检索结果-内蒙古大学图书馆

干旱地区农业研究 2025年第1期43卷 241-249页

作者：王玥马永强青海大学农林科学院青海西宁810016 农业部西宁作物有害生物科学观测实验站青海西宁810016 青海省农业有害生物综合治理重点实验室青海西宁810016

通过病原菌培养特征、致病性验证和16S rRNA基因序列及特异性基因序列分析,对采自青海省海东市和西宁市马铃薯主产区16个乡镇的马铃薯黑胫病疑似病样进行分离和鉴定,并采用生长速率法测定7种杀菌剂对马铃薯黑胫病原菌的室内毒力。从采集... 详细信息

通过病原菌培养特征、致病性验证和16S rRNA基因序列及特异性基因序列分析,对采自青海省海东市和西宁市马铃薯主产区16个乡镇的马铃薯黑胫病疑似病样进行分离和鉴定,并采用生长速率法测定7种杀菌剂对马铃薯黑胫病原菌的室内毒力。从采集的68株黑胫病疑似病样中共分离鉴定到15株黑腐果胶杆菌Pectobacterium atrosepticum。室内毒力测定结果表明7种化学药剂均对病原菌有不同程度的抑制作用,其中0.3%四霉素水剂、46%氢氧化铜可湿性粉剂和30%琥胶肥酸铜可湿性粉剂抑菌效果最好,EC_(50)(对供试生物发生50%效果的药剂剂量或浓度)分别为1.355、1.403、1.835μg·mL^(-1),其次为10%纳米银水剂、3%中生菌素可湿性粉剂、40%喹啉铜悬浮剂,EC_(50)值分别为106.429、146.332、149.121μg·mL^(-1),病原菌对10%苯醚甲环唑水分散粒剂敏感性最差,EC_(50)值为1 384.943μg·mL^(-1)。

关键词：马铃薯黑胫病病原鉴定黑腐果胶杆菌杀菌剂

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土壤中马铃薯黑腐果胶杆菌的荧光定量检测方法

土壤中马铃薯黑腐果胶杆菌的荧光定量检测方法

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中国植物病理学会2021年学术年会

作者：谭娇娇张世昌郭成瑾王喜刚郭荣君沈瑞清李世东宁夏大学农学院宁夏农林科学院植物保护研究所中国农业科学院植物保护研究所

马铃薯黑胫病是一种世界性的细菌病害,在世界各地均有分布。黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)是引起马铃薯黑胫病的主要病原菌,该病原主要通过切刀、水流和土壤带菌传播。马铃薯黑胫病菌可在土壤中存活,依附病株残体可存活更... 详细信息

马铃薯黑胫病是一种世界性的细菌病害,在世界各地均有分布。黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)是引起马铃薯黑胫病的主要病原菌,该病原主要通过切刀、水流和土壤带菌传播。马铃薯黑胫病菌可在土壤中存活,依附病株残体可存活更长时间。笔者在前期研究中发现黑腐果胶杆菌是宁夏马铃薯黑胫病的重要致病菌,分离频率高、分布广泛,而且在多年连作地块发病严重,因此非常有必要建立土壤中黑腐果胶杆菌的监测方法,以实现马铃薯黑胫病的早期监测和预警。Boer (1995)报道利用引物Eca1f/Eca2r可特异性扩增黑腐果胶杆菌(***),扩增条带约690 bp。程亮(2020)报道,利用16S rRNA基因通用引物和果胶裂解酶基因特异性引物ADE1/ADE2可对马铃薯软腐病菌(*** ***)和黑胫病菌(***)进行区分,并明确西北地区马铃薯黑胫病的主要病原菌为***。杨松等(2009)建立了马铃薯黑胫病荧光定量PCR检测体系,但目前尚缺少土壤中黑腐果胶杆菌的荧光定量监测方法。笔者利用引物Eca1f/Eca2r,根据荧光定量扩增要求,共设计了11对荧光定量PCR引物,其中引物paf4/par4可从宁夏黑腐果胶杆菌分离株中特异性扩增出长度约为152 bp的单一条带。为了检测该引物对土壤中黑腐果胶杆菌扩增特异性,笔者从宁夏不同地市和北京采集土壤,然后加入黑腐果胶杆菌,还采集了盆栽发病植株周围土壤,提取DNA后,进行荧光定量扩增。结果表明:所建立的荧光定量反应体系可从上述土壤DNA中扩增出黑腐果胶杆菌的特异性条带,溶解曲线峰单一,峰尖锐,说明所建立的荧光定量体系适用于复杂土壤环境中目标菌的检测。在此基础上,建立了目的基因重组质粒标准曲线,y=0.996x+36.813,R=0.996,扩增效率为107.3%,检测下限为1.39×10 copies/mL。通过在土壤中加入黑腐果胶杆菌菌悬液,制备浓度为7.70×10cfu/g～7.70×10cfu/g的带菌土壤,建立了土壤中黑腐果胶杆菌荧光定量标准曲线,方程为y=0.825 8x-0.879 8,R=0.992 5,对应的目的基因重组质粒检测下限为3.88×10 copies/mL,可用于马铃薯黑胫病带菌土壤的定量检测,为马铃薯黑胫病的监测预警提供了技术和方法。

关键词：马铃薯黑胫病黑腐果胶杆菌荧光定量检测方法

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一株内蒙古自治区武川县马铃薯黑胫病菌的分离鉴定及全基因组分析

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植物保护学报 2024年第4期51卷 794-803页

作者：孙平平张磊魏旭张竞丹夏占峰李正男塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔市843300 内蒙古农业大学园艺与植物保护学院呼和浩特010018

为明确内蒙古自治区武川县马铃薯黑胫病的病原种类及其致病机制,从当地表现黑胫病的马铃薯植株上分离病原菌,利用薯块接种法和盆栽接种法验证其致病性,利用形态学特征结合分子生物学技术对致病菌株进行鉴定,采用Pacbio SequelⅡ三代测... 详细信息

为明确内蒙古自治区武川县马铃薯黑胫病的病原种类及其致病机制,从当地表现黑胫病的马铃薯植株上分离病原菌,利用薯块接种法和盆栽接种法验证其致病性,利用形态学特征结合分子生物学技术对致病菌株进行鉴定,采用Pacbio SequelⅡ三代测序技术测定致病菌株的全基因组序列并对其致病机制进行分析。结果表示:分离获得1株菌株TDHJ7,该菌株能引起马铃薯典型黑胫病症状,经形态学特征、16S rRNA序列分析以及全基因组比较最终将其鉴定为黑腐果胶杆菌Pectobacterium atrosepticum,该菌株的全基因组大小为4997951 bp,有4623个编码序列。致病菌株基因注释结果显示,菌株TDHJ7中共有245个基因参与致病过程,其中参与果胶酶、纤维素酶和蛋白酶合成的基因分别有22、19和12个,参与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型分泌系统的基因有171个,参与编码毒素的基因有21个,表明菌株TDHJ7可能主要通过产生果胶酶、纤维素酶和蛋白酶等细胞壁降解酶,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型分泌系统参与毒素类物质的转运,同时产生毒素类物质来引起植物发病。

关键词：内蒙古自治区马铃薯黑胫病分离鉴定全基因组黑腐果胶杆菌致病机制

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广东马铃薯黑胫病的病原鉴定

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植物病理学报 2015年第5期45卷 449-454页

作者：佘小漫蓝国兵何自福汤亚飞杜振国罗方芳广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

通过对分离自马铃薯黑胫病的病原菌在选择性CVP培养基上菌落形态观察、致病性测定及16S r DNA序列比较,鉴定出引起广东省冬种马铃薯黑胫病的病原为γ-变形菌门肠杆菌科果胶杆菌属黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)。生理生化... 详细信息

通过对分离自马铃薯黑胫病的病原菌在选择性CVP培养基上菌落形态观察、致病性测定及16S r DNA序列比较,鉴定出引起广东省冬种马铃薯黑胫病的病原为γ-变形菌门肠杆菌科果胶杆菌属黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)。生理生化试验表明,该病原菌菌株不能在37℃生长,能使明胶液化,具有运动性、耐盐性(5%Na Cl),对红霉素不敏感;过氧化氢酶和蔗糖还原试验反应均为阳性,氧化酶、吲哚产生和磷酸酶活性试验均为阴性;可利用乳糖、麦芽糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、柠檬酸盐和α-甲基酮葡萄糖苷,不能利用山梨醇、d-阿拉伯糖和丙二酸盐。研究结果可为广东冬种马铃薯黑胫病的综合防治提供科学依据。

关键词：马铃薯黑胫病黑腐果胶杆菌病原鉴定生理生化特征

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基于等温扩增的马铃薯黑胫病检测技术的研究

基于等温扩增的马铃薯黑胫病检测技术的研究

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作者：王玥青海大学

学位级别：硕士

马铃薯是四大主要粮食作物之一,随着我国马铃薯主粮化战略的推进,种植面积不断增加,病虫害的发生也逐年加重。作为马铃薯种薯重要生产地的青海省,近年来受马铃薯黑胫病的威胁日趋严重,给马铃薯种薯生产带来巨大挑战。本研究通过病原菌... 详细信息

马铃薯是四大主要粮食作物之一,随着我国马铃薯主粮化战略的推进,种植面积不断增加,病虫害的发生也逐年加重。作为马铃薯种薯重要生产地的青海省,近年来受马铃薯黑胫病的威胁日趋严重,给马铃薯种薯生产带来巨大挑战。本研究通过病原菌培养特征、致病性验证和16S rRNA基因序列及特异性基因序列分析,对采自青海省海东市和西宁市马铃薯主产区16个乡镇的马铃薯黑胫病疑似病样进行了分离和鉴定;并基于病原菌建立了环介导等温扩增技术（LAMP）和重组酶聚合酶等温扩增结合测流层析试纸条（RAA-LFD）快速检测马铃薯黑胫病菌的方法。主要研究结果如下: 1.从青海省乐都区、民和县、互助县、城北区、湟中区、湟源县、大通县七个马铃薯主产区采集疑似马铃薯黑胫病样本68份,经分离、纯化鉴定得到15株病菌,根据致病性测定和分子生物学鉴定青海省马铃薯黑胫病的主要病原菌为黑腐果胶杆菌Pectobacterium atrosepticum。 2.利用*** gyrB基因的保守片段设计LAMP引物,通过实时荧光环介导等温扩增技术对其进行特异性验证,对内外引物浓度比、环引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Bst 2.0浓度、甜菜碱浓度、反应温度和时间进行优化,成功建立了可视化LAMP检测体系。经过LAMP检测优化可知,Mg2+使用量最佳浓度为4 mmol/L,dNTP最佳使用浓度为1.6 mmol/L,Bst 2.0最佳浓度为6.4U/mL,甜菜碱使用量最佳浓度为0.3 mol/L。建立的LAMP检测体系最佳反应温度为61℃,最佳反应时间为40 min。建立的检测体系对***具有良好的特异性,与其他病原菌无交叉反应。对基因组DNA的最低检测限度为6.4pg·μL-1,是qPCR检测方法灵敏度的5倍。利用建立的可视化LAMP检测体系对田间疑似黑胫病样本进行检测,结果表明建立的可视化LAMP检测体系与PCR检测方法结果一致,可成功检测出***。 3.利用*** APC基因为靶标设计引物和探针,建立RAA检测体系,设计的特异性引物对***进行检测,RAA检测可以在37℃下20min完成扩增。该方法对马铃薯黑腐果胶杆菌***具有很强的特异性。RAA-LFD检测的最佳反应温度为36℃、最佳反应时间为20 min以上,对黑腐果胶杆菌DNA的最低检测限10 fg·μL-1。人工接种薯块和植株进行检测的结果表明该方法能够准确检测到感染早期的病原菌,且无需提取植物组织DNA,可以直接以粗提取物为模板进行检测,大大缩短了检测时间,且操作简单,具有实际应用价值。这也是RAA-LFD技术检测***的首次报道,为马铃薯黑胫病的早期诊断提供技术支持。

关键词：马铃薯黑胫病黑腐果胶杆菌 LAMP检测 RAA检测 RAA-LFD检测

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马铃薯黑胫病病原菌的噬菌体分离、表征及防治研究

马铃薯黑胫病病原菌的噬菌体分离、表征及防治研究

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作者：刘俊丽内蒙古大学

学位级别：硕士

黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum,Pba)通过产生大量果胶酶来降解马铃薯组织细胞的细胞壁果胶成分,破坏细胞组织,造成马铃薯植株茎部变黑腐烂,块茎发生软腐。目前,针对由Pba导致的马铃薯黑胫病仍缺乏有效的防治办法。噬菌体是... 详细信息

黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum,Pba)通过产生大量果胶酶来降解马铃薯组织细胞的细胞壁果胶成分,破坏细胞组织,造成马铃薯植株茎部变黑腐烂,块茎发生软腐。目前,针对由Pba导致的马铃薯黑胫病仍缺乏有效的防治办法。噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌等微生物的病毒,其中烈性噬菌体导致宿主菌细胞裂解,可用于植物病害的防治。从土壤和水样中分离获得7株烈性噬菌体。噬菌体表征结果表明,噬菌斑直径1.5-2 mm,最佳感染复数0.000001-0.01。吸附时间6-30 min,潜伏时间15-40 min,裂解时间40-80 min。筛选出吸附、潜伏时间短,而裂解时间长的3株噬菌体P-Pba-1、P-Pba-2和P-Pba-7。电镜结果表明这3株噬菌体均为无尾噬菌体,头部直径30-80 nm。选择 P-Pba-1 作为单一制剂 G1,P-Pba-1、P-Pba-2、P-Pba-7 的混合物作为混合制剂G2,在田间网室进行马铃薯黑胫病防治试验,试验包括治疗组(先注射病原菌后喷洒噬菌体)和预防组(先喷洒噬菌体后注射病原菌)。治疗组结果表明,G1处理组的马铃薯植株存活率40-100%,其中处理组G1-A4治疗效果最好,植株存活率为100%;G2处理组的马铃薯植株存活率60-90%,其中处理组G2-A3治疗效果最好,植株存活率为90%。预防组结果表明,G1处理组的马铃薯植株存活率60-100%,其中处理组G1-B1和G1-B2预防效果最好,植株存活率为100%;G2处理组的马铃薯植株存活率80-100%,其中处理组G2-B1和G2-B2预防效果最好,植株存活率为100%。以上结果表明,噬菌体对马铃薯黑胫病有防治效果,可进一步开发噬菌体制剂,用于马铃薯黑胫病的防治。

关键词：马铃薯黑胫病黑腐果胶杆菌烈性噬菌体生物防治

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