检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：潘晓晓中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)是引发不同日龄和品种的鸡发生鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)的重要呼吸道传染病病原。IBV自20世纪30年代发现以来,在世界范围普遍流行,给世界养鸡行业造成巨大损... 详细信息

鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)是引发不同日龄和品种的鸡发生鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)的重要呼吸道传染病病原。IBV自20世纪30年代发现以来,在世界范围普遍流行,给世界养鸡行业造成巨大损失。病毒致病型、基因型、血清型复杂多样,且病毒在传播过程中不断发生包括基因突变、基因重组、基因缺失等在内的遗传演化,这给该病的有效诊断和防控造成了困难。近年来,随着对病毒分子特征和遗传演化关系的深入研究,包括世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,WOAH)IB诊断标准在内的方案,普遍采用基于病毒纤突蛋白S1亚基核苷酸遗传同源关系的基因型/谱系分类方法对病毒进行监测和鉴定,这对于IB的流行病学监测和科学防控极为重要。Real-time RT-PCR方法可快速、准确、便捷地鉴定和监测流行毒株基因型/谱系,便于及时掌握IBV流行情况并指导免疫防控。目前除了已建立的GI-7谱系毒株特异性检测方法之外,尚缺乏针对其它不同谱系IBV的快速鉴别诊断方法,尤其是源于欧洲的GI-13谱系毒株,已成为中国主要流行的毒株类型,尽管近年来研发了针对该型毒株的活疫苗株(NNA株、FNO-E55株),但缺乏快速鉴别检测方法,这限制了对该谱系毒株的及时监测和科学防控。本研究根据已报道中国流行的IBV基因型/谱系毒株的S1基因序列,利用Bio Edit软件对比分析不同基因型IBV的S1基因序列,设计了针对GI-13谱系毒株S1基因序列的引物和探针组合,通过标准品制备和鉴定以及探针、反应体系和退火温度的优化,建立了针对GI-13谱系鸡传染性支气管炎病毒特异的Real-time RT-PCR鉴别检测方法。验证了该方法的特异性、灵敏性、稳定性,并利用临床样本验证了该方法的准确性。结果显示本实验建立的Real-time RT-PCR检测方法特异性好,不仅对常见的其他鸡病毒基因组无非特异反应,且与其他不同谱系IBV基因组无交叉反应;灵敏度高,可以检测最低浓度为10 copies/μL的核酸,与PCR方法相比敏感性高1000倍;稳定性好,检测样本组内和组间变异系数均低于5%;准确性高,对含有GI-13谱系毒株的样本检测结果与RT-PCR及免疫组化方法检测结果一致。为了验证该方法的应用效果,对GI-13谱系毒株(4/91株)人工感染1日龄SPF鸡后不同时间采集的样本,以及商品肉种鸡场采集的临床样本进行检测,结果显示该方法可准确检测在人工感染鸡样本和临床样本中的GI-13谱系毒株,可用于对不同样本中GI-13谱系鸡传染性支气管炎病毒的准确检测。该方法不仅为GI-13谱系流行毒株的科学监测和免疫防控提供有效的技术方案,同时也为进一步完善中国鸡传染性支气管炎诊断标准奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 GI-13谱系 Real-time RT-PCR 特异性

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因在大肠杆菌中的表达及其抗原性的初步鉴定

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农业生物技术学报 2007年第1期15卷 107-111页

作者：谢红梅张兴晓朱来华常维山山东农业大学动物科技学院山东滨州博莱威生物技术研究所青岛出入境检验检疫局

利用基因重组技术将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因分段(A和B段)克隆到pGEX-6p-1载体中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示有明显的融合蛋白表达条带。通过IBV特异性抗体的Western blot检测,两段表达产物均能与抗体发生特异性反应... 详细信息

利用基因重组技术将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因分段(A和B段)克隆到pGEX-6p-1载体中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示有明显的融合蛋白表达条带。通过IBV特异性抗体的Western blot检测,两段表达产物均能与抗体发生特异性反应,证明表达产物具有部分抗原性。用Glutathione Sepharose 4B纯化出A段和B段的GST融合蛋白。将纯化得到的融合蛋白免疫家兔,连续免疫3次,将得到的抗体与200TOCID50(气管环半数感染)/0.1mL病毒工作液在37℃温育1h进行TOC试验,经计算A段抗体的50%血清中和终点为1∶18,而B段抗体的50%血清中和终点为1∶53,表明这两段的表达产物具有较好的免疫原性,B段表达产物更具有良好的抗原性,适合作为免疫抗原和诊断抗原,具有一定的临床应用价值。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因表达抗原性

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鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株及其S1、N蛋白单克隆抗体的制备及应用

鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株及其S1、N蛋白单克隆抗体的制备及...

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作者：赵长润广西大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性传染的病毒性呼吸道疾病,临床症状以气管啰音、咳嗽和打喷嚏为特征,可引起鸡的增重、饲料报酬... 详细信息

鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性传染的病毒性呼吸道疾病,临床症状以气管啰音、咳嗽和打喷嚏为特征,可引起鸡的增重、饲料报酬率以及产蛋量和蛋品质的下降等,给养鸡业造成严重的经济损失。IBV含有4个结构蛋白,即S、E、M和N蛋白。S蛋白可被蛋白酶裂解为S1和S2蛋白,其中S1蛋白能刺激机体产生血凝抑制抗体、中和抗体和细胞介导的免疫应答,并与致病性和组织嗜性等密切相关。N蛋白高度保守,具有免疫识别的相关抗原位点,能使机体的细胞毒性T淋巴细胞和辅助性T细胞激活,以及淋巴细胞产生抗体的能力增强。IBV基因组容易发生变异,导致血清型复杂,且不同血清型之间交叉保护有限,给IB的诊断及防控带来较大困难,由此建立准确快速高效的检测方法对IB的临床诊断与防控有着重要的现实意义。鉴于此,本研究以IBV广西优势血清型代表性毒株GX-YL5及其S1和N蛋白作为免疫原,制备单克隆抗体,并在此基础上,应用于免疫组化检测和双夹心抗体ELISA方法的建立。具体研究内容如下:1.抗IBV单克隆抗体免疫原的制备将课题组保存的IBV GX-YL5株尿囊液进行低温梯度离心和超速离心浓缩,采用q PCR进行定量分析;对本课题组保存的真核表达S1蛋白进行鉴定和浓度测定;将本课题组构建的携带IBV GX-YL5株N基因的阳性质粒p GEX-4T-N经过转化及诱导大量表达N蛋白,通过GST高亲和力纯化柱进行纯化,并应用SDS-PAGE和Western blot及BCA Protein Assay Kit进行鉴定和测定蛋白浓度。结果显示,IBV GX-YL5株尿囊液被浓缩了107.04倍,Western blot均能检测到相应的目的蛋白,S1蛋白浓度为2.35 mg/m L,N蛋白浓度为142.205mg/m L。*** GX-YL5株及其S1和N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定以IBV GX-YL5株及其S1和N蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合、间接ELISA方法筛选及3轮有限稀释法克隆,最终各获得一株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为Y2D1、S1D1、N2D5,利用小鼠腹水诱生法大量制备单克隆抗体。Western blot结果显示,单克隆抗体Y2D1与IBV GX-YL5全病毒和S1蛋白均发生特异性反应,S1D1与S1蛋白发生特异性反应,N2D5与N蛋白发生特异性反应;IFA验证结果显示,3株单克隆抗体均可在GX-YL5株感染的CEK细胞中呈现特异性荧光信号;抗体效价检测结果显示,Y2D1、S1D1、N2D5效价分别为≥2、≥2、≥2;抗体亚型鉴定结果表明Y2D1、S1D1、N2D5分别为Ig G2b、Ig G1、Ig G2b;特异性试验结果显示,获得的3株单克隆抗体仅与IBV发生特异性反应,未与禽流感病毒（AIV）等7种病毒发生反应;与本课题组保存的IBV标准株Beaudette和M41、疫苗株H120、4/91和LDT3以及包括LDT3型、4/91型、Mass型、LX4型、Taiwan型的分离株进行交叉反应性试验,结果显示Y2D1单克隆抗体仅与疫苗株H120和LDT3型分离株出现交叉反应,S1D1单克隆抗体仅不与标准株Beaudette和LX4型分离株出现交叉反应,N2D5单克隆抗体与所检测的全部毒株均发生交叉反应;中和试验结果显示,单克隆抗体Y2D1、S1D1、N2D5对IBV GX-YL5中和效价分别为1:32、1:128、1:256。3.单克隆抗体应用于免疫组化检测免疫组化检测可用于抗原定位、定性及相对定量的研究。本研究以制备的Y2D1、S1D1、N2D5单抗为一抗,应用免疫组化技术对SPF鸡人工感染IBV分离株GX-NN130048、GX-NN160421、GX-QZ170728、GX-QZ171023后5 dpi、7 dpi、11 dpi、14 dpi的气管和肾脏的IBV进行检测。结果显示,在5dpi、7dpi、11dpi、14dpi均能在气管组织和肾脏组织中检测到病毒信号,其中IBV GX-NN130048和GX-NN160421株在气管组织中病毒含量较多;GX-NN130048株在5 dpi在肾脏组织中病毒含量最高;GX-QZ171023株在5 dpi、7 dpi、11 dpi在肾脏组织中均能检测到大量病毒信号。4.双抗体夹心ELISA检测方法的建立双抗体夹心ELISA是一种高效、快速检测抗原的方法。本研究将制备的分别针对GX-YL5株S1和N蛋白的单克隆抗体S1D1和N2D5应用于建立双抗体夹心ELISA。以本课题组保存的兔抗IBV S1-N多抗作为包被抗体,单克隆抗体作

关键词：鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体免疫组化双抗体夹心ELISA

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几种鸡传染性支气管炎病毒活疫苗对中国流行毒株CK／CH／LDL／97I的保护作用评价

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病毒学报 2008年第2期24卷 111-116页

作者：张晓楠王钰李成仁刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株（JAAS、IBN、Jilin、J9和H120）和当地流行毒株（CK／CH／LDL／97I）作为研究对象，对其S1基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不... 详细信息

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株（JAAS、IBN、Jilin、J9和H120）和当地流行毒株（CK／CH／LDL／97I）作为研究对象，对其S1基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不超过76．4％和78．7％。Sl基因的核苷酸系统发育树显示，疫苗株与流行毒株分属不同进化群，亲缘关系较远，属于不同的基因型。用这五株活疫苗进行针对强毒株CK／CH／LDL／97I株的免疫保护实验，可见临床发病率为30％～100％；攻毒5d后每组随机扑杀10只鸡，采集器官，应用RT-PCR法检测病毒，气管样品病毒检出率为50％～90％，肾脏样品病毒检出率为10％～30％。由此可见：我国目前使用的主要活疫苗对异种IBV分离株的感染不能提供完全的保护作用。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 Sl基因疫苗交叉保护

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鸡传染性支气管炎病毒遗传演化最新研究进展

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家禽科学 2023年第11期45卷 61-66页

作者：张春阳王贵升郑孟加刘坤李鹏兰邹然李宏梅山东省动物疫病预防与控制中心(山东省人畜共患病流调监测中心) 山东济南250100 邯郸市峰峰矿区动物疫病预防与控制中心河北邯郸056200 山东省畜牧总站山东济南250100 山东农业大学动物科技学院(山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室) 山东泰安2710183

鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种分布范围广泛、传染性较强,能对家禽养殖业造成重大经济损害的二类动物疫病。同其他RNA病毒一样,遗传变... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种分布范围广泛、传染性较强,能对家禽养殖业造成重大经济损害的二类动物疫病。同其他RNA病毒一样,遗传变异方面为独特的套式转录方式,在复制过程中病毒基因组的不连续性和RNA聚合酶校对不完全性,致使碱基在复制过程中易发生替换、缺失和插入,进一步造成了该病毒高突变性的特征。近年来多个研究表明,IBV产生变异株的主要原因并不是点突变,而是滥用疫苗、盲目免疫所造成的基因重组,在自然选择以及外部高强度免疫压力的双重影响下,促使IBV不断演化变异产生新的强毒株。着重论述了近年来IBV在全球各地的流行状况,深入分析了IBV遗传演化发生原因,为该病的疫苗防控提供可靠的数据支撑。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒流行状况基因重组疫苗防控

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鸡传染性支气管炎病毒研究进展

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广东畜牧兽医科技 2021年第3期46卷 6-12页

作者：蔡俊呈任涛陈礼斌王思远向斌林秋燕华南农业大学兽医学院农业农村部兽用疫苗创新重点实验室人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东广州510640

鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious BronchitisVirus,IBV)引起的一类急性、高度接触传染性的呼吸道疾病。IBV主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,能够引起鸡的呼吸道炎症、肾脏损伤、产... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious BronchitisVirus,IBV)引起的一类急性、高度接触传染性的呼吸道疾病。IBV主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,能够引起鸡的呼吸道炎症、肾脏损伤、产蛋量和蛋品质下降。IBV是国内养禽业快速发展的重要疫病之一,给养禽业造成了重大的经济损失。由于易变的组织嗜性以及不同地理区域内各种IBV血清型或基因型的不断出现,IBV的防控难度也在不断升级。免疫鸡群中的疫苗接种和抗体水平监测对于预防和控制IBV感染至关重要。论文综述了IBV的历史背景、流行病学、病原学、诊断方法、防控手段及宿主对IBV的免疫应答等方面的研究进展,旨在为IBV的相关研究提供理论依据和防控策略。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒免疫应答诊断方法疫苗

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鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与初步应用

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中国动物检疫 2020年第2期37卷 81-86页

作者：王楷宬王素春樊擎莹孙亚伟康京丽汪洋刘华雷龚振华黄保续中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 河南科技大学动物科技学院河南洛阳471023

为建立一种快速准确检测鸡传染性支气管炎病毒的方法,根据鸡传染性支气管炎病毒的核衣壳蛋白基因进行引物和探针设计,建立了一种能够检测鸡传染性支气管炎病毒的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性和灵敏度检测,同时与国家标准检... 详细信息

为建立一种快速准确检测鸡传染性支气管炎病毒的方法,根据鸡传染性支气管炎病毒的核衣壳蛋白基因进行引物和探针设计,建立了一种能够检测鸡传染性支气管炎病毒的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性和灵敏度检测,同时与国家标准检测方法进行对比。结果显示,本检测方法特异性好,不与其他相关病毒发生交叉反应,灵敏度可达到10-4 ng/μL,与国标检测方法的符合率达100%。结果表明,本研究建立的检测方法可以准确鉴定鸡传染性支气管炎病毒,具有良好的应用前景。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法建立应用

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鸡传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

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安徽农业科学 2012年第8期40卷 4572-4574页

作者：王正东余弟和张建军魏波安徽和威农业开发股份有限公司安徽广德242200 扬州威克生物工程有限公司江苏扬州225000

[目的]从发病鸡群中分离出鸡传染性支气管炎病毒,并对其进行鉴定。[方法]从安徽某鸡场发病鸡群中分离出鸡传染性支气管炎病毒,采用鸡胚盲传,观察病毒对鸡胚的致病作用。通过动物回归试验,在SPF鸡上复制出支气管堵塞的症状,扩增分离毒株... 详细信息

[目的]从发病鸡群中分离出鸡传染性支气管炎病毒,并对其进行鉴定。[方法]从安徽某鸡场发病鸡群中分离出鸡传染性支气管炎病毒,采用鸡胚盲传,观察病毒对鸡胚的致病作用。通过动物回归试验,在SPF鸡上复制出支气管堵塞的症状,扩增分离毒株的S1基因片段,并与IBV疫苗毒株进行比较。[结果]对分离到的毒株进行HA检测,结果表明收获的尿囊液对鸡红细胞无凝集活性,说明分离到的病毒中无NDV、AIV等,但经1%胰酶处理则可凝集鸡红细胞,符合传染性支气管炎病毒的生物学特征。该毒株的第6代SPF鸡胚尿囊液通过滴鼻接种SPF鸡,可复制出与现场相似的临床症状,其发生了支气管堵塞的现象,初步证实分离的病毒为一株鸡传染性支气管炎病毒,命名为XZ株。[结论]该研究为鸡传染性支气管炎的防治提供了理论依据。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒支气管堵塞分离鉴定

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鸡传染性支气管炎病毒的生物学特征及分型

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当代畜牧 2018年第10Z期47卷 56-57页

作者：宁岱辽宁省锦州市动物疫病预防控制中心

鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒感染引起的一种急性高度接触性传染性疾病,不同年龄的鸡感染该种病毒之后,所表现出来的临床症状存在一定的差异。该种病毒进入机体后,会使得各个脏器、多种组织发生病变,对任何年龄的鸡都可以造... 详细信息

鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒感染引起的一种急性高度接触性传染性疾病,不同年龄的鸡感染该种病毒之后,所表现出来的临床症状存在一定的差异。该种病毒进入机体后,会使得各个脏器、多种组织发生病变,对任何年龄的鸡都可以造成危害,但主要侵害1~4周龄的雏鸡。临床上由于鸡传染性支气管炎病毒血清型较多,且不同血清型之间缺乏有效的交叉保护性,再加上新的变异毒株不断出现,该种疾病已经成为鸡养殖产业需要重点防范的病毒性传染性疾病之一。对所在地区鸡传染性支气管炎的发生流行和分子病原学特征进行全面分析,可以有效掌握当前流行毒株的血清型,为制定针对性的免疫措施提供依据。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒生物学特征分型

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鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白原核表达载体的构建

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广东畜牧兽医科技 2021年第3期46卷 69-73页

作者：刘云霞仇微红叶贺佳梁昭平广州市华南农大生物药品有限公司广东广州511300 华南农业大学广东广州510642

本研究旨在构建鸡传染性支气管炎病毒(IBV)原核表达体系,制备其S1目的蛋白,为建立IBV ELISA检测方法奠定基础。以IBV QX型基因为模板,PCR扩增出S1蛋白基因,连接至pET-32a原核表达载体,获得重组质粒pET(32a)-S1,将重组质粒转入大肠杆菌B... 详细信息

本研究旨在构建鸡传染性支气管炎病毒(IBV)原核表达体系,制备其S1目的蛋白,为建立IBV ELISA检测方法奠定基础。以IBV QX型基因为模板,PCR扩增出S1蛋白基因,连接至pET-32a原核表达载体,获得重组质粒pET(32a)-S1,将重组质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞后进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,重组S1蛋白在大肠杆菌BL21中获得表达,分子量约为60 kDa。Western-blot分析表明,重组蛋白能与Anti-His标签抗体发生特异性反应。利用Kcl染色法,成功纯化S1目的蛋白。本研究成功构建了pET(32a)-S1重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,为进一步制备S1蛋白抗体奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒原核表达 S1蛋白蛋白纯化

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