检索结果-内蒙古大学图书馆

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2000年第3期26卷 237-240页

作者：何永强周继勇于涟浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

为了查清浙江省目前流行的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)的基因型 ,我们收集了 5个不同疫区的 IBV(肾病变型 J、W、X、N;腺胃病变型 ZJ971)和参考株 H12 0 ,分别对其 S1基因 c DNA进行 Hae 、Sty 、Pst 、Ksp6 32 的 RFLP分析 .结果表明 ... 详细信息

为了查清浙江省目前流行的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)的基因型 ,我们收集了 5个不同疫区的 IBV(肾病变型 J、W、X、N;腺胃病变型 ZJ971)和参考株 H12 0 ,分别对其 S1基因 c DNA进行 Hae 、Sty 、Pst 、Ksp6 32 的 RFLP分析 .结果表明 IBV- J、W、X、N株的 RFLP基因类型相同 ,但与古老的肾病变型代表株 (即 T株、Gray株、Holte株 )、国内外报道的肾病变型毒株及呼吸型 H12 0 株均不同 ,是一种新的 RFLP基因类型 ;IBV- ZJ971株的基因型与 H12 0

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 RFLP 基因型血清型

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鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 401-403页

作者：刘胜旺孔宪刚王玮高磊童光志谷守林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由... 详细信息

利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。在此基础上 ,本实验构建了杆状病毒重组转移载体pBlue_N ,将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞 ,经过三轮蚀斑纯化和PCR鉴定 ,获得重组杆状病毒rBac_N。SDS_PAGE分析和Westernblot检测的结果表明核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞内获得表达 ,融合蛋白表达量占细胞蛋白总量的 19.4

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列重组杆状病毒表达

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鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株3'端非编码区序列分析

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基因组学与应用生物学 2010年第3期29卷 457-463页

作者：磨美兰范文胜黄柏成郎亚辉陈秋英侯金莲李孟韦平韦天超广西大学动物科学技术学院南宁530005

本研究应用RT-PCR方法扩增出分离自广西的26株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)以及参考株M41和疫苗株H120、Ma5和4/91的3'端非编码区(3'UTR)的cDNA,并对其进行了克隆、序列测定、比较及其系统进化分析。序列分析结果表明,与Beaudett... 详细信息

本研究应用RT-PCR方法扩增出分离自广西的26株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)以及参考株M41和疫苗株H120、Ma5和4/91的3'端非编码区(3'UTR)的cDNA,并对其进行了克隆、序列测定、比较及其系统进化分析。序列分析结果表明,与Beaudette株的3'UTR序列相比较,26株分离的IBV中有1株和3株的分离株3'UTR序列分别插入了23个和2个碱基,另外有12株、6株、1株、2株和1株的分离株3'UTR序列分别缺失了1个、2个、22个、29个和84个碱基,不同毒株之间碱基数量最大相差达107个碱基。系统进化分析结果表明,26株分离株可分为4群,其中21株属于第Ⅰ群,与经典疫苗株H120的核苷酸同源性均较低(54.4%～75.5%);3株与4/91同属于第Ⅱ群;1株与H120同属于第Ⅲ群;另外1株单独属于Ⅴ群。综上所述,广西流行IBV的绝大部分毒株在3'UTR序列上与目前常用的疫苗株相比都发生了很大的变异,而且存在多种形式的碱基缺失和插入现象。由此,我们认为流行株的变异可能是疫苗不能提供有效保护的主要原因。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 3'端非编码区系统进化分析基因缺失基因插入

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鸡传染性支气管炎病毒广西株M基因的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医 2016年第2期43卷 377-382页

作者：屈素洁施开创邹联斌胡杰莫胜兰尹彦文张步娴李军梁媛广西区动物疫病预防控制中心南宁530001

参照GenBank中鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR扩增IBV广西株的M基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,M基因全长为678bp,编码225个氨基酸,近N端含有2个潜在的N-糖基化位点,3个跨膜区位于23... 详细信息

参照GenBank中鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR扩增IBV广西株的M基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,M基因全长为678bp,编码225个氨基酸,近N端含有2个潜在的N-糖基化位点,3个跨膜区位于23—98肽段区,亲水区较疏水区更易变异。IBV广西株与国内外IBV参考毒株相比,核苷酸序列同源性为83.6%-92.5%,氨基酸序列同源性为82.7%-95.1%。系统进化分析结果显示IBV广西株与SAIB20和LX4两参考株位于同一个分支上,它们的亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远。结果表明IBV广西株是1株新的IBV变异株。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 M基因基因克隆序列分析

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鸡传染性支气管炎病毒核酸检测专用标准物质的制备

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中国兽医杂志 2021年第5期57卷 60-64,69,I0006页

作者：黄袁慧王乃迪陈玉红高晓艺刘洋顾小雪杨林辛盛鹏王传彬刘玉良中国动物疫病预防控制中心北京大兴102618 广西大学动物科技学院广西南宁530005 河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038

本研究以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株M41为原料,通过SPF鸡胚尿囊腔繁殖、外源病毒检测、灭活、冻干和分装,添加适量的稳定剂和保护剂,最终成功制备鸡传染性支气管炎病毒核酸检测专用标准物质。采用荧光定量RT-PCR方法,由9家权威... 详细信息

本研究以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株M41为原料,通过SPF鸡胚尿囊腔繁殖、外源病毒检测、灭活、冻干和分装,添加适量的稳定剂和保护剂,最终成功制备鸡传染性支气管炎病毒核酸检测专用标准物质。采用荧光定量RT-PCR方法,由9家权威实验室进行合作定值,确定标准物质的定性检测结果和参考值。结果显示:所研制的标准物质纯净,均匀性和稳定性良好,定性准确,易保存,可常规运输,安全,无生物传染风险;标准物质在-20℃、4℃、25℃、37℃环境下可分别稳定保存12个月以上、60 d、7 d、3 d;合作定值验证和临床试用结果均为鸡传染性支气管炎病毒阳性。结果表明,所制备的标准物质可用于鸡传染性支气管炎病毒核酸检测相关实验室的质量检定和控制、仪器测试和校准、检测方法评价等,有利于鸡传染性支气管炎的诊断和防控。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒标准物质核酸检测

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鸡传染性支气管炎病毒感染对雏鸡黏膜固有免疫相关受体和细胞因子转录水平的影响

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中国家禽 2014年第5期36卷 14-19页

作者：何怡宁郑衍生谢智文侯金莲韦天超磨美兰韦平广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

为探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染与宿主固有免疫系统的相互作用及其致病与免疫机制,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法检测IBV变异株GX-YL5感染鸡后不同时间点气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA水平以及IBV... 详细信息

为探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染与宿主固有免疫系统的相互作用及其致病与免疫机制,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法检测IBV变异株GX-YL5感染鸡后不同时间点气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA水平以及IBV载量的动态变化.结果显示,气管黏膜和哈德氏腺中Toll样受体TLR2、TLR3、TLR6、TLR7、趋化因子MIP-1β和趋化因子受体CXCR4、CCR4在IBV感染后1～8天以及细胞因子IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-10在IBV感染后1～5天,mRNA转录水平至少有一个时间点显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）上调;感染后14～28天,一些受体和细胞因子的mRNA则出现下调;气管黏膜和哈德氏腺的IBV病毒载量在感染后立即上升,第3天达到峰值,随后下降.结果表明,IBV感染早期气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA转录水平显著上调,说明IBV感染对宿主固有免疫应答产生明显的影响.

关键词：鸡传染性支气管炎病毒气管黏膜哈德氏腺 Toll样受体趋化因子受体细胞因子

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鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达及其免疫原性

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中国兽医学报 2021年第2期41卷 240-245,294页

作者：张愉袁园苏艳静廖健淇张韬张丽娟范文胜韦平磨美兰广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

为了对鸡传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5的S蛋白进行真核表达并研究其免疫原性,设计GX-YL5毒株S基因特异引物,扩增出目的片段后,构建重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S,转化DH1... 详细信息

为了对鸡传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5的S蛋白进行真核表达并研究其免疫原性,设计GX-YL5毒株S基因特异引物,扩增出目的片段后,构建重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S,转化DH10Bac细胞获得重组杆状病毒rHBM-S;重组S蛋白鉴定正确后,大量表达、纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA、Western blot以及间接ELISA、气管环(TOC)中和试验对该重组蛋白的反应原性及免疫原性进行分析。结果显示,成功获得重组S蛋白;制备的抗S蛋白多抗血清具有良好的特异性,ELISA效价可达1∶25600,TOC中和试验滴度为1∶512。结果表明,应用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了具有很好免疫原性的GX-YL5株的S蛋白。本试验为研究IBV S蛋白的生物学功能、研发诊断试剂和制备新型疫苗等奠定了基础,为利用昆虫杆状病毒表达系统进行IBV或其他冠状病毒结构蛋白的表达及多抗的制备提供了借鉴和参考。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S蛋白昆虫杆状病毒表达系统免疫原性

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鸡传染性支气管炎病毒HQ P_(10)毒株非编码区序列分析

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中国家禽 2015年第8期37卷 40-45页

作者：韩绪春何锡栋黄宝钦罗忠宝吴晓平李文迹吴宝成福建农林大学动物科学学院福建福州350002 欧圣实业(福建)有限公司福建南平353600 福建圣农实业有限公司福建南平353600

研究旨在探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异情况,为鸡传染性支气管炎的防控提供基础数据.通过对IBV HQ毒株第10代鸡胚培养病毒的5＇端非编码区（5＇UTR）和3＇UTR序列进行cDNA末端快速扩增（RACE）和序列分析.结果表明：HQP10... 详细信息

研究旨在探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异情况,为鸡传染性支气管炎的防控提供基础数据.通过对IBV HQ毒株第10代鸡胚培养病毒的5＇端非编码区（5＇UTR）和3＇UTR序列进行cDNA末端快速扩增（RACE）和序列分析.结果表明：HQP10的5＇UTR长度为525 nt,相较于Beaudette毒株,序列中发生4个位点的碱基缺失突变,1个位点的碱基插入突变,导致其SL1-SL4茎环结构有所改变,与参考毒株的相应序列同源性在94％～99％之间;而3＇UTR长度为363 nt,与参考毒株相应序列的同源性在45％～98％之间,与H120的同源性在93.3％,而与H52株、M41株的同源性则较低,分别为46.4％和45.9％.UTR对病毒RNA的合成具有重要作用,HQP10毒株UTR中的突变对病毒复制效率的影响还有待进一步研究.

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 UTR 突变

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鸡传染性支气管炎病毒感染HeLa细胞的研究及其天然受体的鉴定

鸡传染性支气管炎病毒感染HeLa细胞的研究及其天然受体的鉴定

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作者：陈汉阳华中农业大学

学位级别：博士

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)引起的一种高度接触性的病毒性传染病。主要引起鸡的呼吸系统疾病、肾炎并伴随产蛋量和蛋品质的下降。IBV属于冠状病毒... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)引起的一种高度接触性的病毒性传染病。主要引起鸡的呼吸系统疾病、肾炎并伴随产蛋量和蛋品质的下降。IBV属于冠状病毒科(Coronaviridae)，为单股正链RNA病毒。大部分冠状病毒具有宿主特异性和组织嗜性，只能侵染天然宿主和一些亲缘关系极其相近的宿主。以前的研究认为IBV只能感染鸡，但近两年相继在其他一些鸡形目的动物体内分离到IBV样病毒，如孔雀、几内亚鸡和鹧鸪等，这些分离的毒株在基因结构上与IBV很相似，基因序列的同源性甚至达到99％以上；而在非鸡形目动物如鸭、鸽子和灰雀等的体内分离到的病毒，通过基因组序列比对发现，虽然它们在氨基酸同源性上与IBV存在一定的差异，但依然属于第3群冠状病毒的范畴。 IBV这种从感染单一宿主延伸到更多的其他动物的现象，让人联想到2002年爆发的“严重急性呼吸系统综合症”(Severe acute respiratory syndrome，SARS)，它的病原是一种新的冠状病毒(严重急性呼吸系统综合症冠状病毒，SARS-CoV)，而在多种动物体内分离到的SARS-CoV样冠状病毒说明SARS-CoV极有可能最初起源于动物。因此，研究动物冠状病毒与SARS-CoV的关系及冠状病毒跨越物种屏障的机制很有必要。基于此，本研究以IBV为模式病毒，将其跨种感染人源细胞HeLa，探讨动物冠状病毒跨种感染的机制，同时对IBV跨种感染过程中起到关键作用的因子进行了研究，另外也鉴定了IBV的天然受体。主要研究内容如下： 1、不同IBV毒株跨种感染HeLa细胞的研究 7个不同的IBV毒株，包括M41、H52、H120、Gray、Holte、Connecticut和M52-19(Beaudette52-19)，分别接种单层和刚刚消化的HeLa细胞。结果显示这些毒株均不能在单层的HeLa细胞上增殖；而M41、H52、H120和Gray可以在刚刚新鲜消化的HeLa细胞上增殖，并会导致HeLa细胞发生明显的病变，剩余的3个毒株Holte、Connecticut和M52-19却不能。通过观察是否产生细胞病变及中和实验、S1基因的RT-PCR扩增、血凝及血凝抑制、病毒N蛋白的Westem blotting检测等方面来证实感染的真实性。 2、S1基因的变异在IBV跨种感染过程中的作用 M41毒株在新鲜消化的HeLa细胞上持续传26代，RT-PCR扩增第1代、第5代和第21代病毒的S1基因，结果显示第1代跟第5代S1基因的序列完全一致，而第21代与第1代相比也仅仅只有一个碱基(A728G)的改变，导致一个氨基酸的变异。然而这唯一的一个点突变对IBV的跨种感染似乎没有决定性的作用。 3、病毒血凝价的改变与跨种感染的关系据报道IBV经胰酶或磷酸脂酶C处理后可以凝集0.5％的新鲜制备的鸡红细胞。本研究发现在上述7个IBV的毒株中，M41、H52、H120和Gray经磷酸脂酶处理后可以凝集鸡红细胞，而另外3个毒株Holte、Connecticut和M52-29则不能凝集；另一方面，M41在HeLa细胞上持续传代会导致M41的血凝价逐渐下降；但这些传代的细胞毒(低或无血凝性)接种鸡胚后，尿囊液中的病毒会重新获得较高的血凝价。可见具有血凝性的IBV毒株更易于适应异源细胞。 4、唾液酸糖蛋白(脂)在IBV跨种感染过程中的作用某些冠状病毒可以利用细胞表面的唾液酸糖蛋白(脂)作为进入细胞的受体，而神经氨酸酶(NA)可以降解细胞表面的唾液酸糖蛋白(脂)，这样就会降低病毒感染的几率。根据这一原理，将IBV感染经NA处理和未处理的HeLa细胞，对比发现IBV在NA处理过的HeLa细胞的感染滴度明显降低，说明唾液酸糖蛋白(脂)在IBV感染HeLa细胞的过程中起到重要的作用。 5、氨基肽酶N、胰酶和EDAT对IBV跨种感染的作用氨基肽酶(APN)是很多冠状病毒的受体，通过封闭细胞表面APN的受体功能可以达到阻断病毒感染细胞的目的。用鼠抗人氨基肽酶(hAPN)的单克隆抗体(WM15)封闭HeLa细胞表面的氨基肽酶的活性，结果发现这种封闭并没有阻断IBV感染HeLa细胞，这说明hAPN不是IBV感染HeLa细胞的途径。以前的研究证实胰酶可以提高某些病毒的滴度。先确定胰酶的安全浓度，然后在IBV接种后将此安全浓度胰酶添加到的细胞培养液里，结果显示添加了胰酶的IBV的感染力与单独使用I

关键词：鸡传染性支气管炎病毒冠状病毒跨种感染 HeLa细胞唾液酸糖蛋白血凝氨基肽酶N 受体

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鸡传染性支气管炎病毒分离株核衣壳基因克隆、序列分析和真核表达

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中国预防兽医学报 2007年第3期29卷 185-189页

作者：焦红梅潘志明孟松树田华荣耿士忠焦新安扬州大学人兽共患病和免疫学研究室江苏扬州225009

根据GenBank公开序列自行设计一对引物,采用RT-PCR扩增出鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)W和C9001分离株完整的核衣壳(N)基因,并将其克隆至pMD18-T载体进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,扩增的2个IBV分离株... 详细信息

根据GenBank公开序列自行设计一对引物,采用RT-PCR扩增出鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)W和C9001分离株完整的核衣壳(N)基因,并将其克隆至pMD18-T载体进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,扩增的2个IBV分离株核衣壳基因片段长度均为1230bp,编码409个氨基酸,彼此间核苷酸和氨基酸同源性分别为88.0%和89.5%,与GenBank中有代表性的参考毒株相应基因核苷酸和氨基酸序列比较显示,W株核苷酸序列与GenBank中的广东分离株(AY646283)同源性最高,为94.1%,氨基酸序列同源性为94.6%;与国内部分毒株核苷酸序列同源性在86.1%～88.0%之间,氨基酸序列同源性在88.0%～90.7%之间;C9001株与国内部分毒株核苷酸序列同源性在86.4%～99.8%之间,氨基酸序列同源性在88.0%～99.8%之间。从核衣壳基因编码的氨基酸序列的系统进化树可见,W株与C9001株处于不同的进化分枝,亲缘关系较远。同时将核衣壳基因构建于真核表达质粒pVAX1中,用脂质体法将重组质粒转染入COS-7细胞中,间接免疫荧光检测出核衣壳蛋白的体外表达。研究结果为进一步研究IBV核衣壳蛋白的结构与功能以及基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核衣壳基因克隆序列分析真核表达

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