检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2012年第4期28卷 424-430页

作者：周欣杨霞赵军常洪涛王新卫陈陆王川庆河南农业大学牧医工程学院郑州市450002

根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表... 详细信息

根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍;该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5%。应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较。结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒 DF-1细胞 QRT-PCR TCID50 增殖滴度

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鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的制备

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中国兽医学报 2014年第11期34卷 1725-1731页

作者：李芹王建忠黄楚荻穆昱周玉龙高超杨闽楠赛度丁壮吉林大学动物医学学院吉林长春130062 兰州大学资源环境学院甘肃兰州730001

为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac **... 详细信息

为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac ***感受态细胞中,经蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-VP2,将重组杆粒rBacmid-VP2转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-VP2。rBac-VP2感染sf9细胞,提取DNA,经PCR电泳分析,得到1条与预期大小相符的特异性条带;间接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-blotting分析,在大约53 000处出现1条特异性的蛋白条带;电镜观察感染重组杆状病毒的细胞上清和沉淀,均可见重组VP2蛋白自行组装形成的病毒样颗粒。试验结果表明IBDV VP2基因在昆虫细胞中得到了表达,并自组装成了IBDV病毒样颗粒。本试验为研制鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗奠定了基础。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒 VP2 真核表达病毒样颗粒 sf9细胞

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鸡传染性法氏囊病毒基因组A节段编码前体多聚蛋白的遗传踪迹分析

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中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 28-32页

作者：侯仲杰王靖飞付朝阳高宏雷高玉龙祁小乐郭莹莹王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)毒力变异的分子机理,本实验采用进化踪迹分析方法对GenBank中登录的28个毒力不同的IBDV参考病毒株的基因组A节段编码的前体多聚蛋白(NH2-pVP2-VP4-VP3-COOH)推导的氨基酸序列进行分析。结果表明超强IBDV... 详细信息

为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)毒力变异的分子机理,本实验采用进化踪迹分析方法对GenBank中登录的28个毒力不同的IBDV参考病毒株的基因组A节段编码的前体多聚蛋白(NH2-pVP2-VP4-VP3-COOH)推导的氨基酸序列进行分析。结果表明超强IBDV与标准IBDV的差异位点集中在第299位、451位、680位、715位和751位氨基酸上;致弱IBDV与标准IBDV的差异位点在第242位、253位、330位和981位氨基酸。该结果为进一步研究IBDV的毒力变异奠定基础。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒前体多聚蛋白毒力变异进化踪迹分析

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鸡传染性法氏囊病毒感染对B淋巴细胞线粒体能量代谢的影响

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中国兽医学报 2018年第3期38卷 446-452页

作者：杨丹芳李银聚张春杰余祖华贾艳艳何雷王臣韩海锋河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室

为研究鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）感染对宿主免疫细胞线粒体代谢的影响和从代谢方面揭示致病机制,本试验以IBDV毒株感染DT40细胞,分别于病毒感染后24,48,72和96h取样,细胞计数并分离细胞线粒体,通过线粒体染色,检测线粒体蛋白含量,线... 详细信息

为研究鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）感染对宿主免疫细胞线粒体代谢的影响和从代谢方面揭示致病机制,本试验以IBDV毒株感染DT40细胞,分别于病毒感染后24,48,72和96h取样,细胞计数并分离细胞线粒体,通过线粒体染色,检测线粒体蛋白含量,线粒体膜电位,线粒体ATP水平,肉碱脂酰转移酶和NADH-CoQ还原酶活性,线粒体脂酰-CoA和NADH、NAD^＋的含量及NADH/NAD^＋比值,初步评估IBDV感染对宿主细胞线粒体生物氧化的影响。结果表明,IBDV感染DT40细胞48h后,线粒体蛋白含量显著降低（P〈0.01）,肉碱脂酰转移酶和NADH-CoQ还原酶活性在感染后24h开始下降（P〈0.05）,48h后显著被抑制（P〈0.01）;脂酰-CoA和ATP含量在感染后48h显著降低（P〈0.01）,NADH/NAD＋比值显著增高（P〈0.01）。说明IBDV感染DT40细胞后不但对线粒体造成了损伤,而且脂酰CoA的转运和NADH呼吸链受到抑制,导致线粒体能量代谢障碍。本研究从代谢角度为进一步探索IBDV感染对鸡细胞的致病机理提供依据。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒 DT40细胞线粒体能量代谢

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鸡传染性法氏囊病毒研究进展

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中国家禽 2007年第12期29卷 47-49,52页

作者：张建军高巍侯军扬州威克生物工程有限公司江苏扬州225127 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

传染性法氏囊病（Infection bursal disease，IBD）是由鸡传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病，给世界各国的家禽养殖业带来了巨大损失。据调查，美国鸡群的血清阳性率几... 详细信息

传染性法氏囊病（Infection bursal disease，IBD）是由鸡传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病，给世界各国的家禽养殖业带来了巨大损失。据调查，美国鸡群的血清阳性率几乎近100％，南美洲约90％，荷兰88％，意大利76％.

关键词：鸡传染性法氏囊病毒接触性传染病 virus 家禽养殖业血清阳性率南美洲意大利火鸡

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鸡传染性法氏囊病毒BJ-10株分离鉴定及其VP2基因序列分析

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西北农业学报 2013年第9期22卷 13-17页

作者：王韦华刘桂梅王俊全渭南职业技术学院陕西渭南714000 渭南市动物疫病预防控制中心陕西渭南714000

分离鉴定鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV),并对其VP2基因进行序列分析。从陕西宝鸡地区疑似疫情的鸡群分离到1株IBDV(命名为BJ-10株),应用血清学琼脂凝胶免疫扩散试验(agar gel immunodiffusion test,AGID)... 详细信息

分离鉴定鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV),并对其VP2基因进行序列分析。从陕西宝鸡地区疑似疫情的鸡群分离到1株IBDV(命名为BJ-10株),应用血清学琼脂凝胶免疫扩散试验(agar gel immunodiffusion test,AGID),结果在抗原孔和血清孔间可见明显的白色沉淀线。通过RT-PCR扩增VP2基因高变区并对其进行生物信息学分析,结果表明,BJ-10株与超强毒株中国香港HK46的核苷酸与氨基酸同源性分别为98.7%和99.6%,且高变区特征性氨基酸的变化与超强毒株完全一致,表明BJ-10株属于超强毒株,与香港地区的vvIBDV分离株有较为密切的亲缘关系。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒分离鉴定 VP2基因序列分析

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鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒免疫原性研究

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中国兽医学报 2016年第4期36卷 585-588,599页

作者：王炜李芹张平仄刘新鑫谢光耀钱晶薛聪尹仁福丁壮吉林大学动物医学学院吉林长春130062

对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLPs)的免疫原性进行了探讨,并将其与鸡传染性法氏囊病活疫苗进行比较。分别用VLPs及VLPs+Poly IC对14日龄非免鸡进行免疫,并用IBDV B87株弱毒商品疫苗作为阳性对照,同时设置空杆粒蛋白组作阴... 详细信息

对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLPs)的免疫原性进行了探讨,并将其与鸡传染性法氏囊病活疫苗进行比较。分别用VLPs及VLPs+Poly IC对14日龄非免鸡进行免疫,并用IBDV B87株弱毒商品疫苗作为阳性对照,同时设置空杆粒蛋白组作阴性对照及PBS对照。免疫前进行颈静脉采血,首免后每隔1周进行3次采血,通过间接ELISA抗体水平检测、中和试验和淋巴细胞增殖试验来进行分析比较。抗体水平检测结果显示,首免后第7天,在鸡的体内可检测到IBDV特异性抗体的组别为:VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组,且在加强免疫后,抗体水平明显增高(P<0.05)。首免后第14天,在3组鸡的体内均检测到高水平的抗IBDV中和抗体,且呈快速增长趋势。淋巴细胞增殖试验结果显示,VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组鸡体内淋巴细胞增殖动态明显高于接种PBS和空杆粒蛋白组的鸡(P<0.01),并且在加强免疫后明显提高(P<0.05)。动物攻毒保护试验结果显示,攻毒后第2天PBS组和空杆粒蛋白组的鸡均表现出IBD的典型临床症状和病理变化且在攻毒后第6天全部死亡,VLPs组鸡的存活率为88.7%;VLPs+Poly IC组鸡存活率为80%;B87疫苗组鸡存活率为88.7%。器官指数分析结果显示,3组与空白组相比差异不显著(P>0.05)。本试验制备的鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗能够诱导机体产生较高水平的体液和细胞免疫应答,具有良好的应用前景。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒免疫

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鸡传染性法氏囊病毒VP4、VP5蛋白在感染中对宿主天然防御能力的影响研究

鸡传染性法氏囊病毒VP4、VP5蛋白在感染中对宿主天然防御能力的影...

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作者：李双洁南京农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是一种由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)引起的鸡的急性、高度接触性传染病,病毒感染会引起鸡的免疫抑制,给养禽业带来巨大危害。VP4、VP5蛋白是法氏囊病毒基... 详细信息

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是一种由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)引起的鸡的急性、高度接触性传染病,病毒感染会引起鸡的免疫抑制,给养禽业带来巨大危害。VP4、VP5蛋白是法氏囊病毒基因组编码的两种重要非结构蛋白,在病毒的感染中有重要的作用。1.鸡传染性法氏囊病毒的VP4、VP5蛋白对病毒感染引起的免疫抑制作用研究为探讨IBDVVP4、VP5蛋白在病毒感染引起的免疫抑制中的作用,本研究将构建了 VP4、VP5蛋白的真核表达质粒并转染DF-1细胞,并用Poly IC刺激或IBDV CV03病毒株感染转染后的细胞,Western-blot方法检测细胞中模式识别受体及下游转录因子的表达;荧光定量PCR检测细胞因子及抗病毒基因的表达。结果显示,VP4蛋白能够促进TLR3mRNA的转录与蛋白的表达,尤其是在Poly IC刺激或IBDV CV03病毒感染后刺激作用更显著;而VP5蛋白对TLR3 mRNA与蛋白的表达表现出显著抑制作用;IBDVCV03毒株感染能够刺激TLR3 mRNA的大量表达,但其蛋白表达水平却很低。VP4、VP5蛋白在IBDV CV03毒株感染时都显著抑制MDA5蛋白的表达。进一步检查下游的转录因子发现,VP4、VP5蛋白均能促进IRF3蛋白的表达,但在CV03毒株感染后均表现出抑制作用;VP5还能显著抑制IRF7蛋白的表达;VP5蛋白能够抑制I型IFN mRNA的转录,对白细胞介素IL-1β、IL-6 mRNA的转录表达都有一定的抑制作用。另外,CV03毒株的感染整体上显著抑制了抗病毒蛋白Mx基因的表达。结果表明,IBDV可通过VP5蛋白抑制模式识别受体TLR3 mRNA的转录及蛋白的表达,阻止信号向下游传递,也可通过抑制MDA5蛋白的表达来实现;对模式识别受体下游转录因子的检测结果说明,IBDV对机体的免疫抑制作用可通过抑制IRF3蛋白的表达来实现的,而对IRF3蛋白表达的抑制作用主要由IBDV的VP4和VP5蛋白共同执行;另外IBDV也通过VP5抑制IRF7 mRNA的转录及其蛋白表达来达到免疫抑制作用。IBDV与DF-1细胞互作过程中的免疫抑制作用主要通过VP5蛋白来实现,VP4起辅助作用。***4、VP5蛋白在鸡传染性法氏囊病毒感染过程中对非干扰素通路的影响为探讨VP4、VP5蛋白在鸡传染性法氏囊病毒感染过程中对宿主非干扰素通路的影响,本研究将所构建的VP4、VP5蛋白的真核表达质粒转染Ⅰ型干扰素表达缺陷型细胞Vero细胞,并用IBDV CV03病毒株感染转染后的细胞,Western-blot方法检测细胞中模式识别受体及其下游转录因子的表达;荧光定量PCR检测细胞因子及抗病毒基因的表达。结果显示,VP4蛋白在IBDV CV03病毒感染后在一定程度上能够提高TLR3、RIG-I的蛋白含量但差异不显著;VP5对TLR3、RIG-I等介导的天然免疫通路有一定的抑制作用;过表达的VP5在IBDVCV03病毒感染后显著抑制了 IRF3的表达及其磷酸化水平,也显著抑制了 IRF7和NF-κB的表达,并在抑制NF-κB后抑制了 TNF-α,而过表达VP4无此作用。结果说明,VP5蛋白对相关信号通路(宿主的非Ⅰ型干扰素产生途径)有一定的抑制作用,这种抑制作用和核转录因子及TNF-α的抑制密切相关。另一方面,VP4和VP5蛋白在Vero细胞中的过表达对IBDV的感染和复制的影响目前还不清楚,有待我们进一步的研究探讨。***4、VP5蛋白对病毒感染引起的细胞损伤的影响为探讨VP4、VP5对IBD病毒感染引起的细胞损伤的影响,本研究通过流式细胞检测技术,观察VP4、VP5蛋白表达后(或有Poly IC刺激或有IBDV CV03毒株感染)DF-1细胞内活性氧的水平,并用试剂盒检测DF-1细胞内SOD和NAG酶的活性以及细胞内LD的含量。结果显示,VP4、VP5蛋白均能刺激DF-1细胞活性氧的产生,同时SOD活性显著增加,LD含量增加;当有Poly IC刺激或IBDV CV03毒株感染时,活性氧的产生有所下降,而SOD活性依旧呈增加状态,但增加量有所下降,LD含量增加;VP4和VP5蛋白对NAG活性均未表现出明显影响。结果表明,IBDV感染中的细胞损伤很可能是宿主的免疫系统识别病原后作出的过激反应。IBDV感染后细胞内活性氧水平降低及SOD作为体内的抗氧化系统,活力减弱,可能是细胞损伤有所减少,表明IBDV感染可能会抑制细胞损伤或死亡,这可能有利于病毒在细胞内的复制。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒细胞转染病毒感染免疫抑制活性氧细胞损伤

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鸡传染性法氏囊病毒变异株的分离鉴定与致病性研究

鸡传染性法氏囊病毒变异株的分离鉴定与致病性研究

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作者：李娜福建农林大学

学位级别：硕士

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）,俗称冈伯罗病,是由鸡传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种重要的经济性、急性和高传染性免疫抑制疾病。IBDV主要损伤鸡的法氏囊,在宿主法氏囊和其... 详细信息

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）,俗称冈伯罗病,是由鸡传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种重要的经济性、急性和高传染性免疫抑制疾病。IBDV主要损伤鸡的法氏囊,在宿主法氏囊和其他淋巴组织复制,造成B淋巴细胞的坏死和崩解,从而引起感染鸡免疫抑制。由于疫苗的广泛使用和饲养管理水平的逐步提高,IBDV超强毒株（vv IBDV）所致的IBD已得到了良好的防控,但近年来由于IBDV变异毒株的出现,使IBD的发生和流行呈现新的特点,传统疫苗不再能完全保护雏鸡IBDV感染,给养禽行业带来了新的攻克难题。因此本研究从已免疫的发病肉鸡中分离鉴定IBDV变异毒株,建立感染模型检测其致病性,并验证针该变异株,现有商品疫苗产生的母源抗体水平对肉雏鸡的免疫保护作用,从而为临床防控该病提供参考。具体试验内容和结果如下: 1.鸡传染性法氏囊病毒变异株的分离鉴定（1）本研究从已免疫的发病肉鸡的法氏囊中分离鉴定了一株IBDV,并通过鸡胚传代获得了稳定的IBDV鸡胚毒,将其命名为IBDV-FJNP。传代过程中鸡胚病变表现为胚体水肿、出血,肝脏呈坏死性斑点,尿囊膜增厚明显,尿囊液呈胶冻状。病毒在细胞上传代培养发现该毒株难以在CEF细胞上生长。（2）通过动物回归试验发现,该分离株感染1日龄SPF雏鸡未出现明显的临床症状,但可引起法氏囊明显的萎缩,偶见法氏囊出血、黄染等病变,随着病程的逐渐发展,可见脾脏肿大明显,肾脏偶见尿酸盐沉积,胸肌腿肌轻微出血,胸腺有轻微点状出血等病变。这些数据表明,IBDV-FJNP分离株对雏鸡具有明显的致病性。 ***2基因的序列分析与IBDV新型基因型分类（1）对IBDV-FJNP分离株的VP2基因的核苷酸序列进行测定与分析,结果发现,在36株参考毒株中,该毒株与强毒株、变异株、减毒株、经典毒株和血清Ⅱ型的同源性范围分别为92.4%～93.4%,92.7%～98.3%,93.4%～95.3%,93.9%～94.1%,81.1%～81.3%。其中,与国内分离到的新的变异毒株SHG165同源性最高,达到98.3%;遗传演化分析显示,该毒株与变异株在同一个分支,而且与国内已公布的新型变异株形成一个独立亚群。（2）对VP2基因高变区的氨基酸序列比对结果显示,该毒株在VP2基因的高变区共有14个特征性的氨基酸位点,分别为213N、221K、222T、242V、249T、252I、254N、256V、279N、286I、294L、299S、318D、323E。在这些位点中,有三个与早期变异株相同的位点,分别为222T、286I、318D。不同的是,参考变异株的第249位均为K,该毒株则为T。此外,该毒株还具有三个新型变异株典型的氨基酸位点,分别为221K、252I、299S。（3）根据IBDV的新型基因型分类方案对该毒株基因分型,基于A节段VP2基因的高变区进行分类,发现该毒株属于A2d基因型;基于B节段基因代表性片段进行分类,发现该毒株属于B1基因型。因此,IBDV-FJNP属于A2d B1基因型,即新型变异株类群。这些结果表明,IBDV-FJNP分离株是一株IBDV新型变异毒株。 ***-FJNP分离株动物感染模型的建立将该毒株病毒原液进行10倍倍比稀释,通过每个稀释度接种9日龄SPF鸡胚,按照Reed-muench法计算出EID50为10-5.75/0.2 m L。该毒株分别感染1日龄、7日龄、14日龄和21日龄四个不同日龄的SPF鸡,发现在感染1日龄的SPF鸡时,病鸡发病特征尤为明显,主要表现为: （1）所有发病鸡未出现死亡现象,1日龄感染时发病率80%,临床症状轻微,常见白色稀便和水样腹泻,成团呆立和精神沉郁症状;7日龄感染时发病率60%,偶见稀便和腹泻,未见明显精神症状;14日龄和21日龄感染时,发病率为35%,未见明显临床症状,偶见剖检法氏囊萎缩和脾脏肿大; （2）BBIX和脾体比分析结果显示,1日龄感染时法氏囊萎缩显著,脾脏明显肿大,大腿内侧肌肉和胸部肌肉出血,偶见肾脏肿大,胸腺点状出血,腺胃乳头糜烂出血等。3 dpi～13 dpi,四个感染组在法氏囊和脾脏中均可检测到病毒,且法氏囊病毒复制水平明显高于脾脏; （3）病理切片表现为1日龄感染时,法氏囊结构受到了严重的损伤。5 dpi,固有层内广泛可见淋巴滤泡萎缩,排列疏松,皮髓质分界不清,淋巴细胞数量大量减少;7 dpi,可见较多淋巴细胞坏死,数量减少,间质结缔组织排列疏松;10 dpi,可见淋巴滤泡萎缩、消失,结构不清;13 dpi,法氏囊上皮细胞变性,胞质疏松淡染,滤泡皮髓质分界不清,淋巴细胞减少。以上结果表明,IBDV变异株感染1日龄雏鸡时致病特点

关键词：鸡传染性法氏囊病毒序列分析新型变异株致病性母源抗体

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鸡传染性法氏囊病毒核酸检测标准物质的研制

鸡传染性法氏囊病毒核酸检测标准物质的研制

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作者：赵亚飞河北工程大学

学位级别：硕士

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是一种急性、高度接触性传染病,由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease,IBDV)引起的。该病毒主要侵害雏鸡的淋巴组织,法氏囊最为严重,导致淋巴细胞受到损坏,降低或不能产生... 详细信息

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是一种急性、高度接触性传染病,由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease,IBDV)引起的。该病毒主要侵害雏鸡的淋巴组织,法氏囊最为严重,导致淋巴细胞受到损坏,降低或不能产生免疫球蛋白,从而出现免疫机能缺陷。这种病毒导致马立克氏病、新城疫等疫苗接种的免疫失败,出现发病率和死亡率急剧上升。因此,快速的诊断和检测鸡传染性法氏囊病毒对该病的防控意义重大。然而在检测鸡传染性法氏囊病毒时缺乏统一标准物质,这给病毒的定性和定量检测带来很多问题。因此研制鸡传染性法氏囊病毒核酸检测标准物质对于提高检测的准确度、保障动物产品质量安全具有重要意义。本研究采用灭活后的病毒液制备鸡传染性法氏囊病毒核酸检测标准物质。将纯化后的病毒进行无菌检验、外源性病毒检验,试验结果显示不含AIV、NDV、ALV、GPV、REV、EDSV等外源性病毒。对IBDV进行灭活并初步定量,将冻干保护剂与鸡传染性法氏囊病毒液混匀后,进行分装,所得样品采取冻干处理。本研究建立了鸡传染性法氏囊病毒核酸的实时荧光定量RT-PCR方法,并采用该方法检测鸡传染性法氏囊病毒核酸标准物的均匀性、稳定性。同时外部实验室对该标准物质进行协作标定,对定值数据进行统计分析处理,确保置信范围的准确性。将均匀性试验的检测数据进行方差分析,结果显示组内与组间无差异(P>0.05)。稳定性试验表明37℃存放7天、室温(25℃)21天、4℃4个月以及-20℃存放1年无明显变化。将均匀性、稳定性以及协作标定测定的不确定度引入定值结果中,在置信率为95%时,该标准物质的定值结果为(2.32±0.67)×10～5copies/μL。综上所述,本试验制备了鸡传染性法氏囊病毒核酸检测标准物,建立了鸡传染性法氏囊病毒核酸的实时荧光定量RT-PCR方法。鸡传染性法氏囊病毒核酸检测标准物具有较好的均匀性、稳定性,其定值结果为(2.32±0.67)×10～5copies/μL,并可用来评价实验室的检测方法以及选择检测试剂等。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光定量RT-PCR 标准物质协作标定

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