检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2006年第11期34卷 42-46页

作者：张淑霞贺秀媛崔保安王建华西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

根据GenBank中已发表的鸡传染性支气管炎病毒（IBV）N基因序列，设计并合成1对特异性引物，用RT—PCR方法扩增IBV HN99株的N基因，并将其克隆入pMD18-T载体，转化感受态大肠杆菌Top10。提取pMD18-T-N重组质粒，进行酶切和PCR鉴定，并对... 详细信息

根据GenBank中已发表的鸡传染性支气管炎病毒（IBV）N基因序列，设计并合成1对特异性引物，用RT—PCR方法扩增IBV HN99株的N基因，并将其克隆入pMD18-T载体，转化感受态大肠杆菌Top10。提取pMD18-T-N重组质粒，进行酶切和PCR鉴定，并对阳性质粒进行测序。将测序结果与H52，Ark99，BJ等参考毒株进行序列分析。结果表明，N基因全长为1230bp，编码1条409个氨基酸组成的多肽；其核苷酸与H52，Ark99和BJ等毒株的同源性为88．4％～90．7％。氨基酸同源性为91．7％～94．4％；HN99株与H52，Ark99和BJ等其他各毒株的亲缘关系均较远，是1株新的IBV变异株。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 N基因基因克隆序列分析

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鸡传染性支气管炎病毒M41株的致病性及排毒规律

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中国兽医学报 2019年第5期39卷 842-847页

作者：潘力林树乾于可响李桂明杨世发宋玲玲董雯雯李颖逯月王林王振勇山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023

本试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)呼吸型M41标准株的S1基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-M41 SYBR GreenⅠReal-Time PCR标准曲线。通过对8日龄SPF鸡人工感染IBV-M41发病,采用Real-Time PCR方法... 详细信息

本试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)呼吸型M41标准株的S1基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-M41 SYBR GreenⅠReal-Time PCR标准曲线。通过对8日龄SPF鸡人工感染IBV-M41发病,采用Real-Time PCR方法跟踪检测其泄殖腔排毒情况;剖检并采集试验鸡的相关器官制作病理切片;在临床观察的基础上记录试验鸡的体质量、体温等指标。结果显示,所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到28.3拷贝/μL的病毒核酸。人工感染病毒3～15 d后在鸡的排泄物中均检测到了病毒;攻毒组鸡临床症状明显,相关组织器官均呈现不同程度的病变。该病毒致病性试验、排毒规律和real-time PCR检测方法的建立,为IBV感染鸡作为实验动物模型进行相关药物的临床药效评价提供方法与依据。

关键词： real-time PCR 鸡传染性支气管炎病毒 IBV-M41 病理变化排毒规律

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鸡传染性支气管炎病毒国内分离株基因组的研究

鸡传染性支气管炎病毒国内分离株基因组的研究

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作者：刘玉芬东北农业大学

学位级别：博士

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。其临床诊断特征为病鸡咳嗽，喷嚏，气管啰音;幼... 详细信息

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。其临床诊断特征为病鸡咳嗽，喷嚏，气管啰音;幼鸡流鼻涕，蛋鸡产蛋量及蛋品质下降。各日龄、品种和性别的鸡均易感。目前，在我国IB的发生已经遍布华北、华南、西北、西南和东北等大部分省、市和自治区，虽然已广泛使用IB疫苗，但IB的发生仍然普遍存在，尤其是在已免疫鸡群中又常常爆发IB，给养殖业造成严重的经济损失。 IBV属于冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）的代表种。其基因组为单股线状正链RNA’，有感染性，大小约为27.6kb，具有3′poly A尾和5′帽状结构（cap）。在感染细胞内可检出6种亚基因组mRNAs（1-6），现已确定mRNA 2、4、6 分别编码IBV的3个主要结构蛋白——纤突蛋白（Spike，S）、膜蛋白（Membrane，M）、核衣壳蛋白（Nucleocapsid．N）;而mRNA1包含两个开放阅读框（Open Reading Frame， ORF），即ORF1a和ORF1b，可编码440KD和300KD的蛋白。但在通常情况下，下游的ORF1b可通过核糖体移框（Frameshifting）与上游的ORF1a形成分子量约为750KD 的多聚蛋白（Polyprotein）pplab，然后再被细胞内蛋白酶裂解为相应的功能蛋白。本研究主要对已经分离鉴定的三株IBV毒株LH2／01／10（黑龙江肾型株）、D971（大连“腺胃型”株）和LX4（新疆肾型株）进行基因分析。首先在10龄SPF鸡胚中增殖病毒，当病毒尿囊液血凝价稳定在256以上时，纯化和浓缩病毒，再经反转录-聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）技术扩增目的基因。本研究首先对三株毒株的主要结构基因进行了克隆和序列测定。设计引物时将5a、5b 和N基因，3a、3b、3c与M同时扩出。构建了结构基因N、M、S和3c（E）和非结构基因3a、3b、5a和5b的基因进化树。序列测定表明三者的N基因均由1230bp组成，无碱基的缺失与插入，但存在点突变，编码409个氨基酸（AA），且与国内分离株同源性均较高，而在某些基因区与H120和H52同源性可达100％。N基因进化树显示 LH2／01／10、LX4在同一群内，而D971却与国外参考毒株更近，表明三者在不同地区经历不同的进化，导致不同基因特征的出现。M基因长度不同，LH2／01／10为687bp（228 个AA）、D971为681bp（226个AA）、LX4 678bp（225个AA），M基因保守程度也较高，进化树表明三者亲缘关系与国内毒株近，与国外毒株及疫苗株相对较远。S蛋白是 IBV最重要的免疫原，尤其S1部分可刺激机体产生保护性的中和抗体，而S1基因在基因组中变异频率最高。S基因序列分析表明，LH2／01／10与LX4的S基因为3495bp，编码1164个AA，S蛋白的切割识别位点为5个连续的碱性氨基酸残基组氨酸-精氨酸-精氨酸-精氨酸-精氨酸（His-Arg-Arg-Arg-Arg，HRRRR），为IBV中国分离毒株所独有。二者的S1基因均为1614bp，编码539个AA;D971S为3498bp，编码1165个AA，切割识别位点为NSRRR，该序列为所选参考毒株中最为独特的一个。D971S1为1614bp，编码538个AA，S2为1884bp，编码627个AA。S1基因分析表明不同国家的IBV毒株差异显著，LH2／01／10与LX4在同一群内，与H120和H52等疫苗株相对较近，而与国外东北农业大学农学博士学位论文

关键词：鸡传染性支气管炎病毒基因组分析进化树构建

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鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的真核表达及免疫原性分析

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动物医学进展 2020年第12期41卷 34-39页

作者：苏艳静张愉廖健淇张韬张丽娟袁园磨美兰广西大学动物科学技术学院广西南宁530004

为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的S1蛋白并鉴定其免疫原性,构建了IBV广西优势血清型代表株GX-YL5 S1蛋白基因的重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S1,转化DH10Bac细胞进而拯救出重组杆状病毒;经间接免疫荧光(IFA)和Western blot鉴... 详细信息

为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的S1蛋白并鉴定其免疫原性,构建了IBV广西优势血清型代表株GX-YL5 S1蛋白基因的重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S1,转化DH10Bac细胞进而拯救出重组杆状病毒;经间接免疫荧光(IFA)和Western blot鉴定并大量表达;纯化后免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA和Western blot对该重组蛋白的反应原性进行鉴定,并应用气管环(TOC)中和试验分析其免疫原性。IFA显示重组杆状病毒感染后72 h细胞出现特异性荧光;Western blot显示重组蛋白与抗His标签单克隆抗体以及IBV特异性抗体均能结合,且反应性良好,特异性强;中和试验显示制备的血清对IBV的中和滴度为1∶512。表明该重组S1蛋白具有较好的免疫原性,为IBV S1蛋白的生物学功能、基因工程亚单位疫苗等研究奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1蛋白真核表达抗血清免疫原性

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鸡传染性支气管炎病毒山西株的分离鉴定及致病性分析

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 921-926页

作者：卞希一盛豪肖鹏崔明仙蓝嘉宁周继勇廖敏浙江大学动物科学学院浙江杭州310058 浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)并研究其致病性,本研究对山西运城疑似传染性支气管炎(IB)感染的送检临床样品研磨后反复冻融,提取基因组进行RT-PCR检测,结果显示其为IBV核酸阳性;进一步对样品研磨液过滤后接种9日龄~11日龄SPF鸡胚... 详细信息

为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)并研究其致病性,本研究对山西运城疑似传染性支气管炎(IB)感染的送检临床样品研磨后反复冻融,提取基因组进行RT-PCR检测,结果显示其为IBV核酸阳性;进一步对样品研磨液过滤后接种9日龄~11日龄SPF鸡胚,并传至F3代,RT-PCR检测仍为IBV阳性;将阳性样品F11代鸡胚尿囊液接种SPF鸡胚后能引起典型的“侏儒胚”病变,接种气管环能导致气管环纤毛失去活性,表明分离到一株IBV,命名为YC181031。提取分离株基因组进行S1基因的PCR扩增及测序分析,结果显示YC181031株属于致肾病变型的GI-22基因型IBV。将该分离株感染7日龄SPF雏鸡以鉴定其致病性,结果显示YC181031分离株感染能引起雏鸡张口呼吸、精神沉郁、排水样稀粪等临床症状以及死亡,雏鸡死亡率为20%;剖检感染鸡和死亡鸡,能观察到肾脏肿大,并发生明显的尿酸盐沉积等病变;取感染雏鸡和死亡雏鸡的各脏器制备病理切片,观察各脏器的病变,并送公司制备各组鸡各组织的免疫组化切片,检测IBV感染情况。结果显示肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾脏、肝脏均能观察到明显病变及病毒感染。对感染鸡每两天采集各组鸡的咽肛拭子,采用RT-PCR检测排毒情况,结果显示感染鸡在试验期14 d内均能持续检测到排毒。采用荧光定量PCR检测各组织器官病毒的载量,结果显示各组织病毒载量由高到低依次为肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾脏、肝脏,其中肾脏病毒载量显著高于其他组织的病毒载量(P<0.05)。本研究首次系统研究了GI-22基因型IBV的致病特征,为该病的防制提供了参考依据。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒山西运城分离株 GI-22型致病性

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鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国生物制品学杂志 2014年第1期27卷 95-98,102页

作者：邹年莉王富妍段真真郭明萍吴瑞婷付润饶文心田曹三杰黄勇四川农业大学动物医学院四川雅安625014

目的制备鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白单克隆抗体,并进行鉴定。方法用差速离心纯化的IBV四川分离株Sczy3免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。利用IBV鼠高免血清建立间接ELISA,筛选杂交瘤... 详细信息

目的制备鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白单克隆抗体,并进行鉴定。方法用差速离心纯化的IBV四川分离株Sczy3免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。利用IBV鼠高免血清建立间接ELISA,筛选杂交瘤细胞。强阳性孔经有限稀释法亚克隆,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水。用鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒鉴定单抗的亚型,Western blot法分析单抗的反应原性,ELISA法分析单抗的特异性及其与不同IBV毒株的交叉反应性。结果经连续4次亚克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗IBV Sczy3株单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C8C1和2C10E7,其腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600。2株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgM亚型;均可特异性识别S1蛋白;2株单抗只与IBV发生特异性反应,与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9亚型和AIV H5抗原均不反应,与其他5种基因型的10株IBV毒株均可产生交叉反应。结论成功制备了2株IBV S1蛋白单克隆抗体,为IBV的检测、抗原表位筛选及致病机理的研究等提供了材料。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1蛋白单克隆抗体

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鸡传染性支气管炎病毒广西流行株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2010年第9期41卷 1138-1146页

作者：磨美兰李孟韦平范文胜黄柏成郎亚辉陈秋英侯金莲韦天超广西大学动物科学技术学院南宁530005

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株的遗传变异情况,应用RT-PCR方法对2004-2007年的7株广西IBV分离株的纤突蛋白S1基因、核(N)蛋白和膜(M)蛋白基因进行扩增、克隆、测序和同源性比较及系统进化分析。结果显示广西IBV分离株S1基... 详细信息

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株的遗传变异情况,应用RT-PCR方法对2004-2007年的7株广西IBV分离株的纤突蛋白S1基因、核(N)蛋白和膜(M)蛋白基因进行扩增、克隆、测序和同源性比较及系统进化分析。结果显示广西IBV分离株S1基因存在广泛的基因点突变,部分毒株出现基因插入和缺失,分离株之间氨基酸同源性为74.2%～98.7%;N基因无插入和缺失,但存在基因点突变,分离株之间氨基酸同源性为91.7%～99.3%;M基因存在点突变和插入现象,分离株之间氨基酸同源性为90.7%～98.2%。以疫苗株H120为参照,广西IBV分离株的S1、N和M基因都出现了变异,其中S1基因变异程度最大。7株广西IBV在S1、N和M基因氨基酸序列系统进化树中分别集中在2、3和3个基因群中,其中4株的S1、N和M基因分型结果不一致。结果表明广西IBV分离株的S1、N和M基因已发生变异,广西IBV存在广泛的基因突变、缺失或插入现象。研究的结果提示流行株的遗传变异可能是目前影响疫苗免疫效果的主要原因。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 N基因 M基因系统进化分析变异

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鸡传染性支气管炎病毒ck/CH/LHB/121042毒株的分离鉴定及分子特征研究

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东北农业大学学报 2018年第2期49卷 55-63页

作者：马得莹姜磊许丽文刘亮亮韩宗玺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV),严重威胁养禽业健康发展。近年来,我国不断出现新型IBV毒株及变异株,给传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)防控造成困难。监测研究报告显示,IBV感染与多种类型毒株有关,... 详细信息

鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV),严重威胁养禽业健康发展。近年来,我国不断出现新型IBV毒株及变异株,给传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)防控造成困难。监测研究报告显示,IBV感染与多种类型毒株有关,主要以LX4型为主。我国部分地区近期出现LX4型与TW型重组毒株,但鲜有TWⅡ毒株报道,其分子特征和抗原特性目前尚不清楚。通过分离河北省某鸡场疑似IB病鸡肾脏,获得传染性支气管炎病毒ck/CH/LHB/121042,基因组全长27 675 bp,共10个开放阅读框,基因组特征为5'UTR-1a-1b-S-3a-3b-3c-M-5a-5b-N-3'UTR,Spike protein裂解酶识别位点为"Arg-Arg-Phe-Arg-Arg"。病毒基因型鉴定为TWⅡ型,基因组遗传进化分析表明,该毒株与2010年河北分离株ck/CH/LHB/100801亲缘关系最近,推测具有相同进化来源。研究结果对于阐明病毒起源、预测未来产生新型毒株和重组毒株等具有重要意义。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离全基因组序列

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鸡传染性支气管炎病毒感染HD11细胞的转录组分析

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畜牧兽医学报 2023年第11期54卷 4860-4865页

作者：陈璐常新宇沈嘉忱沈瑞廷赵振华侯晓林北京农学院动物科学技术学院北京102206

旨在探究感染早期宿主细胞的天然免疫应答和抗病毒反应,本研究将鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette株感染鸡巨噬细胞HD11,2 h后提取细胞总RNA反转录成cDNA,采用Illumina进行转录组高通量测序。结果显示,... 详细信息

旨在探究感染早期宿主细胞的天然免疫应答和抗病毒反应,本研究将鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette株感染鸡巨噬细胞HD11,2 h后提取细胞总RNA反转录成cDNA,采用Illumina进行转录组高通量测序。结果显示,感染组筛选出1363个上调基因,653个下调基因。通过对差异表达基因GO和KEGG分析发现,IBV感染HD11细胞早期,差异表达基因大多与免疫反应、抗病毒作用有关,富集到的信号通路主要集中在细胞因子和细胞因子受体之间的相互作用、病毒蛋白与细胞因子或细胞因子受体之间的相互作用、TNF信号通路、MAPK信号通路等。随机挑选10个与免疫反应、抗病毒相关基因进行RT-qPCR验证,结果与转录组测序分析一致。本研究为进一步探究IBV致病机制和感染早期宿主细胞免疫反应奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒鸡巨噬细胞HD11 高通量测序转录组

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鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达

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病毒学报 2003年第2期19卷 144-148页

作者：黄亚东郑青李校堃王林川赵振芬黄自然暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 华南农业大学动物医学系广州510642 郑州牧业工程高等专科学校郑州450008 华南农业大学蚕桑系广州510642

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBVBeaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT-PCR,成功地扩增出IBVH株S1基因。扩增产物经BstYⅠ、HaeⅢ和PstⅠ... 详细信息

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBVBeaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT-PCR,成功地扩增出IBVH株S1基因。扩增产物经BstYⅠ、HaeⅢ和PstⅠ酶切分析,结果表明,IBVH株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBVH株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM-T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97.39%和97.27%。将IBVH株S1基因亚克隆到pPICZ-A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS-PAGE实验证实了IBVH株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测,证实了表达产物的抗原特异性。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白S1基因克隆毕赤酵母表达

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