检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：程瞾扬州大学

学位级别：硕士

禽伤寒(fowl typhoid)是因感染鸡伤寒沙门菌(.Salmonella Gallinarum)而导致的急性或慢性败血性禽类传染病,表现出腹泻、厌食、精神不振等症状,给养禽业造成巨大的经济损失。该病可通过药物进行治疗,虽然减少了死亡,但长期用药会增加成... 详细信息

禽伤寒(fowl typhoid)是因感染鸡伤寒沙门菌(.Salmonella Gallinarum)而导致的急性或慢性败血性禽类传染病,表现出腹泻、厌食、精神不振等症状,给养禽业造成巨大的经济损失。该病可通过药物进行治疗,虽然减少了死亡,但长期用药会增加成本,易产生耐药性,且愈后带菌,因此,免疫接种仍是预防和控制该病的一个理想选择。最先被用于控制禽伤寒的减毒活疫苗9R,能有效的抵抗鸡伤寒沙门菌的感染,但其残留的毒力仍有致病性。因此,研制一种安全有效的鸡伤寒沙门菌减毒疫苗仍将十分必要。本研究利用自杀质粒介导的同源重组技术构建出鸡伤寒沙门菌1009株的spiC基因缺失株1009ΔspiC,在此基础上,运用λ噬菌体同源重组系统进一步敲除crp基因,构建出鸡伤寒沙门菌1009ΔspiCAcrp双基因缺失株。PCR和测序鉴定结果表明,成功获得鸡伤寒沙门菌双基因缺失株1009ΔspiCΔcrp。生物学特性研究结果显示,1009株spiC和crp基因的缺失能够得到稳定的遗传,缺失株部分生化特性发生了变化,生长速度减慢,与野生株相比其对雏鸡的LDso升高了107倍,表明双基因的缺失使鸡伤寒沙门菌1009ΔspiCΔcrp的毒力减弱。为评价1009ΔspiCΔcrp减毒株的安全性及保护效力,本实验采用肌肉注射的方式分别以1×105CFU、1×106CFU、1×107CFU的剂量对3日龄雏鸡进行初次免疫并于1周后再次免疫,同时对照组用PBS以相同方式进行免疫。体重测定以及临床观察结果显示其与对照组没有差别,表明减毒株对雏鸡的生长没有影响且不会出现副作用,细菌在肝脏和脾脏中短暂定殖后可被机体清除。血清IgG抗体水平和淋巴细胞增殖的检测结果表明,肌肉注射免疫后减毒株诱导雏鸡产生了良好的细胞免疫和体液免疫应答。免疫后21天,攻毒保护效力结果显示免疫组在攻毒后没有出现临床症状,免疫保护率为100%。另外,本研究以1009ΔspiCΔcrp减毒株口服免疫雏鸡后,对减毒株的安全性和免疫效力进行了初步研究。在对3日龄雏鸡进行口服免疫并于1周后进行再次免疫后,免疫组雏鸡体重增长与对照没有显著差异；产生了较高的IgG抗体水平,并于初次免疫3周后达到最高且显著高于对照组；IL-4、IL-6和IL-1p的表达水平也出现上调。在初次免疫后21天用强度株SG9攻毒后免疫组的保护率为100%,而对照组则为30%。同时组织病理切片也显示,免疫组无病变而对照组脏器病变明显。结果表明,1009ΔspicAcrp具有良好的安全性并能诱导雏鸡产生有效的免疫应答,是理想的防治鸡伤寒的疫苗候选株,为实现在实际生产中使用疫苗来预防并控制鸡伤寒奠定了基础。

关键词：鸡伤寒沙门菌减毒活疫苗 1009△spiC△crp 安全性保护力

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鸡伤寒沙门菌菌影免疫效果的评价

鸡伤寒沙门菌菌影免疫效果的评价

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作者：蔡利东西南大学

学位级别：硕士

禽伤寒（Fowl Typhoid,FT）是由鸡伤寒沙门菌（Salmonella gullinarum,SG）引起的一种败血性传染病,各个年龄阶段的禽类均易感,死亡率可达10%-50%。由于国内养殖业饲养管理水平较差,不能有效控制鸡伤寒沙门菌在畜禽之间的传播,给养殖业... 详细信息

禽伤寒（Fowl Typhoid,FT）是由鸡伤寒沙门菌（Salmonella gullinarum,SG）引起的一种败血性传染病,各个年龄阶段的禽类均易感,死亡率可达10%-50%。由于国内养殖业饲养管理水平较差,不能有效控制鸡伤寒沙门菌在畜禽之间的传播,给养殖业造成了巨大的经济损失。生产上比较常见的是鸡伤寒沙门菌减毒活疫苗,但是减毒活疫苗安全性较低,可能会对环境造成污染。因此研发一种具有高免疫原性的安全疫苗具有十分重要的意义。菌影是指缺少核酸、细胞质和胞质内容物的死菌菌体,它是通过生理生化等方法裂解细菌,在压强作用下使细菌内容物流出,形成的细菌空壳。与传统疫苗相比,菌影完整保留了细菌表面的抗原结构,具有很高的安全性和免疫效应,同时还具有佐剂的性质,且能够载入外源抗原、DNA疫苗、药物等物质,制备方法简单快捷,因此是一种十分优秀的灭活疫苗候选物。本试验拟通过PCR方法克隆E基因和SN基因（Staphylocooccal nuclease A）,构建两个裂解质粒。同时利用自杀质粒介导的方法构建鸡伤寒沙门菌asd缺失株,诱导裂解质粒表达制备菌影。通过动物实验评价菌影的免疫效果,为控制鸡伤寒沙门菌的传播,减少养殖业经济损失提供新的方法。1.裂解质粒和鸡伤寒沙门菌asd缺失株的构建目的:构建裂解性能优良的裂解质粒和鸡伤寒沙门菌asd缺失株。方法:通过PCR方法克隆E基因,利用酶切连接的方法构建裂解质粒p BAD+E。同时PCR克隆SN基因,通过Overlap PCR的方法将其与E基因融合,然后使用酶切连接的方法构建裂解质粒p BAD+ES。以鸡伤寒沙门菌野生株为模板构建自杀质粒,通过自杀质粒介导的方法构建鸡伤寒沙门菌asd缺失株。结论:成功构建了裂解质粒p BAD+E和p BAD+ES以及鸡伤寒沙门菌asd缺失株。2.鸡伤寒沙门菌菌影的制备目的:高效率的制备鸡伤寒沙门菌菌影。方法:将裂解质粒p BAD+E和p BAD+ES分别电转化入鸡伤寒沙门菌asd缺失株感受态细胞中,通过抗生素筛选和基因测序比对的方法筛选出阳性转化子。对阳性转化子进行溶菌动力学试验分析,确定最优的诱导裂解条件,同时比较两个裂解质粒的优劣,确定鸡伤寒沙门菌菌影最优的制备条件,最后扫描电镜观察菌影的形态结构。结论:通过试验可以发现,在裂解率和诱导时间上,裂解质粒p BAD+ES的性能要优于裂解质粒p BAD+E。将含有裂解质粒p BAD+ES的阳性转化子培养至OD600值约为0.4时,诱导2h后,裂解率最高,其裂解率可达99.85%;扫描电镜观察,菌影整体结构完整,在表面可见一个或数个明显的溶菌孔道。3.鸡伤寒沙门菌菌影免疫效果的初探目的:研究鸡伤寒沙门菌菌影对鸡免疫水平的影响。方法:将60只4日龄罗曼雏鸡随机分成三组:菌影疫苗组、灭活苗组和空白对照组,每组20只。适应性饲养一周后,10日龄第一次免疫,共免疫2次,每次间隔2周。分别于免疫前3天、首次免疫和加强免疫后10天进行翅静脉采血,分离血清,以提取的鸡伤寒沙门菌外膜蛋白OMP作为包被抗原,利用间接ELISA方法检测鸡血清Ig G抗体水平。第2次免疫两周后,用野生型鸡伤寒沙门菌进行攻毒。在攻毒后14天内,每天观察并记录鸡死亡数量。通过鸡的体液免疫水平、存活率、内脏病理变化综合评价鸡伤寒沙门菌菌影的免疫保护效果。结论:鸡伤寒沙门菌菌影免疫后无明显的应激反应,可诱导机体产生很好的体液免疫,免疫保护率可达67%。

关键词：鸡伤寒沙门菌菌影裂解质粒免疫效果评价

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新型凝集技术快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌

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畜牧兽医学报 2013年第12期44卷 1994-1999页

作者：杨磊赵广英窦文超浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品安全重点实验室杭州310012

为探求鸡白痢、鸡伤寒沙门菌快速检测的新型凝集技术，尝试用3种有机活性染料与抗体分别修饰二氧化硅活性微球制成免疫彩色二氧化硅微球（ICSN），构建快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌新型凝集技术。利用反相微乳法制备彩色二氧化硅纳米... 详细信息

为探求鸡白痢、鸡伤寒沙门菌快速检测的新型凝集技术，尝试用3种有机活性染料与抗体分别修饰二氧化硅活性微球制成免疫彩色二氧化硅微球（ICSN），构建快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌新型凝集技术。利用反相微乳法制备彩色二氧化硅纳米微球（CSN），用扫描电镜表征形貌特征和分散程度，通过凝集现象表征对鸡白痢、鸡伤寒沙门菌的检测效果。结果表明该新型凝集技术灵敏度好，其凝集结果醒目、直观、易于肉眼判别，且耗用抗体不到常规凝集试验的1／500，对目标菌的检测范围为10^2～10^9cfu·mL-1；重复性和稳定性好，4℃放置28d后，凝集效果与放置前无显著差异；具有较好的特异性和准确性。用ICSN构建的新型凝集技术具有灵敏、经济、稳定、简便、快速、准确等优点，不仅适用于快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌，还可为其它致病微生物快速检测提供基础模型。

关键词：有机活性染料免疫彩色二氧化硅微球新型凝集技术快速检测鸡白痢沙门菌鸡伤寒沙门菌

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鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的验证

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 166-172页

作者：龚建森徐敬潇张笛祁克宗徐步窦新红董永毅江苏省家禽科学研究所扬州225125 安徽农业大学兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室合肥230036 江苏省动物疫病预防控制中心南京210036

为验证鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性,本研究以3株鸡白痢、鸡伤寒沙门菌国际参考菌株和306株国内分离株为研究对象,采用5种已知的分子分型方法开展验证性实验。结果发现,基于特定基因可变区的2种分型方法具有良好的特异性,... 详细信息

为验证鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性,本研究以3株鸡白痢、鸡伤寒沙门菌国际参考菌株和306株国内分离株为研究对象,采用5种已知的分子分型方法开展验证性实验。结果发现,基于特定基因可变区的2种分型方法具有良好的特异性,其检测结果与生化分型结果一致,而3种基于特定基因单核苷酸多态性的分型方法则出现假阳性或假阴性的结果。上述结果表明,鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性仍需进一步验证。

关键词：鸡白痢沙门菌鸡伤寒沙门菌单核苷酸多态性生化鉴定分子分型

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一株高致病性鸡伤寒沙门菌的分离与鉴定

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中国家禽 2013年第16期35卷 47-49页

作者：李书光王玉茂管宇刘吉山李玲沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

对某蛋鸡场送检的10日龄左右病死雏鸡,进行了病理剖检,并开展了病原微生物分离培养、PCR鉴定、生化鉴定、血清学分型、动物回归、药物敏感性试验。结果显示,分离菌株为革兰氏阴性小杆菌,能够与鸡白痢鸡伤寒沙门菌阳性血清产生明显的凝集... 详细信息

对某蛋鸡场送检的10日龄左右病死雏鸡,进行了病理剖检,并开展了病原微生物分离培养、PCR鉴定、生化鉴定、血清学分型、动物回归、药物敏感性试验。结果显示,分离菌株为革兰氏阴性小杆菌,能够与鸡白痢鸡伤寒沙门菌阳性血清产生明显的凝集,PCR结果证实该分离株为鸡伤寒沙门菌;动物回归试验中,分离的鸡沙门菌具有较强的致病性;药物敏感性试验表明,分离株对替米考星、磷霉素、阿莫西林耐药,使用敏感药物氟苯尼考对鸡群沙门菌的控制取得了良好的治疗效果。

关键词：鸡伤寒沙门菌分离鉴定药敏试验回归试验

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鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌PCR-RFLP鉴别

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动物医学进展 2011年第6期32卷 80-83页

作者：涂玉蓉陈建红任涛张济培司兴奎牛森华南农业大学兽医学院广东广州510642 佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231

根据鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌flic基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约866 bp的产物,用Hinp1I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌。利用该技术对1株鸡白痢沙门菌标准株及2株鸡伤寒沙门菌标准... 详细信息

根据鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌flic基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约866 bp的产物,用Hinp1I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌。利用该技术对1株鸡白痢沙门菌标准株及2株鸡伤寒沙门菌标准株进行分子鉴别,结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对分离株进行鉴别,证明分离株均属于鸡白痢沙门菌。

关键词：鸡白痢沙门菌鸡伤寒沙门菌 PCR-RFLP flic基因鉴别

来源：评论

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鸡白痢与鸡伤寒沙门菌双重PCR方法的建立和初步应用

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中国兽医杂志 2019年第8期55卷 74-76页

作者：朱春红陶志云刘宏祥徐文娟章双杰李非唐燕飞蒋莲华江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125 广西富凤集团农牧有限公司广西南宁530000

分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带... 详细信息

分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带,鸡伤寒沙门菌显示417 bp和636 bp两个条带,而阴性对照未出现条带,与预期设计相符。双重PCR体系对56株不同血清型沙门菌鉴定结果与细菌学分离的血清型鉴定结果完全一致,说明本试验建立的双重PCR体系特异性良好,应用上述方法检测鸡场疑似20份临床样本,结果发现8株鸡白痢沙门菌阳性,1株鸡伤寒沙门菌阳性。上述结果表明,已建立双重PCR方法特异性检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌。本试验为鸡白痢和鸡伤寒不同生物型沙门菌的检测提供了一种简洁、敏感、特异的新方法。

关键词：鸡白痢沙门菌鸡伤寒沙门菌检测双重-PCR

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海兰褐蛋鸡感染鸡伤寒沙门菌的诊断

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家禽科学 2016年第9期 7-9页

作者：司振书殷国政路建彪李玉保聊城大学农学院山东聊城252000

某蛋鸡养殖场90日龄海兰褐蛋鸡疑似沙门菌感染,为确定病原,对该鸡群随机采血,通过平板凝集试验进行鸡白痢-鸡伤寒沙门菌的血清学诊断,同时,无菌采取病鸡肝脏进行了细菌分离培养、生化鉴定及药敏试验。结果,血清阳性率达54.5%,分离菌在... 详细信息

某蛋鸡养殖场90日龄海兰褐蛋鸡疑似沙门菌感染,为确定病原,对该鸡群随机采血,通过平板凝集试验进行鸡白痢-鸡伤寒沙门菌的血清学诊断,同时,无菌采取病鸡肝脏进行了细菌分离培养、生化鉴定及药敏试验。结果,血清阳性率达54.5%,分离菌在麦康凯琼脂上形成无色、透明、有光泽的圆形菌落,能发酵甘露醇、甘露糖、蕈糖、果糖、麦芽糖,不能发酵乳糖、棉子糖、蔗糖,鸟氨酸脱羧试验阴性,符合鸡伤寒沙门菌的生化特性。分离菌对头孢吡肟、头孢噻肟、氟苯尼考及丁胺卡那敏感,而对环丙沙星、氧氟沙星及强力霉素等耐药。表明该鸡群受到了鸡伤寒沙门菌的感染,采取了综合防治措施,病情得到有效控制。

关键词：海兰褐蛋鸡鸡伤寒沙门菌分离鉴定

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SG97A平衡致死系统的构建及其初步应用

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畜牧兽医学报 2015年第12期46卷 2243-2250页

作者：耿士忠陈晓娟潘志明焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

敲除鸡伤寒沙门菌(SG)减毒疫苗株97Aasd基因,构建宿主载体平衡致死系统并表达新城疫病毒(NDV)F蛋白,构建二价活菌苗。PCR扩增两段位于asd基因外侧的序列作为等位基因,以氯霉素抗性(CmR)基因替代asd基因,构建自杀质粒pGMB151Δasd::CmR,... 详细信息

敲除鸡伤寒沙门菌(SG)减毒疫苗株97Aasd基因,构建宿主载体平衡致死系统并表达新城疫病毒(NDV)F蛋白,构建二价活菌苗。PCR扩增两段位于asd基因外侧的序列作为等位基因,以氯霉素抗性(CmR)基因替代asd基因,构建自杀质粒pGMB151Δasd::CmR,通过***χ7213与SG97A固相杂交,将质粒转入SG97A,反向筛选获得SG97AΔasd::CmR,利用质粒pCP20去除CmR后,DAP的依赖菌株命名为SG97AΔasd。将含asd基因的质粒pYA3334转入SG97AΔasd中构建宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白。结果表明,通过等位基因重组方法,成功构建SG97AΔasd及宿主载体平衡致死系统,重组菌能够表达NDV-F蛋白,并能在鸡体内诱导产生特异性抗体。本研究成功构建SG97AΔasd宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白及其诱导宿主产生抗体,为应用该系统构建二价活菌苗的研究奠定了基础。

关键词：鸡伤寒沙门菌 asd基因宿主载体平衡致死系统 NDV-F蛋白

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鸡白痢沙门菌基因组差异片段的筛选与分析

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中国兽医科学 2007年第7期37卷 563-567页

作者：徐耀辉焦新安李求春潘志明黄金林扬州大学生物科学与技术学院

采用抑制性消减杂交技术(SSH)对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析。结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段。经同源分析,这些序列可分为3类:噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列。这些差... 详细信息

采用抑制性消减杂交技术(SSH)对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析。结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段。经同源分析,这些序列可分为3类:噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列。这些差异片段包含一些重要的沙门菌毒力相关基因,如编码大肠杆菌素I、paJ蛋白、尾突蛋白、切除酶的基因。结果表明,鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株基因组间存在较多差异基因,这些差异片段为确定鸡白痢沙门菌特异性遗传标志,建立分子鉴别新体系提供了基础。

关键词：鸡白痢沙门菌鸡伤寒沙门菌抑制性消减杂交基因组差别

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