检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：吴瑞婷四川农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触传染性疾病,是危害养禽业的主要传染病之一。其血清型众多,且不同血清型之间的交叉反应小甚至不存在交叉反应,而且现有的商品化疫苗对流行毒株无法提供有效... 详细信息

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触传染性疾病,是危害养禽业的主要传染病之一。其血清型众多,且不同血清型之间的交叉反应小甚至不存在交叉反应,而且现有的商品化疫苗对流行毒株无法提供有效的免疫保护作用,使得IB在免疫鸡群仍不断流行传播。因此,在本地区流行毒株当中培育弱毒疫苗,对防治IB的发生和流行有重要的意义。Sczy3为本实验室2009年分离的一株LX4型IBV毒株,将其在非免疫鸡胚连续传至100代(P100)以致弱,希望制备出一株致病力减弱但具有良好免疫原性的IB疫苗株。试验结果显示：毒株在鸡胚传代过程中,病毒滴度逐渐升高,接种鸡胚出现典型病变,毒株能够高度适应鸡胚；与之相反,取不同代次毒进行动物试验,结果显示该毒株对非免疫雏鸡的致病力随着鸡胚传代次数的增加会逐渐降低。P100代毒接种鸡群后,未出现临床发病症状,发病率和死亡率均为0%,说明Sczy3毒株在鸡胚连续传至P100代时已充分致弱。为了观察四川地区近年来IBV的流行特点,本试验在2012-2013年期间对四川部分地区IBV进行了分离鉴定,共分离鉴定出10株IBV野毒株。对毒株S1基因进行克隆测序,并与GenBank上公布的30株参考毒株的相应序列进行比较分析。结果发现：分离株与参考株之间S1核苷酸序列的同源性为71.0%-99.8%；而10株IBV分离株彼此之间的S1基因核苷酸序列的同源性为74.5%-98.7%。建立遗传发育进化树发现：40株毒株可分为6个基因型,10株四川分离株分属于3个基因型,其中7株与近年国内主要流行株LX4属同一基因群,还有2株与台湾地区特有流行株TW2296/95、TW2575/98属同一基因群。大部分毒株与当前常用疫苗株的亲缘关系比较远。这一结果表明：目前在四川IBV的流行仍是以LX4型为主,但TW型IBV也逐渐开始流行起来。为评价Sczy3 P100对同源毒株及近年四川IBV流行毒株的免疫保护效力。取Sczy3 P100代毒接种7日龄非免疫雏鸡,免疫后2周分别用Sczy3 P3和分离株ScT、CK/CH/SCEM/12I进行攻毒,统计各试验组鸡群抗体效价、攻毒后临诊症状和病死率、气管和肾脏的带毒情况等指标,并制备组织病理学切片。结果显示：免疫组鸡只血清样品全部转为阳性,而非免疫对照组检测全为阴性,Sczy3 P100对同源毒株和同一基因型分离株CK/CH/SCEM/12I均可提供有效免疫保护；而对不同基因型毒株ScTW不能提供有效免疫保护,试验鸡可检出较高比例的气管和肾脏带毒。目前我国有众多的IBV基因型流行,故而1BV新疫苗的研究任重道远。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒流行毒株 S1基因免疫保护效力

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鸡传染性支气管炎病毒国内分离株LX<,4>5a、5b及N基因的研究

鸡传染性支气管炎病毒国内分离株LX<,4>5a、5b及N基因的研究

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作者：杜恩岐西北农林科技大学

学位级别：硕士

该研究将鸡传染性支气管炎病毒国内分离株IBV-LX4 N基因亚克隆于大肠杆菌原核表达质粒pPROEX<\'TM>HTa中,构建拟表达重组鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的重组质粒pPROEX<\'TM>HTa-N.经核苷酸序列测定... 详细信息

该研究将鸡传染性支气管炎病毒国内分离株IBV-LX4 N基因亚克隆于大肠杆菌原核表达质粒pPROEX<\'TM>HTa中,构建拟表达重组鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的重组质粒pPROEX<\'TM>HTa-N.经核苷酸序列测定后的阳性质粒转化*** DH5a进行诱导表达.

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 5a、5b、N基因克隆表达重组N蛋白纯化多克隆抗体免疫原性

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鸡传染性支气管炎病毒的分离及其S1基因重组5型腺病毒的构建

鸡传染性支气管炎病毒的分离及其S1基因重组5型腺病毒的构建

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作者：宋菲菲青岛农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)是由冠状病毒科(Coronavirdae)冠状病毒属(Coronavirus)传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，给养禽业造成重大损失。鸡传染性支气... 详细信息

鸡传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)是由冠状病毒科(Coronavirdae)冠状病毒属(Coronavirus)传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，给养禽业造成重大损失。鸡传染性支气管炎在免疫鸡群中的频繁暴发，给该病的免疫防控带来了极大的困难。\n 本研究通过病毒形态观察、致鸡胚矮小化试验、血凝试验等分离获得1株鸡传染性支气管炎病毒，命名为QS10株。利用RT-PCR对其S、N基因进行了扩增和序列分析，并绘制了S1基因核苷酸序列系统进化树。结果显示，QS10在电镜下呈直径80～120nm的圆形粒子，接种鸡胚100％出现侏儒胚和死亡胚，血凝效价为1∶1024，EID50为107.38/0.2ml，该分离毒株与中国常用疫苗毒株、国内流行毒株亲缘关系均较远，而与澳大利亚流行毒株S1基因的核苷酸序列同源性达91.4％～99.6％，推测该毒株与澳大利亚流行毒株可能具有相同的进化来源。\n 参照QS10株S1基因的全序列设计一对引物，通过RT-PCR克隆到S1基因，将其连接至pUC19载体，测序鉴定正确后，利用HindⅢ和BamHⅠ双酶切将S1基因从重组克隆质粒上切下，连接至相同酶切处理的腺病毒穿梭质粒载体pacAd5CMVK-NpA中，酶切及测序鉴定重组穿梭质粒命名为pacAd5CMV-S1。利用限制性内切酶PacⅠ将上述构建好的重组穿梭质粒线性化，与同样利用PacⅠ酶切线性化并回收的腺病毒骨架质粒pacAd59.2-100共同转染人胚胎肾HEK293AD细胞系，在HEK293AD细胞中完成同源重组，并包装出携带S1基因的重组人5型腺病毒，命名为rAd5-S1，另外，利用线性化的pacAd5CMVK-NpA和pacAd59.2-100重组获得的腺病毒命名为wt-rAd5;4～9代传代后，各个重组病毒的培养滴度都能达到107TCID50。\n 获得重组病毒后，对其进行电镜观察表明获得的病毒具有典型的腺病毒形态;用重组腺病毒感染HEK293AD细胞，提取细胞总RNA，通过RT-PCR，在转录水平上证明了重组腺病毒能够介导靶基因在真核细胞中表达;最后，对感染重组病毒后的HEK293AD细胞做间接免疫荧光染色和细胞总蛋白做Western-blot检测，结果在蛋白水平上证明了靶基因在被感染细胞中的表达。\n 综上所述，本研究从病死鸡的腺胃组织中分离到一株与澳大利亚流行毒株可能具有相同进化来源的鸡传染性支气管炎病毒，命名为QS10株;以该分离毒株的S1基因为靶基因，成功构建了介导表达QS10株S1蛋白的复制缺陷性人5型腺病毒，并在形态学和分子生物学两方面对该重组腺病毒进行了鉴定，为研究安全高效的IBV重组腺病毒疫苗奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定 S1基因重组腺病毒

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鸡传染性支气管炎病毒N和S1基因的克隆表达及运送N基因真核质粒减毒沙门氏菌在鸡体内的免疫原性

鸡传染性支气管炎病毒N和S1基因的克隆表达及运送N基因真核质粒减...

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作者：田华荣扬州大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）,为冠状病毒属一员,引起鸡的一种急性、高度接触性传染病。减毒苗常用于预防该病,但效果不理想且存在毒力返强的危险。为此,IB已成为养禽业最难控制的疫病之一。目前现有的IB... 详细信息

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）,为冠状病毒属一员,引起鸡的一种急性、高度接触性传染病。减毒苗常用于预防该病,但效果不理想且存在毒力返强的危险。为此,IB已成为养禽业最难控制的疫病之一。目前现有的IB基因工程疫苗虽可诱导机体产生一定的免疫保护效应,但与传统免疫相比,还存在一定的差距。增强IBV DNA疫苗的免疫效果对于预防IB的发生已显得尤为重要。为此,本研究扩增出IBV N基因和S1基因,对其序列进行了分析。在此基础上分别构建了N基因的原核表达质粒及真核表达质粒。诱导后重组菌的菌体蛋白与IBV阳性血清反应后,具有一定的抗原性。同时用减毒沙门氏菌作为运送真核表达质粒的载体,以商品鸡为动物模型,探讨其免疫特性。 1.鸡传染性支气管炎病毒N基因和S1基因的克隆、序列分析及原核表达提取IBV C9001分离株RNA作为模板,根据GenBank登陆的相应S1基因和N基因序列设计特异性引物,其中,用于扩增S1基因的下游引物人为加入终止密码子。RT-PCR扩增后得到全长的N基因和S1基因。序列测定结果显示,所克隆的IBV C9001株N基因ORF全长为1230 bp,编码409个氨基酸;同源性比较结果表明,其与GenBank中有代表性的参考毒株N基因核苷酸和氨基酸序列有较高的同源性,在85.5%～99.8%之间。其中与Guangdong株、H52株、saib14株和saib wj株氨基酸序列同源性高达99.3%99.8%,尤其以H52株同源性最高。所克隆的S1基因ORF全长1659 bp,编码552个氨基酸;同源性比较结果表明:与GenBank中有代表性的参考毒株S1基因核苷酸和氨基酸序列有较高的同源性,在71.5%～99.3%之间。纯化的PCR产物和pBV220质粒分别用EcoR I和SalⅠ酶切并回收。然后,将回收后的载体片段（pBV220）和目的片段（N）连接,构建重组原核表达质粒,限制性内切酶EcoR I、SalⅠ筛选和酶切分析阳性克隆。将pBV220-N重组大肠杆菌通过温度敏感诱导4h,其菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到一条大小为46 kD左右的特异蛋白条带而含空质粒pBV220的大肠杆菌经诱导后未见目的蛋白表达。用IBV阳性血清对重组菌诱导后的全菌体蛋白进行Western-blotting检测,结果表明,诱导后重组菌的菌体蛋白与IBV阳性血清反应后,具有一定的抗原性。 2.运送IBV N基因真核表达质粒的减毒沙门氏菌的构建及其在鸡体内诱导的免疫应答用限制性内切酶BamHⅠ、XhoⅠ将N基因从相应的重组质粒中切出,重组到真核表达载体pVAX1相应的酶切位点中,获得重组质粒pVAX1-N。以脂质体转染技术将重组质粒转染COS-7细胞,通过间接免疫荧光法进行表达产物检测,结果表明转染重组质粒的COS-7细胞有绿色荧光。这表明构建的重组真核表达质粒可在体外表达N蛋白抗原。通过电转化法将重组质粒pVAX1-N转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,经PCR和沙门氏菌特异性血清凝集试验鉴定,获得重组菌SL7207（pVAX1-N）。将重组菌SL7207（pVAX1-N）分别以1×109 CFU、5×109 CFU、1×1010 CFU口服接种4日龄商品代伊莎褐蛋鸡,2周内所有试验鸡均无任何不良反应,试验结果初步表明重组菌SL7207（pVAX1-N）具有良好的安全性。首免35天,各试验组鸡体重在0.396 Kg-0.417 Kg之间,重组菌免疫组、灭活苗免疫组、H120免疫组与空白对照组之间没有显著性差异（P>0.05）。这说明重组菌免疫在一定程度上不影响鸡的生长。以5×109CFU剂量的重组菌SL7207（pVAX1-N）口服和滴鼻免疫4日龄商品鸡,免疫两次,间隔两周。在二免三周,用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析重组菌免疫在鸡体内诱导免疫应答的情况。结果表明重组沙门氏菌具有良好的免疫原性,能分别诱导机体产生体液免疫应答和黏膜免疫应答。抗体测定结果表明,SL7207（pVAX1-N）免疫组血清抗体水平增加,与空白对照组、空载体对照组存在一定的差异,但不显著（P>0.05）。小肠黏膜抗体测定结果表明,SL7207（pVAX1-N）免疫组、H120免疫组均可以检测到针对N蛋白的特异性黏膜抗体。高于空载体对照组、空白对照组,但不存在显著性差异（P>0.05）。但部分个体的血清抗体和黏膜抗体水平与空载体对照组、空白对照组存在显著性差异（P<0.05）。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 N基因原核表达真核表达减毒鼠伤寒沙门氏菌免疫特性

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鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LSD/051全基因组序列分析及弱毒疫苗对其保护性的研究

鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LSD/051全基因组序列分析及弱毒疫苗...

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作者：王钰黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

近年来鸡传染性支气管炎在很多国家普遍流行,已成为危害世界养鸡业的重要疫病之一。传染性支气管炎疫苗在传染性支气管炎的防制过程中起着重要的作用。但是该病在免疫鸡群中时有发生,具体发病机制还不明确。本研究根据GenBank上公布的IB... 详细信息

近年来鸡传染性支气管炎在很多国家普遍流行,已成为危害世界养鸡业的重要疫病之一。传染性支气管炎疫苗在传染性支气管炎的防制过程中起着重要的作用。但是该病在免疫鸡群中时有发生,具体发病机制还不明确。本研究根据GenBank上公布的IBV基因组序列,经比较后设计了29条引物,用RT-PCR方法对鸡传染性支气管炎病毒地方分离株CK/CH/LSD/05I的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明:CK/CH/LSD/05I毒株基因组序列全长27638bp,A+T的含量为61.78%,具有典型的冠状病毒基因组结构。基因内碱基的插入和缺失主要分布在1位、2890～3450位、20410～20770位、23900～25500位和27110～27350位。与GenBank上公布的8株IBV基因组序列Beaudette、Mass41、Cal99、BJ、KQ6、GD/S14/2003、SAIBK、LX4的同源性分别为88.7%、88.7%、89.5%、86.1%、88.6%、86.9%、88.5%和86.9%,CK/CH/LSD/05I株基因组不同区域的同源性分析结果表明,3′UTR和5′UTR是基因组中最为保守的区域,而S基因是基因组中变异最大的区域,同源性在66.8%83.7%。系统发育进化分析结果表明CK/CH/LSD/05I株单独划分为一个分支。通过S1基因比较、系统发育进化分析、BLAST搜寻和动物试验研究发现,CK/CH/LSD/05I是一株新型变异毒株。动物感染试验表明,CK/CH/LSD/05I感染鸡的肾脏病变不明显,仅有20%的感染鸡肾脏病毒分离呈阳性,但100%感染鸡呼吸道病毒分离阳性,表明该病毒不是中国普遍流行的“肾型”毒株,而其对呼吸道具有强的嗜性。同时,试验应用弱毒疫苗H120和本实验室鸡胚传代致弱的3株异种毒株进行了动物保护试验,结果显示用CK/CH/LSD/05I攻毒后,这4株异种传染性支气管炎病毒的免疫对试验鸡群气管的保护率很低。初步提示该毒株可能属新的血清型病毒。本研究丰富了冠状病毒的生物信息数据库,为进一步从分子水平研究IBV的致病机理、变异机制等奠定了基础;同时动物试验评价不同弱毒疫苗对CK/CH/LSD/05I的保护性,为免疫鸡群感染传染性支气管炎病毒提供了理论依据,为鸡传染性支气管炎的防控提供了新思路。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒基因组分析遗传演化

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鸡传染性支气管炎病毒H120型M、N基因的免疫原性研究

鸡传染性支气管炎病毒H120型M、N基因的免疫原性研究

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作者：孙晓云上海海洋大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种鸡的急性传染性疾病,通过接触相互传染,各年龄的鸡都可发病,该病在世界范围流行十分广泛,是侵害养... 详细信息

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种鸡的急性传染性疾病,通过接触相互传染,各年龄的鸡都可发病,该病在世界范围流行十分广泛,是侵害养鸡业的最严重的传染病之一,被世界动物卫生组织（OIE）列为禽病B类传染病。由于鸡传染性支气管炎病毒（IBV）极易发生变异,经常出现新的血清型,并且不同血清型之间交叉感染现象严重,不同毒株之间基本没有交叉保护力,所以该病的免疫非常困难,鸡群内呈爆发式发生,给养禽业带来巨大的经济损失。本研究对IBV H120株基因序列进行分析,将H120株M基因和N基因构建到真核表达载体中,并对重组质粒的免疫原性进行了研究,为研制IB的DNA疫苗提供依据。1.从GenBank上下载登录号为FJ888351.1的IBV H120型的基因序列,并对其基因序列进行分析,IBV基因组编码的结构蛋白主要有3种,其中N蛋白最为保守,与病毒RNA的合成有关,并且N蛋白上有重要的抗原决定簇;而M蛋白的保守性仅次于N蛋白,可能与核衣壳蛋白结合,决定了病毒的出芽位置,在病毒复制过程中起一定作用,部分抗原决定簇也在M基因上存在。利用PrimerPremier5.0针对IBV-M和IBV-N基因分别设计一对引物,采用RT-PCR试验扩增出具有免疫保护作用的抗原基因M和N基因,通过对这两个基因的测序进行分析发现,IBV-M基因序列含有大约678个碱基,编码225个氨基酸;IBV-N基因序列含有大约1230个碱基,编码410个氨基酸。将其与GenBank上登录的其他毒株进行比较,发现其变异性小,同源率很高,其中IBV-M基因与其他毒株核苷酸序列同源性为84.7%100%之间,相对应的氨基酸同源性为86%100%;IBV-N基因与其他毒株核苷酸序列同源性为90.2%100%之间,相对应的氨基酸同源性为91%100%之间。2.将扩增出的IBV-M基因和IBV-N基因用EcoRⅠ和SalⅠ进行双酶切,亚克隆到pEGFP-C1-SCP-SEC载体上,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,经菌落筛选和测序,鉴定出正确的阳性克隆,完成真核表达载体的构建。将重组质粒转染到Vero细胞中,进行免疫荧光试验,可以检测到IBV-M基因和IBV-N基因在细胞内表达,并具有一定的免疫原性。这为进一步研究IBV的DNA疫苗提供了理论数据。3.将构建的真核表达载体用脂质体PEI25000按照N/P=8进行包裹,制成核酸疫苗,通过腿部肌肉多点注射进行动物免疫试验,10日龄首免,21日龄加强免疫一次,二免后用IBV H120型毒株进行攻击,连续观察15天后全部扑杀,取肾脏组织进行病毒的检测,其中H120弱毒疫苗组病毒检出率为33.3%,M质粒组病毒检出率为50%,N质粒组病毒检出率为40%,单基因的病毒检出率略高于弱毒苗组,而M+N混合质粒组病毒检出率仅为20%。明显低于弱毒苗组和单基因组。本研究制备的用PEI25000包裹的DNA疫苗,对IB的防控有重要的意义。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 M基因 N基因核酸疫苗动物保护实验

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鸡传染性支气管炎病毒（重庆株）的分离鉴定及其生物学特性研究

鸡传染性支气管炎病毒（重庆株）的分离鉴定及其生物学特性研究

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作者：李桂清西南大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一种急性、高度接触性传染病。上世纪30年代在美国爆发以来，现在已经成为世界各地流行的主要禽病。目前，我... 详细信息

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一种急性、高度接触性传染病。上世纪30年代在美国爆发以来，现在已经成为世界各地流行的主要禽病。目前，我国IB的发生已经遍布华北、西北、西南和东北等大部分省、市和自治区，虽然已广泛使用IB疫苗，但IB仍然普遍存在，尤其是在已免疫鸡群中又常常爆发IB，造成严重的经济损失。 IBV是单股RNA病毒，该病毒基因可由于点突变和重组而发生变异，故此传染性支气管炎病毒的血清型较多，已达30余种之多。已知的以侵害呼吸道为主的血清型有Conn、lowa97、JMK、Florida、Arkansas99等和以侵害肾脏为主的M41、Holte、Gray、Australia等血清型。 2006年4月，重庆某鸡场在已经进行了IB的常规免疫程序后，仍爆发了严重的疑似鸡传染性支气管炎病。为了找出确切的病原，我们对该致病病原进行了分离鉴定，并对其生物学特性进行了研究。病原的分离与鉴定：无菌采集病死鸡及濒死鸡严重病变肿大的肾脏制成悬液，菌检阴性后按照常规实验方法经鸡胚传代，收集6代鸡胚尿囊液，用1％的鸡红细胞进行血凝试验检验是否含有新城疫病毒、流感病毒。结果表明，尿囊液无直接血凝性，用1％胰蛋白酶处理后出现血凝性。将6代鸡胚尿囊液装入透析袋埋入固体PEG6000中进行浓缩纯化，经过滤除菌，滤液即为浓缩纯化的病原液。将浓缩纯化的病原液进一步经致鸡胚矮小化试验、新城疫干扰试验、动物回归试验和气管环组织培养交叉中和试验证实了分离到的病原为鸡传染性支气管炎病毒。 IBV重庆株理化性质的测定：通过半数鸡胚感染量试验测定EID50为10-6.74／mL；通过半数气管环感染量试验测得TOCID50为10-4.52／mL；氯仿敏感试验表明重庆株对氯仿敏感；乙醚敏感试验表明重庆株对乙醚敏感；热稳定试验表明重庆株对热敏感；酸碱敏感试验表明pH3.0与pH11.0的酸碱环境均可降低重庆株的毒力。用气管环组织培养交叉中和试验鉴定分离株的血清型，结果重庆株与标准T阳性血清有一定交叉反应，中和效价为1：32，与其他Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、Gray等血清型中和效价均为0，表明重庆株是一株IBV变异毒株。 IBV重庆株S1基因的克隆测序分析：提取IBV重庆株的RNA，对其S1基因应用RT-PCR方法进行了克隆与测序，使用DNAStar软件进行序列分析结果显示，重庆株的S1基因与T、Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、Gray等血清型S1基因同源性不高，分别为82.3％、77.5％、78.2％、78.6％、77.4％，进一步通过向NCBI提交重庆株的基因序列，并根据BLAST软件检索到与其具有最大同源性的毒株为比利时的B1648株，同源性高达99.6％。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒重庆株 S1基因序列分析

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鸡传染性支气管炎病毒的RNA干扰

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中国病毒学 2005年第3期20卷 272-276页

作者：刘惠莉陆承平朱伟云南京农业大学动物医学院

为探讨短的双链RNA(siRNA)对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)增殖的干扰作用,利用软件设计siRNA1280个,75%位于Pol基因内。通过同源比较和保守性分析,筛选到针对Pol、M、N基因的12个siRNA(每个基因3～4个)作为后选目的片段,分别在Vero细胞、... 详细信息

为探讨短的双链RNA(siRNA)对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)增殖的干扰作用,利用软件设计siRNA1280个,75%位于Pol基因内。通过同源比较和保守性分析,筛选到针对Pol、M、N基因的12个siRNA(每个基因3～4个)作为后选目的片段,分别在Vero细胞、9日龄SPF鸡胚上进行基因干扰试验。结果,来自Pol、N靶序列的2个siRNA在Vero细胞上及鸡胚上均对IBV增殖产生明显的干扰作用,并与siRNA剂量有一定相关性,依赖于与mRNA互补的负链siRNA存在。本研究首次证实IBV增殖过程中存在siRNA干扰现象,为利用RNA干扰(RNAi)技术控制IBV提供了新手段。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 siRNA RNAi Vero细胞 SPF鸡胚

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鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株的血清交叉血凝抑制试验

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中国畜牧兽医 2012年第2期39卷 209-211页

作者：蒋国胜阮武营马魁芳陈云杰吴倩徐凌松许岩左志军崔保安开封市动物疫病预防控制中心河南开封470002 禹王台区农林牧机局河南开封470002 开封市动物卫生监督所河南开封470002 河南省动物性食品安全重点试验室河南郑州450002

本试验用系统血凝抑制(HI)交叉试验,对鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株进行抗体区分。结果表明,M41株和Conn株标准抗原与M41阳性血清HI抗体效价在免疫后21d分别为8log2、5log2,相差3log2;免疫后28d分别为8log2、5log2,相差3log2;免疫... 详细信息

本试验用系统血凝抑制(HI)交叉试验,对鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株进行抗体区分。结果表明,M41株和Conn株标准抗原与M41阳性血清HI抗体效价在免疫后21d分别为8log2、5log2,相差3log2;免疫后28d分别为8log2、5log2,相差3log2;免疫后35d分别为8log2、5log2,相差3log2。M41株和Conn株标准抗原与Conn阳性血清HI抗体效价在免疫后21d分别为4log2、8log2,相差4;免疫后28d分别为4log2、8log2,相差4log2;免疫后35d分别为4log2、9log2,相差5log2。因此,用血清HI交叉试验能够将抗M41株和Conn株抗体区分开来。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 M41株 Conn株抗体区分

来源：评论

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鸡传染性支气管炎病毒HI抗原的制备及初步应用研究

鸡传染性支气管炎病毒HI抗原的制备及初步应用研究

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作者：冯利霞河南农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是由冠状病毒科、冠状病毒属的鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病。20世纪30年代在美国爆发以来,现在已经成为全球流行的主... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是由冠状病毒科、冠状病毒属的鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病。20世纪30年代在美国爆发以来,现在已经成为全球流行的主要禽病。IBV是单股正链RNA病毒,其基因可因点突变和重组及免疫压力发生变异,故其血清型较多,不同血清型毒株之间仅有部分或无交叉保护作用,从而给本病的防治带来困难。各地流行毒株血清型不同,由于没有一个简便、快速、特异的确定IBV血清型的方法,不能很好地了解当地IB流行株的血清型,使用的疫苗血清型与本地流行株的血清型有差异而无交叉保护’作用,造成近年来,各地养鸡场在进行了IB的常规免疫程序后,仍有IB爆发,给养鸡业造成严重的损失。所以建立一种简便、快速、实用的确定本地流行的IB的血清型的方法,并制备相应的疫苗,通过合理的免疫监测手段对鸡群的免疫水平进行实时监测迫在眉睫。 HI试验具有简便、快速的特点,国际上已将IBV HI试验用于IB疫苗的免疫效果评价和抗体水平监测上,但国内长期以来没有稳定的质量可靠的IBV HI抗原,本试验系统地研究了影响IBV HI抗原制备和保存的各种条件,摸索出了制备和保存IBV HI抗原的最佳条件,并建立了IBV HA HI试验,同时利用确定的最佳条件制备了特异性的稳定的具有较高滴度的针对河南省IB地方流行株的HI抗原,且抗原制备成本低廉,为进一步应用于生产实践奠定了基础。本试验制备IBV HI抗原的最佳条件是将低代次的IBV以每胚0.1mL的注射剂量在SPF鸡胚上增殖,无菌收取尿囊液和羊水即病毒液,将病毒液即时以4,000g,50min离心,取上清,将上清在超高速冷冻离心机上以4℃30,000g,3h离心得病毒粒子,将病毒粒子用pH6.5Tris-HCL buffer充分悬浮,浓缩后体积为原病毒液的10-2,制备魏氏梭菌培养液,并将其浓缩为原液体积的10-',将浓缩后的病毒液和浓缩后的魏氏梭菌培养液以10：4体积充分混合,置37℃水浴2h,采用1%的普通鸡红细胞和pH7.40.01MPBS,在96孔“V”形板上以25μL体系进行HA试验和病毒血凝单位的滴定,HA HI试验均在冰上进行。利用制备的IBV M41 HI抗原对河南省部分地区的IB进行了免疫效果监测,实现了IBV HI抗原的初步应用。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 IBV HI抗原制备保存魏氏梭菌培养液浓缩液免疫效果检测

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