检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2021年第5期43卷 112-116页

作者：赵秀美周生姜逸俞燕高明燕程旭戴有礼江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

为建立一种快速定量检测鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的方法,试验针对H120株5′端非编码区保守区域序列设计一对特异性引物,构建重组质粒作为阳性标准品进行SYBR GreenⅠReal-time PCR,建立了定量检测IBV的... 详细信息

为建立一种快速定量检测鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的方法,试验针对H120株5′端非编码区保守区域序列设计一对特异性引物,构建重组质粒作为阳性标准品进行SYBR GreenⅠReal-time PCR,建立了定量检测IBV的标准曲线与直线回归方程;同时,应用该方法检测三株IBV毒株在接种SPF鸡胚后不同时间段的病毒含量。结果显示:该方法标准曲线相关系数为1,线性曲线好;最低可检测病毒的浓度为101拷贝/μL,是常规PCR方法的100倍;与其它禽源病毒均不发生交叉反应,特异性好;批间和批内重复性试验变异系数均小于1%;病毒含量在接种后36 h达到峰值,且rH120-S/TZ株病毒复制效率高于H120株,rIBTZ株复制效率最低。结果表明,该Real-time PCR方法灵敏度高,特异性和重复性好,可应用于IBV的定量检测。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒荧光定量PCR 病毒检测

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鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验研究

引用

中国家禽 2007年第1期29卷 20-22页

作者：侯继波何家惠惠艳华于漾王秀花邓碧华江苏省农科院兽医研究所江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102

用A型魏氏梭菌滤液处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,使其产生血凝性,成功建立IBV血凝抑制试验方法(IBV-HI)。血凝效价为1∶256～1∶1024。抗原在2～8℃的保存期至少为5个月。用该抗原对IBV标准阳性血清、SPF鸡血清、其它鸡病标准阳... 详细信息

用A型魏氏梭菌滤液处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,使其产生血凝性,成功建立IBV血凝抑制试验方法(IBV-HI)。血凝效价为1∶256～1∶1024。抗原在2～8℃的保存期至少为5个月。用该抗原对IBV标准阳性血清、SPF鸡血清、其它鸡病标准阳性血清以及含M41株病毒的灭活苗免疫的鸡血清进行检测,证明IBV-HI试验具有很好的特异性。结果表明,该方法简便、快速、特异性强,可用于疫苗质量控制和疫苗免疫效力测定。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验

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鸡传染性支气管炎病毒XJ株N基因的克隆表达及抗原性初步鉴定

引用

新疆农业大学学报 2010年第2期33卷 142-145页

作者：齐晓亮夏俊成进陆桂丽沙依兰古丽汪萍新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 新疆农业大学动物医学学乌鲁木齐830052

根据发表的鸡传染性支气管炎病毒N基因序列设计一对引物,经RT-PCR扩增得到1 230 bp DNA片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-N,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞***21(DE3),并进行IPTG诱导表达,结果表明,重组菌可... 详细信息

根据发表的鸡传染性支气管炎病毒N基因序列设计一对引物,经RT-PCR扩增得到1 230 bp DNA片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-N,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞***21(DE3),并进行IPTG诱导表达,结果表明,重组菌可表达分子质量为50 kD的融合蛋白。Western-blotting结果显示,该重组蛋白能与IBV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 N基因克隆表达免疫印迹

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鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

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安徽农业科学 2008年第8期36卷 3226-3227,3249页

作者：杨帆李淑梅汤波刘平新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 河南科技学院化工学院河南新乡453003 新乡医学院保健科河南新乡453003

[目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1... 详细信息

[目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1%胰酶、卵磷脂酶C和10%乙醚处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡、绵羊、人、小鼠和兔的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性。该分离株IBV-HN05和标准毒株IBVM41对NDVLaSota都有抑制作用。该病毒对9日龄鸡胚的致病变率达100%。通过鸡胚矮小试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化。PCR扩增结果进一步证实了该分离株为IBV病毒。[结论]该研究为SARS病毒的研究提供了动物模型。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定

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聊城市阳谷县鸡传染性支气管炎病毒感染情况调查及S1基因遗传进化分析

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畜牧与饲料科学 2025年第1期46卷 104-108页

作者：刘庆伦刘高升阳谷县农业技术推广服务中心山东阳谷252300 聊城大学农学院山东聊城252000

[目的]了解山东省聊城市阳谷县鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的流行情况和基因型特点。[方法]2022—2023年从阳谷县养殖量较大的4个乡镇的27个养鸡场采集病料样品266份,应用RT-qPCR法进行IBV检测,然后利用RT-... 详细信息

[目的]了解山东省聊城市阳谷县鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的流行情况和基因型特点。[方法]2022—2023年从阳谷县养殖量较大的4个乡镇的27个养鸡场采集病料样品266份,应用RT-qPCR法进行IBV检测,然后利用RT-PCR法扩增部分阳性样品的S1基因序列,分析阳性样本基因型和遗传变异情况。[结果]4个乡镇的养鸡场均存在IBV感染,从266份病料样品中检出42份IBV核酸阳性样品,养殖场阳性率和样品阳性率分别为51.85%(14/27)和15.79%(42/266);规模化蛋鸡场、规模化肉鸡场和散养鸡场样品中,以散养鸡场阳性率和样品阳性率最高,分别为57.14%(8/14)和21.30%(23/108);春季和冬季样品的IBV检出率较高,分别为24.53%(26/106)和12.05%(10/83);1月龄以下鸡群样品的阳性率最高,为33.75%(27/80)。对7份IBV阳性样品S1基因序列进行扩增、测序和分析,发现5份属于GI-19谱系,2份属于GI-22谱系。[结论]阳谷县存在IBV流行,春季和冬季为感染高发期,1月龄以下鸡群和散养鸡群感染风险较高,GI-19和GI-22为该地区IBV的优势谱系。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒流行情况 S1基因基因型

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鸡传染性支气管炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

鸡传染性支气管炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

引用

作者：邢俊吉中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性呼吸道疾病。由于IBV易变异,不同血清型毒株之间具有较小的交叉保护性甚... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性呼吸道疾病。由于IBV易变异,不同血清型毒株之间具有较小的交叉保护性甚至无交叉保护性,因此,IB仍是危害世界养禽业的重要疫病之一。通过单克隆抗体技术对IBV抗原表位的研究,不仅有助于了解IBV抗原结构与功能的关系,而且对该病的诊断以及设计安全有效的基因工程表位疫苗等具有重要的意义。本研究首先通过RT-PCR克隆了IBV CK/CH/LHLJ/04Ⅴ毒株681bp的M蛋白基因,并将其克隆到pMD18-T载体进行测序,通过双酶切将羧基端387bp的M基因片段亚克隆到原核表达载体pET-30c(+)上,构建重组质粒pET-30c-M。然后将重组阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导表达。SDS-PAGE分析显示,表达的鸡传染性支气管炎病毒重组M蛋白分子量约为20kDa。通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化此蛋白,逐步透析法对其进行复性。Western Blot检测表明重组M蛋白能与鸡抗IBV的抗血清发生特异性反应,证明重组M蛋白具有良好的抗原性。以表达的IBV重组M蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠并通过常规杂交瘤技术制备抗IBV M蛋白的单克隆抗体。经过间接ELISA和Western Blot筛选和克隆后融合后的杂交瘤细胞,最终获得了两株能稳定分泌抗IBV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为13A3和15E2。其单抗亚类均为IgG1,轻链均为κ链。这两株单克隆抗体具有良好的特异性,均能与IBV CK/CH/LHLJ/04Ⅴ毒株的M蛋白发生特异性的反应,为M蛋白功能研究及抗原表位研究奠定了基础。为了详细而精确的研究IBV M蛋白的表位结构,本研究设计表达了一组总数为13个部分重叠且覆盖羧基端387bp M基因的短肽融合蛋白,利用肽扫描技术对这两株M蛋白的单克隆抗体所针对的抗原表位进行了研究,鉴定出了一个新的M蛋白抗原表位:199FATFVYAK206。Western blot和同源性分析结果显示,此表位是IBV M蛋白的一个高度保守的线性B细胞抗原表位。本研究结果对进一步阐明了IBV M蛋白抗原结构,探讨其表位生物学功能,设计科学合理的疫苗和诊断试剂具有重要的意义。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒重组M蛋白单克隆抗体肽扫描抗原表位

来源：评论

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鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其表位的鉴定

鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其表位的鉴定

引用

作者：宋扬中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitism, IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的呼吸道、泌尿生殖系统和消化系统损伤的一种急性、高度接触性传染病。自1931年Schalk和Hawn首次报道了该病以来,IBV... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitism, IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的呼吸道、泌尿生殖系统和消化系统损伤的一种急性、高度接触性传染病。自1931年Schalk和Hawn首次报道了该病以来,IBV不断地发展变异,已出现30多种血清型,由于不同血清型毒株之间交叉保护力弱,给IB的诊断及防治带来了极大的困难,造成了养禽业巨大的经济损失。通过单克隆抗体技术对IBV抗原表位的研究,不但可以深入了解IBV的抗原结构,而且便于设计科学合理的表位疫苗和诊断试剂,对IB的诊治具有重要的意义。本研究将IBV CK/CH/LDL/97Ⅰ作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术,经过Western blot和间接ELISA方法筛选克隆后,最终获得了一株能够稳定分泌IBV N蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株6D10。单克隆抗体重链为IgG1亚型,轻链为κ链。MAb 6D10特异性良好,可与IBV CK/CH/LDL/97Ⅰ毒株和重组N蛋白发生特异性反应,为进一步鉴定N蛋白抗原表位和深入研究其功能奠定了基础。为了鉴定MAb 6D10对应的抗原表位,本实验利用制备的IBV N蛋白MAb 6D10为靶分子对噬菌体展示随机12肽库进行生物淘选。经过3轮淘选,获得一致序列FGPRTK。此序列与IBV N蛋白242FGPRTK247序列完全一致。人工合成这段多肽的基因编码序列并进行原核表达,再利用MAb 6D10对表达产物进行Western blot和ELISA分析,结果显示,表达FGPRTK的融合蛋白均可被MAb 6D10特异性识别,由此表明242FGPRTK247为IBV CK/CH/LDL/97Ⅰ株N蛋白的一个线性B细胞抗原表位。为了检测该表位的反应原性,实验又将表位融合蛋白与鸡的IBV阳性血清进行ELISA检测,结果表位多肽与鸡的IBV阳性血清反应性良好。同源性分析发现,表位序列FGPRTK与所比较的不同血清型IBV毒株N蛋白相对应区域的氨基酸序列(242～247aa)的同源性为100%,因此本实验鉴定的表位是IBV N蛋白一个保守的线性B细胞抗原表位。该实验结果为进一步了解IBV N蛋白抗原结构和功能的关系,以及为建立IBV诊断方法奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体 N蛋白抗原表位噬菌体展示

来源：评论

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鸡传染性支气管炎病毒抗原表位的筛选及鉴定

鸡传染性支气管炎病毒抗原表位的筛选及鉴定

引用

作者：安烨首都师范大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis, IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。本研究利用噬菌体随机展示肽库技术筛选出IBV的2个抗原模拟表位，将获得的抗原模拟... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis, IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。本研究利用噬菌体随机展示肽库技术筛选出IBV的2个抗原模拟表位，将获得的抗原模拟表位序列展示于大肠杆菌鞭毛蛋白的硫氧还蛋白区，重组大肠杆菌能与IBV阳性血清呈特异性反应。本研究为进一步研究鸡传染性支气管炎新型疫苗和新型诊断技术奠定基础。利用辛酸—硫酸铵法纯化的IBV阳性鸡血清IgG作为靶分子，对噬菌体展示随机12肽库进行筛选。三轮生物淘洗后，目标噬菌体获得了125倍富集。从中随机挑选50个噬菌体克隆进行扩增，用ELISA法检测其与IBV阳性血清的结合活性，结果获得22个阳性克隆。对阳性克隆提取ssDNA进行测序分析，并经过竞争抑制ELISA鉴定，确定带有KSPKHSSSALHF和SIIQMNLHRPTS这2个短肽序列的噬菌体克隆可与IBV阳性血清结合，并对IBV抗原有竞争抑制作用。将这两种序列与GenBank中已发表的IBV氨基酸序列比较，未发现有同源性。提示这两个肽可能是IBV的抗原模拟表位。应用基因工程技术，将编码KSPKHSSSALHF和SHQMNLHRPTS的DNA片段分别插入质粒pFliTrx，成功构建重组展示载体p1和p2，并分别转化大肠杆菌G1826，形成展示IBV模拟抗原表位肽的重组菌F1和F2。体外抗原抗体反应试验表明重组菌F1与F2可以与IBV阳性鸡血清特异性结合。提示得到的2个抗原模拟表位在脱离噬菌体后，仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。研究结果初步表明，鉴定出的2个IBV抗原模拟表位可作为候选表位，对研制新型鸡传染性支气管炎病毒诊断试剂及疫苗具有潜在的应用价值。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒噬菌体展示模拟表位筛选鞭毛展示

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鸡传染性支气管炎病毒东北(DB)流行株生物学特性及其免疫原S1基因的克隆鉴定与HaeⅢ RFLP分析

鸡传染性支气管炎病毒东北(DB)流行株生物学特性及其免疫原S1基因...

引用

作者：祁贤东北农业大学

学位级别：硕士

以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)国外标准株M<,41>、H<,52>和澳大利亚T等为参考,对东北分离株(DB)的生物学特性进行了比较研究.结果表明DB株在抗原性、血凝特性、细胞培养特性和血清型等方面均与IBV标准株有... 详细信息

以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)国外标准株M<,41>、H<,52>和澳大利亚T等为参考,对东北分离株(DB)的生物学特性进行了比较研究.结果表明DB株在抗原性、血凝特性、细胞培养特性和血清型等方面均与IBV标准株有所差异.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western blotting)实验表明病毒主要由3条结构蛋白(S、M和N)组成,且DB株S蛋白与鼠抗T株高免血清交叉反应很弱.间接Dot-ELISA表明病毒抗原与美国IBV特异性诊断血清呈阳性反应.IBV无直接血凝活性,但经1%胰蛋白白酶、1%卵磷脂酶C和10%乙醚处理,可不同程度地凝集多种动物和人"O"型红细胞.病毒在单层鸡胚肾细胞上盲传数代后,可引起细胞病变(CPE).气管环组织培养交叉中和试验表明DB株与M<,41>、H<,52>的血清型相差较远,而与T株有一定程度的抗原交叉反应.

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因遗传变异生物学特性支气管炎病毒鸡基因逆转录-聚合酶链反应

来源：评论

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鸡传染性支气管炎病毒核衣壳（N）蛋白的原核表达及其抗原性分析

鸡传染性支气管炎病毒核衣壳（N）蛋白的原核表达及其抗原性分析

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作者：齐晓亮新疆农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus, IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病。由于IBV核衣壳(N)蛋白是其主要的结构蛋白,具有很强的免疫原性,是IBV诱导体... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus, IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病。由于IBV核衣壳(N)蛋白是其主要的结构蛋白,具有很强的免疫原性,是IBV诱导体液免疫、细胞免疫应答的重要免疫原,而且比较保守,因此适宜用作检测IBV特异性抗体的抗原。本研究参照GenBank中IBV N基因序列设计一对特异性引物,提取IBV的RNA进行RT-PCR扩增,并克隆至pGEM-T Easy载体中,转化*** DH5α感受态细胞,获得重组质粒pGEM-T-N,进行序列测定。将目的片段经EcoR I和Xho I双酶切,克隆入经同样处理的大肠杆菌原核表达质粒pET-28a(+),转化BL21(DE3)感受态细胞并用IPTG进行诱导表达,通过镍离子亲和树脂对其进行纯化。SDS-PAGE结果表明,IBV N基因在BL21(DE3)成功表达,相对分子质量约为50 kDa,表达的目的蛋白主要以可溶形式表达。经Western blotting分析,表明IBV N蛋白能被IBV阳性血清特异识别,具有良好的反应原性。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白原核表达反应原性

来源：评论

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