检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：林志娴扬州大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的急性、高度接触性病毒性传染病。主要引起雏鸡死亡,肉鸡饲料报酬低,产蛋鸡产蛋下降。由于其病原易于突变、并可重组产生... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的急性、高度接触性病毒性传染病。主要引起雏鸡死亡,肉鸡饲料报酬低,产蛋鸡产蛋下降。由于其病原易于突变、并可重组产生新的基因型导致该病防控难度加大。国内目前还没有IBV抗原抗体标准参考品,有关S蛋白的生物学特性研究还不深入。该病主要通过接种疫苗进行防控,但由于疫苗交叉保护性差导致该病在免疫鸡群中仍时有发生。本研究通过扩增IBV经典毒株IBV-M41株以及当下流行毒株IBV-CK/CH/2014/FJ14株的尿囊液作为备用抗原,将病毒接种14日龄雏鸡制备多抗血清作为备用抗体。上述制备的抗原抗体通过一系列标定后研制了IBV抗原抗体参考品。同时,通过真核载体表达系统表达了 IBV-CK/CH/2014/FJ14株的S蛋白,利用杂交瘤技术研制获得3株单克隆抗体,以期为该病的防控与诊断提供相应的生物材料。1.鸡传染性支管炎病毒抗原抗体参考品的制备本研究通过SPF鸡胚尿囊腔接种IBV-M41株和IBV-CK/CH/2014/FJ14株扩增病毒。对收集的尿囊液通过接种鸡胚、气管环和细胞等进行定值,结果显示IBV-M41株和 IBV-CK/CH/2014/FJ14 株 EID50 值为 105.8EID50/mL。IBV-M4 1 株 TOC-ID50 值为105.25TOC-ID50/mL,TCID50 值为 104.5TCID50/mL。IBV-CK/CH/2014/FJ14 株病毒 TOC-ID50值为105.5TOC-ID50/mL,TCID50值为104.75TCID50/mL。特异性鉴定结果表明,制备的抗原不含禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)、小鹅瘟病毒(Gooseparvoviruses,GPV)、传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)、禽传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、禽网状内皮组织增生病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)、鸡传染性贫血病病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)等外源病毒。所制备的样品经无菌检验和支原体检测,结果均为阴性。经分析备用抗原的物理性状、装量差异、均一性、稳定性、长期保存性等结果均良好,因此制备的抗原可以作为IBV抗原标准参考品。使用制备的IBV-M41株、IBV-CK/CH/2014/FJ14株病毒分别免疫14日龄SPF鸡,之后每间隔7天加强免疫一次,并检测抗体效价,直至第三次免疫28天后采集血清,进行抗体相关特性定值。结果:IBV-M41株多抗血清经测定,间接免疫荧光(IFA)效价为1:800,中和效价为1:1722,酶联免疫吸附试验(ELISA)效价为1:1600,血凝抑制(HI)效价为1:27。IBV-CK/CH/2014/FJ14株多抗血清经测定,IFA效价为1:800,中和效价为1:1488,ELISA效价为1:1600。进一步特异性鉴定表明该批次获得的多抗血清未检测到REV、MDV、ALV、AIV等禽类传染病病毒的抗体。分装冻干后进行无菌检测和支原体检测表明该抗体血清中细菌、霉菌和支原体均为阴性。经分析多抗血清的物理性状、装量差异、均一性、稳定性、长期保存性等结果均良好,即制备的抗体血清可作为IBV抗体标准参考品。2.鸡传染性支气管炎病毒S蛋白在真核系统中的表达本研究首先通过PCR扩增IBV-CK/CH/2014/FJ14株病毒S基因胞外域,并克隆到pFast-Bac-HTA载体中进行酶切和测序鉴定,鉴定后转座到大肠杆菌DH1OBacTM感受态细胞中,构建重组杆粒rBacmid-FJ14-S,再通过脂质体介导转染到Sf9细胞中,获得重组杆状病毒rBac-FJ14-S。IFA鉴定表明重组病毒能与IBV阳性鸡血清反应,Western blot分析发现在140 kDa附近有一条目的条带,与预期大小一致,证明IBVS蛋白胞外域获得成功表达。与此同时,将构建好的pCAGGS-FJ14SI-IgGFc真核表达载体转染到293T细胞中,通过IFA鉴定证明,融合蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应。通过Proten G纯化柱纯化,获得纯化融合蛋白FJ14Sl-IgGFc,SDSA-PAGE、Western blot分析结果表明,纯化蛋白大小符合预期,SI融合蛋白得以正确表达。3.鸡传染性支气管炎病毒S蛋白单克隆抗体的制备本研究用超速离心浓缩的IBV-

关键词：鸡传染性支气管炎病毒参考品蛋白表达杆状病毒单克隆抗体

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鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测方法建立及非结构蛋白nsp15单克隆抗体的制备

鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测方法建立及非结构蛋白nsp15单克...

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作者：牟小东浙江大学

学位级别：硕士

根据GenBank上400多株IBV病毒的S1基因序列设计特异性RT-PCR引物扩增S1基因从91位碱基至303位碱基的213bp的保守区域。对该引物的PCR程序进行引物浓度、退火温度、延伸时间、PCR循环数等条件设置梯度进行对比并优化，建立RT-PCR检测方... 详细信息

根据GenBank上400多株IBV病毒的S1基因序列设计特异性RT-PCR引物扩增S1基因从91位碱基至303位碱基的213bp的保守区域。对该引物的PCR程序进行引物浓度、退火温度、延伸时间、PCR循环数等条件设置梯度进行对比并优化，建立RT-PCR检测方法。建立的RT-PCR方法可以特异性检测不同组织嗜性IBV毒株，不能检测包括FPV、NDV、IBDV、H1N1、H9N2等在内的其他禽类病毒核酸以及IBV自身除S基因外的部分结构蛋白基因和非结构蛋白基因（包括M基因、N基因、E基因、nsp2基因、nsp5基因、nsp15基因等）。灵敏性测定结果显示，通用型RT-PCR检测方法的检测下限为1.5ng cDNA/μl。用建立的RT-PCR方法进行临床样品的检测，在攻毒第二天即可从IBV感染的SPF鸡肛咽拭子中，以及组织病料中检测到病毒核酸。\n 以IBV肾型毒株SC021202为模版扩增1014bp的IBV非结构蛋白nsp15基因，构建了原核表达载体PET-28a-nsp15。经IPTG诱导，在大肠杆菌中成功表达出约45kDa的目的蛋白。表达的蛋白能与抗His的单克隆抗体反应。纯化的nsp15重组蛋白作为ELISA检测抗原，与肾型毒株、腺胃型毒株、呼吸型毒株制备的高免血清有反应性。纯化蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，对杂交瘤细胞进行筛选，经三次有限稀释法克隆，获得了3株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A6、2B6和4D7。Western blot分析显示三株单克隆抗体都与nsp15蛋白有较好的特异性反应。IFA检测显示3株单克隆抗体与不同组织嗜性毒株的细胞适应毒均具有较好的反应性。IBV nsp15单克隆抗体的制备为传染性支气管炎病毒的监测和鉴别以及对其蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因序列非结构蛋白单克隆抗体 PCR检测

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鸡传染性支气管炎病毒的分离及N基因、S1基因的序列分析

鸡传染性支气管炎病毒的分离及N基因、S1基因的序列分析

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作者：何锡栋福建农林大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是以鸡打喷嚏、咳嗽和气管啰音为主要症状的传染性呼吸道疾病，病原是鸡传染性支气管炎病毒（InfectiousBronchitis Virus，IBV）。近几年来，该病在某地鸡场时有发生，给当地养殖业造成... 详细信息

鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是以鸡打喷嚏、咳嗽和气管啰音为主要症状的传染性呼吸道疾病，病原是鸡传染性支气管炎病毒（InfectiousBronchitis Virus，IBV）。近几年来，该病在某地鸡场时有发生，给当地养殖业造成了巨大的损失。为掌握该地区IB流行毒株的变异情况，探寻IB频发的原因，有效地运用疫苗防制IBV引起的疾病，本课题开展了对该地区鸡传染性支气管炎病原分离、病毒基因组中N基因和S1基因序列测定以及毒株间抗原相关性分析的研究。从疑似IB病鸡肺脏、支气管及肾脏等组织中成功地分离到两株病毒，通过鸡胚培养、HA试验、雏鸡接毒试验和RT-PCR鉴定等方法，证实该病毒为IBV，并分别命名为GY株和HQ株。参考GenBank中IBV毒株部分N基因和S1基因分别设计引物，扩增目的基因片段。通过测序分析发现，GY株和HQ株N基因存在较为广泛的基因突变，还可能出现基因重组现象。其中GY株N基因及推导氨基酸同源性均与GX-YL1参考株最高，分别为97.2%和97.6%，且亲缘关系也最近；HQ株N基因及推导氨基酸与JH06111参考株同源性最高，分别为98.9%和98.5%，并且在遗传进化关系上与JH06111、GX-NN9、SC021201参考株同处一个较为独立的分支上；两个分离株N基因及推导氨基酸与疫苗株H120同源性均低于90.7%，而且亲缘关系较远。GY株和HQ株S1基因不仅存在大量的点突变，而且还出现了基因的插入现象。GY株S1基因及推导氨基酸同源性与CK/CH/LSD/091159参考株最高，分别为99.0%和98.5%，遗传进化关系上两者也较近；HQ株S1基因序列与CK/CH/Zhejiang/Quzhou3/0910参考株同源性高达99.6%，且它们亲缘关系也最近，HQ株S1基因推导氨基酸与XX09-3参考株同源性达99.1%，且亲缘关系最近；两个分离株S1基因及推导氨基酸与疫苗株H120同源性均低于77.5%，而且亲缘关系较远。运用气管环培养物将GY株、HQ株与疫苗株H120进行血清交叉中和试验，测得三者之间抗原相关系数（R）分别为0.4258、0.7034、0.4491，属同一血清型，但抗原相关性较低。研究结果表明，该地区IBV流行毒株N基因、S1基因出现了较为广泛的基因突变，同时，毒株间的基因重组也可能是该地区IBV变异株产生的另一主要原因；IBV核苷酸序列及其推导的氨基酸序列同源性和遗传进化关系、致病性、组织嗜性与血清型相互之间没有必然的联系。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离 N基因 S1基因中和试验

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因和M基因二价核酸疫苗构建与免疫效力研究

鸡传染性支气管炎病毒S1基因和M基因二价核酸疫苗构建与免疫效力...

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作者：于京穹东北农业大学

学位级别：硕士

本研究利用一段编码(G4S)3多肽的碱基linker将IBVS1和IBVM基因进行克隆。免疫荧光结果表明融合基因能够在细胞内进行表达。动物免疫试验共分6组：M组(免疫IBV M基因真核表达质粒)、S1-M组(PVAX-S1-linker-M融合基因真核表达质粒)、病毒... 详细信息

本研究利用一段编码(G4S)3多肽的碱基linker将IBVS1和IBVM基因进行克隆。免疫荧光结果表明融合基因能够在细胞内进行表达。动物免疫试验共分6组：M组(免疫IBV M基因真核表达质粒)、S1-M组(PVAX-S1-linker-M融合基因真核表达质粒)、病毒对照组V(IBV-Beaudette株),PBS组,疫苗组,以及1个空载体对照组。免疫过程中利用淋巴细胞增殖试验、酶联免疫吸附试验、中和抗体试验以及利用流式细胞术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞动态变化,对不同日龄的试验动物进行检测,最后用病毒攻击试验比较免疫不同质粒组别之间保护率。试验结果表明,4组免疫组各日龄多数免疫指标都高于空载体对照组和PBS组,对M组及S1M组比较时发现,S1-M组可以较早地诱导机体产生细胞免疫及体液免疫应答。PVAX-S1-linker-M组最为显著说明二价核酸疫苗对两种病毒的攻击有一定的保护作用,攻毒后对各试验组IBV靶器官进行了病理组织学研究,同时还对不同免疫组之间的免疫保护率进行了比较,结果进一步证明了PVAX-S1-linker-M能够很好地提高机体的免疫保护能力,抵御病毒感染的能力更为突出,表明在linker帮助下融合基因能够在机体内更好地发挥二者的生物学协同作用. 综上,通过本试验研究表明,IBV抗原S1和M联合基因免疫不但能够促进机体的细胞免疫应答能力,而且能够提高机体体液免疫应答的能力,进而促进机体产生较强的免疫力以抵抗病毒的攻击。本试验结果为进一步探讨开发研制新型抗病毒疫苗提供了理论基础。

关键词：核酸疫苗鸡传染性支气管炎病毒 IBV M基因 IBV S1基因融合基因免疫保护

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鸡传染性支气管炎病毒宁夏株的分离与鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2010年第8期 117-119页

作者：周学章贾芳宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏银川750021

为了研究宁夏地区流行的鸡传染性支气管炎病毒生物学特性及流行疾病的特点,试验对分离株进行了病毒血凝特性试验、病毒干扰试验、鸡胚致病性试验、动物回归试验,随后采用RT-PCR技术对病毒的S1蛋白基因进行扩增和序列分析,并将病毒在传代... 详细信息

为了研究宁夏地区流行的鸡传染性支气管炎病毒生物学特性及流行疾病的特点,试验对分离株进行了病毒血凝特性试验、病毒干扰试验、鸡胚致病性试验、动物回归试验,随后采用RT-PCR技术对病毒的S1蛋白基因进行扩增和序列分析,并将病毒在传代Vero、BHK-21细胞系上盲传6代,同时提取细胞基因组RNA,采用RT-PCR扩增S1蛋白基因。结果表明:分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒,不能在传代细胞上进行适应培养,该地区流行的病毒株与H120同源性极高。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定

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鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2010年第9期 120-122页

作者：胡雪静韦丽莉高智华赵东凤廊坊职业技术学院动物科学系河北廊坊065000

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鸡传染性支气管炎病毒变异机理及疫苗研究现状

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动物医学进展 2010年第12期31卷 116-119页

作者：王文秀顾节清沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 广东温氏集团浙江分公司浙江湖州313022

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有高度变异的特点,在养鸡业中不断发生变异,产生较多的血清型和基因型,且不同血清型之间缺乏交叉保护,常常导致养鸡生产中的免疫失败,防控难度较大,给我国养鸡业造成巨大经济损失。论文从IBV变异的分子机制... 详细信息

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有高度变异的特点,在养鸡业中不断发生变异,产生较多的血清型和基因型,且不同血清型之间缺乏交叉保护,常常导致养鸡生产中的免疫失败,防控难度较大,给我国养鸡业造成巨大经济损失。论文从IBV变异的分子机制(基因点突变、插入和缺失以及同源重组)、变异的理论基础(基因突变、基因重组)等方面阐述了IBV的变异机理,同时对IBV疫苗研究现状进行了综述,为鸡传染性支气管炎的免疫防控及相关研究提供参考。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒变异机理疫苗

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鸡传染性支气管炎病毒HN104株的鉴定及S1基因的分子特征

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中国农学通报 2011年第7期27卷 343-347页

作者：刘文杰王忠田李新生王泽仁李燕李双亮崔保安河南农业大学牧医工程学院郑州450002 中国兽医药品监察所北京100090

2010年4月从河南省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株病毒。通过SPF鸡胚致侏儒实验,鸡红细胞凝集试验,干扰新城疫病毒增殖试验和RT-PCR试验确认该病毒为一变异的鸡传染性支气管炎病毒。该病毒尿囊液凝集鸡红细胞的HA价为0,经胰... 详细信息

2010年4月从河南省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株病毒。通过SPF鸡胚致侏儒实验,鸡红细胞凝集试验,干扰新城疫病毒增殖试验和RT-PCR试验确认该病毒为一变异的鸡传染性支气管炎病毒。该病毒尿囊液凝集鸡红细胞的HA价为0,经胰酶处理后为27;EID5(0鸡胚半数感染量)为10-5.5/0.1mL;能够显著干扰鸡新城疫病毒LaSota株在鸡胚中的增殖;动物回归试验结果显示该病毒可致SPF雏鸡出现肾脏肿大,呈花斑肾。其S1基因全长为1617bp,经序列分析发现与鸡传染性支气管炎疫苗Massachusetts株、T株、4/91株亲缘关系较远低于78%。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒鉴定 S1基因分子特征

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鸡传染性支气管炎病毒快速诊断方法的建立

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中国兽医杂志 2009年第8期45卷 30-32页

作者：磨美兰李孟陈秋英范文胜王秀英韦平赵夏宇廖晓红广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性的呼吸道疾病,不同日龄、性别、品种鸡均可易感。IB为世界动物卫生组织及我国规定的家禽B类传染病,也是至今严重危害我国养禽业的疫... 详细信息

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性的呼吸道疾病,不同日龄、性别、品种鸡均可易感。IB为世界动物卫生组织及我国规定的家禽B类传染病,也是至今严重危害我国养禽业的疫病之一。IBV可破坏呼吸道黏膜的完整性,促进其他条件性疾病如支原体混合感染以及大肠杆菌等继发感染而提高鸡群的死亡率。[第一段]

关键词：鸡传染性支气管炎病毒快速诊断方法世界动物卫生组织呼吸道疾病冠状病毒属冠状病毒科条件性疾病继发感染

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鸡传染性支气管炎病毒弱毒株ZZ-V_(35)在鸡胚中的增殖规律

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动物医学进展 2015年第9期36卷 42-45页

作者：闫艺婷潘耀谦王青勾肖晶刘静黄亚明杨激辉刘兴友河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 畜禽智能化清洁生产河南省工程实验室河南新乡453003 动物病毒病防控与药残分析河南省重点学科开放实验室河南新乡453003

为了研究鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV ZZ-V35)在鸡胚中的增殖规律,用尿囊腔接种法给11日龄的SPF鸡胚接种IBV ZZ-V35弱毒,并构建了阳性质粒,采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time PCR)法建立了标准曲线,分别检测感染鸡胚尿囊液中36... 详细信息

为了研究鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV ZZ-V35)在鸡胚中的增殖规律,用尿囊腔接种法给11日龄的SPF鸡胚接种IBV ZZ-V35弱毒,并构建了阳性质粒,采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time PCR)法建立了标准曲线,分别检测感染鸡胚尿囊液中36、48、52、56、60、64、68、72、76、80、88、96、120、144h的病毒含量。结果显示,在鸡胚发育不同的时间点IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数分别为1.416×106、1.791×106、2.056×106、3.027×106、3.664×106、1.854×106、1.380×106、1.109×106、7.976×105、5.408×105、2.958×105、2.512×105、4.365×104、1.130×104。研究发现,IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数在60h达到最高值,即3.664×106。这为IBV ZZ-V35弱毒株疫苗的研究提供了新的依据。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒鸡胚尿囊液增殖规律实时定量PCR

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