的PCR方法。应用该方法能从临床分离毒株和疫苗株中扩增到长为427 bp的目的片段;但不能从新城疫病毒(NDV... 详细信息

根据GenBank登录的传染性喉气管炎病毒(ILTV)的TK基因序列设计并合成l对特异性引物,以ILTV疫苗株DNA为模板,建立了检测ILTV TK基因的PCR方法。应用该方法能从临床分离毒株和疫苗株中扩增到长为427 bp的目的片段;但不能从新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(1BDV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、}19亚型禽流感病毒(H9-AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌等病原中扩增出阳性条带;敏感性试验表明其DNA最小检出量为4．9 ng;应用该方法和病毒分离法对2份临床病例和人工感染鸡的检测,两者符合率为100％。上述结果表明该PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于传染性喉气管炎病毒鉴定和临床诊断。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 TK基因序列 PCR诊断病毒分离法病毒鉴定临床诊断

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鸡传染性喉气管炎病毒内蒙古地方毒株的分离与鉴定

鸡传染性喉气管炎病毒内蒙古地方毒株的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：张七斤刘思伽红梅申之义关平原李平安内蒙古农业大学动科院内蒙古农业大学动科院内蒙古农业大学动科院内蒙古农业大学动科院内蒙古农业大学动科院内蒙古农业大学动科院

传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的一种急性呼吸道传染病。近年来,ILT已成为我国养鸡业的主要疫病之一,给养鸡业造成了巨大的经济损失。在内蒙古地区的部分鸡场,也时有ILT的发生。因为ILT恢复鸡及疫苗免疫鸡有长... 详细信息

传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的一种急性呼吸道传染病。近年来,ILT已成为我国养鸡业的主要疫病之一,给养鸡业造成了巨大的经济损失。在内蒙古地区的部分鸡场,也时有ILT的发生。因为ILT恢复鸡及疫苗免疫鸡有长期带毒现象,一旦形成疫区则很难清除。故此我们对内蒙古地区的两个疑似发病鸡场进行了ILT病原的分离、鉴定,以期为内蒙古地区有效地诊断和防制本病提供科学的依据。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒鸡胚半数感染量中和指数绒毛尿囊膜分离株家畜传染病学核衣壳哈尔滨兽医研究所病毒粒子内蒙古分离与鉴定

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鸡传染性喉气管炎病毒的分离和TK基因鉴定

鸡传染性喉气管炎病毒的分离和TK基因鉴定

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福建省畜牧兽医学会畜禽传染病防治专业委员会第四届第三次学术研讨会暨福建省第三届猪病学术研讨会

作者：李兆龙朱小丽王劭陈仕龙程晓霞林锋强陈少莺福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州，350013

本文从临床表现为呼吸困难、喉头出血为主要特征的某蛋鸡场发病鸡喉头和气管等组织分离到一株病毒。该分离毒无血凝特性，应用检测ILTV TK基因的PCR能从分离毒中扩增出大小为427 bp的特异性目的片段。测序结果与GenBank收录的ILTV不同... 详细信息

本文从临床表现为呼吸困难、喉头出血为主要特征的某蛋鸡场发病鸡喉头和气管等组织分离到一株病毒。该分离毒无血凝特性，应用检测ILTV TK基因的PCR能从分离毒中扩增出大小为427 bp的特异性目的片段。测序结果与GenBank收录的ILTV不同毒株序列的同源性为100％。结果初步表明该分离毒为鸡传染性喉气管炎病毒(命名ILTV-FJ)。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒基因鉴定临床表现组织分离

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表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体的构建

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中国动物检疫 2008年第6期25卷 27-30页

作者：王晓丽邵卫星田夫林单虎青岛农业大学 266109 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 山东省畜牧兽医检验技术中心济南250022

根据文献设计2对引物,PCR扩增FPV复制非必需区中外源基因插入位点两侧翼的片段,分别克隆到pUC19和pSK质粒中,并命名为pFP1和pFP2。根据文献设计引物,PCR扩增鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的GB基因的编码区。将GB基因克隆到质粒pFP1中获得... 详细信息

根据文献设计2对引物,PCR扩增FPV复制非必需区中外源基因插入位点两侧翼的片段,分别克隆到pUC19和pSK质粒中,并命名为pFP1和pFP2。根据文献设计引物,PCR扩增鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的GB基因的编码区。将GB基因克隆到质粒pFP1中获得重组质粒pFP1-GB;用酶切质粒pEGFP,得到GFP片段并克隆到质粒pFP2中,得到重组质粒pFP2-GFP。双酶切pFP1-GB得到FP1-GB片段,并克隆到质粒pFP2-GFP中,得到重组质粒pFP1GB-FP2GPF。酶切质粒pE/L-7.5,获得背向连接的2个鸡痘病毒启动子片段——PE/L-7.5,并将该片段克隆到重组质粒pFP1GB-FP2GPF获得重组质粒pGB-GFP,该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒。在质粒pGB-GFP中,2个背向连接的启动子被克隆到的GB和GFP基因之间,分别启动GB和GFP基因的表达。经酶切和测序鉴定pGB-GFP,启动子PE/L和P7.5已分别正确地插入到GB和GFP基因之间,分别启动外源表达基因GB和筛选标记基因GFP的表达,从而证明已获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体pGB-GFP。该载体为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因的重组鸡痘病毒奠定基础。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白GB基因重组鸡痘病毒转移载体

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宿主细胞粘附相关基因表达与鸡传染性喉气管炎病毒组织嗜性相关性的研究

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中国预防兽医学报 2020年第2期42卷 187-190页

作者：谭克龙宫爱艳中国兽医药品监察所北京100081

为探究宿主细胞粘附相关基因与鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染组织嗜性的相关性,本研究采用ILTV特异性定量PCR方法检测了ILTV NP-3毒株感染雏鸡后ILTV在不同组织中的分布情况,并通过RT-qPCR方法在转录水平上检测了攻毒后不同组织中细... 详细信息

为探究宿主细胞粘附相关基因与鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染组织嗜性的相关性,本研究采用ILTV特异性定量PCR方法检测了ILTV NP-3毒株感染雏鸡后ILTV在不同组织中的分布情况,并通过RT-qPCR方法在转录水平上检测了攻毒后不同组织中细胞粘附相关基因CDH11、NEGR1和VCAN的转录水平。结果显示,ILTV感染雏鸡后在喉头、气管、哈德氏腺及骨髓中病毒载量相对较高,而在法氏囊、脾脏、胸腺和肝脏中呈阴性。同时,ILTV感染显著促进了细胞粘附相关基因CDH11、NEGR1和VCAN在组织中的表达,且与ILTV在相应组织中的分布呈显著相关性(P<0.05),表明宿主细胞粘附活性对ILTV组织嗜性具有重要作用,具体机制有待进一步研究。本研究探索了ILTV感染组织嗜性与细胞粘附分子间的关系,以期为新型免疫制剂的研制奠定了基础。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒组织嗜性细胞粘附相关基因

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1株鸡传染性喉气管炎病毒的分离和鉴定

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畜牧与兽医 2015年第7期47卷 96-98页

作者：王明辉李菊梅程思乐蒋云青海省大通县畜牧兽医站青海大通810100 青海省大通县桥头镇新城畜牧兽医站青海大通810100 河南科技学院动物科学学院河南新乡453000

鸡传染性喉气管炎是危害养鸡业的一种重要的病毒性传染病,各种日龄的鸡均易感。临床表现为呼吸困难,解剖可见喉头和气管出血、充血并有大量黏液渗出为主要病变特征。青海省西宁市某养鸡场饲养的蛋鸡20%出现类似的临床症状,部分鸡死亡,... 详细信息

鸡传染性喉气管炎是危害养鸡业的一种重要的病毒性传染病,各种日龄的鸡均易感。临床表现为呼吸困难,解剖可见喉头和气管出血、充血并有大量黏液渗出为主要病变特征。青海省西宁市某养鸡场饲养的蛋鸡20%出现类似的临床症状,部分鸡死亡,剖检可见喉头气管出血及大量黏液,临床初步诊断为鸡传染性喉气管炎病毒感染。取送检的喉头和气管组织进行实验室病毒分离和鉴定,通过病毒的SPF鸡胚分离、血清学和分子生物学PCR检测,最终确诊该养鸡场发生了鸡传染性喉气管炎病毒感染并分离到致病毒株。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定

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鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组DNA疫苗的构建与鸡IL-18联合免疫试验

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组DNA疫苗的构建与鸡IL-18联合免疫...

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：陈红英邵攀峰崔保安王振亚宋亚鹏刘金鹏河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性上呼吸道传染病。本病呈全球性流行。各种日龄和品种的鸡都可感染此病,且在鸡群内传播快、发病急,发病率极高。病鸡表现为呼吸困难、产蛋率明显下降... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性上呼吸道传染病。本病呈全球性流行。各种日龄和品种的鸡都可感染此病,且在鸡群内传播快、发病急,发病率极高。病鸡表现为呼吸困难、产蛋率明显下降和较高的死亡率,是危害养禽业的重要病毒之一。目前国内外防制本病普遍采用弱毒疫苗。这些疫苗的毒力普遍偏强,可以在鸡体内潜伏感染,而且在鸡

关键词：免疫试验鸡传染性喉气管炎病毒 IL-18 基因重组 DNA

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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的建立与应用

鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的建立与应用

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：孔意端陈峰廖理克梁伟芳顾节清广东温氏食品集团生产技术部华南农业大学动科学院广东温氏食品集团生产技术部广东温氏食品集团生产技术部广东温氏食品集团生产技术部

引言：鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus, ILTV)引起的鸡的一种高度传染性呼吸道疾病。该病在临床上易与其它病毒如传染性支气管炎病毒

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒建立与应用 PCR

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宿主p53和Fos协同调控鸡传染性喉气管炎病毒极早期基因ICP4转录机制的研究

宿主p53和Fos协同调控鸡传染性喉气管炎病毒极早期基因ICP4转录机...

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作者：刘柘一中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)是危害国内外家禽养殖业的重要传染病病原之一。ILTV感染机体后迅速在宿主三叉神经结建立潜伏感染,目前尚无任何方法可以清除。随着感染鸡只免疫力的降低,病毒会周期性... 详细信息

鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)是危害国内外家禽养殖业的重要传染病病原之一。ILTV感染机体后迅速在宿主三叉神经结建立潜伏感染,目前尚无任何方法可以清除。随着感染鸡只免疫力的降低,病毒会周期性地从潜伏期重新激活,并返回原发感染部位进行裂解复制,这是ILTV感染鸡群传染性喉气管炎反复爆发的根本原因。研究该病毒与其宿主之间的相互作用,有望建立不依赖于宿主适应性免疫应答的防治方法,为现有的ILTV防控体系提供补充。与其它疱疹病毒一样,ILTV编码基因的表达呈现级联表达调控模式。与其它疱疹病毒不同,ICP4是ILTV唯一的极早期基因,其编码产物对后续病毒早期基因和晚期基因的转录起始发挥着重要的调控作用。因此研究ICP4的转录调控机制有望通过阻止ILTV基因级联转录调控的引发,从而有效抑制病毒复制。p53和Fos都是机体重要的转录调控因子。实验室前期研究表明,二者对ICP4转录均有重要调控作用。但p53和Fos在调控ICP4转录过程中的相互关系及其机制尚不清楚。因此,本研究旨在解析宿主p53和Fos协同调控ILTV极早期基因ICP4转录的机制。本研究首先构建了宿主p53与Fos的真核表达载体以及针对二者的小干扰RNA,并分别转染鸡肝癌细胞系LMH。RT-qPCR检测结果显示,针对p53与Fos的小干扰RNA都可以显著降低靶标分子的转录水平;敲低p53或Fos都可以显著抑制ICP4的转录。转染p53与Fos真核表达载体可以显著升高靶标分子的转录水平;p53或Fos过表达均可以显著促进ICP4的转录。进一步试验表明,p53与Fos在调控ICP4转录的过程中存在协同作用。免疫共沉淀试验(CoIP)发现p53与Fos在调控ICP4转录的过程中存在物理互作。且ChIP-qPCR试验表明二者可以共同靶定在病毒基因组ICP4的上游转录调控区。双荧光素酶报告试验显示,p53而非Fos决定了ICP4的转录。为了进一步探讨p53与Fos在共同调控ICP4转录过程中的详细机制,本研究针对p53和Fos蛋白的DNA结合区域构建了相应的蛋白突变体。进一步的ChIP-qPCR与CoIP试验显示,相关突变可以在不影响p53和Fos蛋白相互作用的情况下,显著降低所构建蛋白与DNA的结合能力及其对各自经典靶基因的转录调控。利用p53和Fos蛋白的突变体发现,p53需要通过Fos间接靶定在ICP4上游转录调控区,进而发挥对ICP4转录的调控作用。本研究进一步研究了p53和Fos对彼此表达的影响,发现p53可以促进Fos的表达,并结合在Fos基因的启动子区域。然而,p53促进Fos转录的具体调控机制仍有待进一步研究。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 p53 Fos 病毒复制 ICP4

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表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建

表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建

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作者：黄海琼扬州大学

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus, ILTV)引起的急性呼吸道疾病。该病具有急性爆发和潜伏感染的特点,给养禽业造成巨大的经济损失。由于ILTV弱毒疫苗... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus, ILTV)引起的急性呼吸道疾病。该病具有急性爆发和潜伏感染的特点,给养禽业造成巨大的经济损失。由于ILTV弱毒疫苗能引起潜伏感染,并且在鸡群中的传播会造成毒力返强,从而成为新的感染来源；因此,迫切需要研制安全、高效的新型ILT疫苗。本研究以马立克氏病毒(MDV) CVI988/Rispens疫苗毒株为载体,构建表达ILTV保护性抗原gB糖蛋白的重组病毒,并分别评价重组病毒对ILT和马立克氏病的免疫效果。本研究以CVI988/Rispens疫苗毒株基因组短独特区的sorf1和sorf2作为ILTV gB基因插入位点,以网状内皮增生症病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)为启动子、绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,构建转移载体质粒pMDV-gB-GFP。用磷酸钙共沉淀法将pMDV-gB-GFP和CVI988/Rispens基因组DNA共转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,获得带有EGFP标志的重组病毒；经有限稀释法纯化、筛选,获得带有EGFP标志的重组病毒rMDV-gB-GFP。用Cre重组酶去除rMDV-gB-GFP的EGFP基因,得到重组病毒rMDV-gB。经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot试验鉴定,证明重组病毒rMDV-gB基因组中插入了ILTV gB基因,并能表达ILTV gB糖蛋白。本研究评价了rMDV-gB对ILTV强毒株攻击的免疫保护效果。将90只1日龄SPF鸡随机分成4组：rMDV-gB免疫组、rMDV-gB与ILTV弱毒疫苗联合免疫组、ILTV弱毒疫苗免疫组、攻毒对照组。前两组的试验鸡1日龄时分别颈部皮下接种5000空斑形成单位(PFU)的rMDV-gB;第二组和第三组的试验鸡于21日龄时接种1羽份的ILTV弱毒疫苗；42日龄时,各组试验鸡均用105EID50/鸡的ILTV强毒株攻击。观察试验鸡的症状表现,并于攻毒后第10天进行剖检和病理组织学检查。结果显示,在ILTV强毒株攻击后,rMDV-gB免疫组的保护率为65%,而ILTV弱毒疫苗组的保护率为41%,rMDV-gB的保护效力明显高于ILTV弱毒疫苗。本研究还发现,在1日龄雏鸡接种rMDV-gB后,再于21日龄接种ILTV弱毒疫苗,并不能提高对ILTV强毒株攻击的保护作用；表明1日龄雏鸡接种rMDV-gB后就能建立起针对ILTV的有效免疫力。本研究还评价了rMDV-gB对MDV RB1B超强毒株攻击的免疫保护效果。将60只1日龄SPF鸡随机分为3个试验组：rMDV-gB免疫组、CV1988/Rispens免疫组、攻毒对照组,每组20只试验鸡；rMDV-gB免疫组和CVI988/Rispens免疫组的试验鸡分别于1日龄时颈皮下接种5000PFU/鸡的相应疫苗；7日龄时,所有试验鸡经腹腔接种500PFU/鸡的MDV RB1B超强毒株。连续观察90天,记录各试验组鸡的发病和死亡情况。经统计,攻毒对照组90%的鸡死于马立克氏病,而rMDV-gB免疫组和CVI988/Rispens疫苗组的保护率均为100%,表明rMDV-gB可对MDV超强毒株的攻击能产生足够的保护。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒马立克病毒 gB糖蛋白同源重组免疫效力

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