检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王希军山东农业大学

学位级别：硕士

本研究在2006—2007年从山东省分离到10株肾型IBV,并通过电镜形态观察、致鸡胚矮小化试验、病毒干扰试验、血凝试验、动物回归试验以及分子生物学试验等方法对其进行了鉴定,同时对病毒基因组中的核蛋白基因序列进行了测定、分析和比较,... 详细信息

本研究在2006—2007年从山东省分离到10株肾型IBV,并通过电镜形态观察、致鸡胚矮小化试验、病毒干扰试验、血凝试验、动物回归试验以及分子生物学试验等方法对其进行了鉴定,同时对病毒基因组中的核蛋白基因序列进行了测定、分析和比较,以说明山东省肾型IBV毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况,同时构建系统进化树,分析山东省肾型IBV分离株与参考株之间的系统进化关系,探讨山东省肾型IB流行的背景和原因。现地濒死病鸡病变组织处理后接种9～11日龄SPF鸡胚,接种鸡胚后72h内收集尿囊液,同时观察胚体病变。传3～7代后,发现死亡鸡胚表现出生长发育障碍(侏儒胚),胚体弥漫性出血,尤其是头部出血比较明显,未死亡鸡胚呈现典型的卷曲胚。病毒尿囊液对鸡外周血红细胞无凝集活性。病毒尿囊液在电镜下表现为病毒粒子大多呈球形,直径约为80～120nm,有囊膜,表面有松散、均匀排列的冠状突起,呈现典型的冠状病毒特征,而且未发现有其它病毒粒子的存在。病毒干扰试验可见其能明显干扰NDV在鸡胚中的增殖。未经任何处理的10株分离株病毒对10mL/L的鸡红细胞无血凝活性,而经Ⅰ型磷脂酶C处理后10株分离株病毒对鸡红细胞具有血凝活性。从10株分离病毒的SPF鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将产物电泳,均获得了1600bp左右的核酸片段,与当初设计引物所要扩增的IBV基因片段大小一致,所以可以断定本研究所分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。回归动物后,均表现为肾肿胀、有尿酸盐沉积,形成“花斑肾”,因而确认从山东省分离到的这10株病毒为肾型IBV。应用RT-PCR方法对从山东省分离鉴定到2006—2007年间的10株肾型IBV核蛋白基因序列进行了克隆、测定及分析,结果表明,这些毒株核蛋白基因的核苷酸序列由1230 bp组成,编码由409个氨基酸残基组成的多肽,与Beaudette株相应区域基因序列长度一致。10株肾型IBV分离毒株之间相比,N基因核苷酸及推导氨基酸的同源性分别为84.6%～99.7%和86.6%～99.8%,与参考毒株N基因核苷酸及推导氨基酸的同源性分别为84.1%～98.9%和86.1%～98.5%。进行序列比较后发现,山东省大部分肾型IBV分离株的核蛋白基因的核苷酸序列存在广泛的基因突变现象,这可能是造成山东省肾型IBV分离株基因组发生变异的主要原因之一。根据本研究从山东省分离鉴定到2006—2007年间的10株肾型IBV病毒与我国其他IBV分离株、我国常用疫苗株以及国外参考毒株绘制的系统进化树发现,从山东省分离到10株肾型IBV具有两个大的基因进化群。SD0605和SD0608属于基因I型,其中主要是Mass血清型毒株,包括美国、荷兰、澳大利亚、日本等国家的IBV代表性毒株以及国内的肾型IBV代表毒株。SD0605 N基因与中国广东IBV肾型疫苗株D41以及H120同源性最高,核苷酸及推导氨基酸同源性均分别为98.9%和98.5%;SD0608 N基因与中国广西肾型毒株GX2的同源性最高,核苷酸及推导氨基酸同源性分别为94.9%和95.6%。这提示SD0605和SD0608的存在可能与山东省长期使用弱毒疫苗有关,存在基因重组现象。其余的八株分离株病毒属于基因Ⅱ型,其中主要是广东肾型IBV毒株GDS14和新疆肾型IBV毒株LX4,以及山东的IBV分离株QXIBV,与我国常用弱毒疫苗株如H120、H52等关系较远。以上结果说明山东省肾型IBV毒株与我国其他地方的肾型IBV毒株关系比较近,现有的疫苗可以对部分毒株起到一定的预防作用,但对于SD0702这种变异如此大的毒株可能很难有效预防,有必要继续跟踪研究山东省的肾型IBV流行情况,并在此基础上进行新型疫苗的研制和制定有效的肾型IBV防控措施。

关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒分离 N基因序列分析

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鸡α干扰素的原核表达及其抗病毒效果研究

鸡α干扰素的原核表达及其抗病毒效果研究

引用

作者：丰宗洋山西农业大学

学位级别：硕士

[目的]研究原核表达的鸡α干扰素的抗病毒效果,为原核表达的鸡a干扰素的临床应用奠定基础。 [方法]①采用RT-PCR技术,从鸡脾脏总RNA中扩增出鸡α干扰素全长基因(Ch1FN-α)和去信号肽序列的成熟蛋白基因(Ch1FN-α’).②将Ch1FN-α与表达... 详细信息

[目的]研究原核表达的鸡α干扰素的抗病毒效果,为原核表达的鸡a干扰素的临床应用奠定基础。 [方法]①采用RT-PCR技术,从鸡脾脏总RNA中扩增出鸡α干扰素全长基因(Ch1FN-α)和去信号肽序列的成熟蛋白基因(Ch1FN-α’).②将Ch1FN-α与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α’,然后转化到感受态细胞BL21中诱导表达,对表达产物鸡a干扰素变性、纯化、复性并测浓度。③采用细胞病变抑制法,在鸡胚成纤维(CEF)细胞上测定鸡α干扰素对鸡痘病毒的抗病毒活性;通过鸡胚实验,注射不同剂量的鸡α干扰素,研究其对肾型传染性支气管炎病毒的抑制效果。 [结果]①扩增出Ch1FN-α和Ch1FN-α’分别为582bp和489bp, DNA测序结果与NCBI中鸡α干扰素的基因对比,同源性分别为100%和99.8%,说明克隆成功;②测序表明成功构建出pET-32a-ChIFN-α重组表达质粒,诱导表达产物蛋白分子量约为36kD,与预期相符,经变性、Ni2+-NTA亲和层析纯化,递度透析复性后测得表达蛋白的浓度为285μg/mL;②研究表明：表达蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上抗鸡痘病毒活性为1.34×104U/mg;通过鸡胚实验,注入1μg表达蛋白组的鸡胚全部死亡,3μg组鸡胚存活率在80%,而9μg和27μg组鸡胚生长良好。 [结论]重组鸡α干扰素对鸡痘病毒和鸡肾型传染性支气管炎病毒都有显著的抗病毒效果。

关键词：鸡 α干扰素原核表达鸡痘病毒鸡肾型传染性支气管炎病毒

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基础学科

引用

中国农业文摘（兽医） 1996年第4期12卷 5-24页

S852.165 961093实验性皮肤角化不全症仔猪被毛及各组织中锌.铜含量测定/刘晋平(山西农业大学动物医学系030801),李宏全//畜牧与兽医.-1995,27(5).-197～200以钙:锌=330:1与516:1的日粮饲喂健康断乳仔猪120天.复制了仔猪皮肤角化不全症.

关键词：单克隆抗体鸡肾型传染性支气管炎病毒鸡传染性支气管炎病毒动物医学甘肃农业大学畜牧兽医学报抗原红细胞新城疫病毒免疫原性

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鸡肾型IBV的分离及其N基因的克隆与测序

引用

家禽科学 2008年第9期 11-14页

作者：张建臣山东畜牧兽医职业学院潍坊261061

通过病毒形态学观察、血凝试验、病毒干扰实验、动物回归实验等分离鉴定了1株鸡肾型传染性支气管炎病毒。利用RT-PCR技术对分离毒株的N基因进行了扩增,经克隆、序列测定和分析,证实分离株为肾型IBV。

关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒分离 N基因序列测定

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鸡传染性支气管炎研究进展

引用

郑州牧业工程高等专科学校学报 1999年第4期19卷 273-275页

作者：张桂云刘兴友邓同炜杨宝兰郑州牧专医药系郑州450008 镇平县畜牧工作站镇平474260

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,简称IB)是由禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触传染的病毒性疾病。主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统,使病鸡出现呼吸困难、肾脏病变、产蛋下降等症候。 ... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,简称IB)是由禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触传染的病毒性疾病。主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统,使病鸡出现呼吸困难、肾脏病变、产蛋下降等症候。本病首次由Schalk和Hawm(1931)报道,1936年,Beach和Schalm证明其病原为病毒。早期的报道表明传染性支气管炎病毒主要危害幼鸡呼吸道(呼吸型IB),也危及育成鸡和产蛋鸡群,使之抵抗力降低和产蛋下降,蛋品质降低。1962年Winterfield和Hitchner在美国报道了致肾病变传染性支气管炎的出现,证明了IBV的某些毒株主要引起肾脏病变。EI—Houadfi和Jone(1985)

关键词：鸡传染性支气管炎鸡肾型传染性支气管炎病毒禽传染性支气管炎病毒肾脏病变纤突蛋白病理变化兽医杂志产蛋下降呼吸道症状基因工程苗

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鸡α干扰素的原核表达及其抗病毒效果研究

鸡α干扰素的原核表达及其抗病毒效果研究

引用

中国畜牧兽医学会动物生理生化学分会第十四次学术交流会

作者：陈书明丰宗洋杨文艳山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

通过RT-PCR技术从海兰褐鸡脾脏组织中扩增出鸡α干扰素(ChIFN-α)成熟蛋白基因.序列分析表明扩增出的ChIFN-α的成熟蛋白基因为489bp.利用基因重组技术构建重组表达载体pET-32a-ChIFN-α,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达... 详细信息

通过RT-PCR技术从海兰褐鸡脾脏组织中扩增出鸡α干扰素(ChIFN-α)成熟蛋白基因.序列分析表明扩增出的ChIFN-α的成熟蛋白基因为489bp.利用基因重组技术构建重组表达载体pET-32a-ChIFN-α,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE分析表明,重组鸡α干扰素融合蛋白(rChIFN-α)的分子量约为36Kda,并以包涵体形式存在.

关键词：鸡 α干扰素原核表达抗病毒效果鸡痘病毒鸡肾型传染性支气管炎病毒

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