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中国免疫学杂志 2015年第2期31卷 215-220页

作者：陈松彪李静郁川何雷张春杰程相朝李银聚颜云飞金修哲陈桂华赵战勤河南省动物疫病与公共安全院士工作站/河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003

目的:为了研制更加安全的鼠伤寒沙门菌弱毒株,本研究构建了鼠伤寒沙门菌sl1344Δsip B基因缺失突变株。方法:首先构建含缺失585 bp sipB基因的重组自杀性质粒PREΔsipB,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选出sl1344的s... 详细信息

目的:为了研制更加安全的鼠伤寒沙门菌弱毒株,本研究构建了鼠伤寒沙门菌sl1344Δsip B基因缺失突变株。方法:首先构建含缺失585 bp sipB基因的重组自杀性质粒PREΔsipB,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选出sl1344的sip B缺失株。结果:PCR及测序结果表明sl1344ΔsipB构建成功。进一步生物学特性研究表明,缺失株sl1344ΔsipB保留了亲本菌株sl1344的血清型1,4,5,12:i:1,2,且能够稳定遗传缺失585 bp的sipB基因,生长速度没有发生明显改变;但是,与亲本株sl1344相比,其毒力发生明显改变,缺失株sl1344ΔsipB口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为1.70×108CFU,毒力较亲本株sl1344降低至1.4%,免疫保护效力实验显示,对6周龄BALB/c小鼠免疫后第17天,鼠伤寒沙门菌野生株攻毒有50%的保护率。在给小鼠免疫后第14天血清抗体IgG达到最高。结论:结果表明,sl1344ΔsipB基因缺失株构建成功,遗传稳定,毒力明显降低,且具有较好的免疫原性,为研究鼠伤寒沙门菌sipB基因与其致病力之间的关系提供了方法,并为研制安全有效的沙门菌疫苗弱毒株奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 sipB基因缺失株生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sl1344株分泌性蛋白K1缺失株的构建及其生物学特性的初步研究

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1087-1093页

作者：杨亚东张春杰程相朝丁轲李银聚郁川廖成水陈松彪王二鑫张晓洁河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株,本研究首先构建了含缺失1 011 bp sseK1基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选sl1344的sseK1缺失株。PCR、双酶切及测... 详细信息

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株,本研究首先构建了含缺失1 011 bp sseK1基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选sl1344的sseK1缺失株。PCR、双酶切及测序结果表明sl1344ΔsseK1构建成功。生物学特性初步研究表明,与亲本菌株sl1344相比,缺失株sl1344ΔsseK1保留了亲本株sl1344的血清型1,4,5,12∶i∶1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK1基因,生长速度及生化特性没有发生明显改变。小鼠毒力试验表明,sl1344ΔsseK1缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD_(50)为6.63×10~8CFU,毒力较亲本株sl1344下降至0.048%。免疫保护效力试验显示,小鼠免疫后第14天血清抗体Ig G含量达到最高,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率。以上研究结果表明,sl1344株sseK1基因缺失株构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为研究sseK1基因的致病机制及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 重组自杀性质粒 sseK1基因生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sl1344株分泌性蛋白K1缺失株构建及其生物学特性初步研究

鼠伤寒沙门菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株构建及其生物学特性初步...

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九届全国会员代表大会

作者：杨亚东张春杰丁轲贾艳艳李静程相朝河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳 471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳 471023

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株.本研究首先构建了含缺失1011 bp sseK1 基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选sl1344 的sseK1 缺失株.PCR、双酶切及... 详细信息

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株.本研究首先构建了含缺失1011 bp sseK1 基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选sl1344 的sseK1 缺失株.PCR、双酶切及测序结果表明sl1344ΔsseK1 构建成功.生物学特性初步研究表明,与亲本菌株sl1344相比,缺失株sl1344ΔsseK1 保留了亲本株sl1344 的血清型1,4,5,12：i：1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK1 基因,生长速度及生化特性没有发生明显改变;但小鼠毒力试验表明,sl1344ΔsseK1 缺失株口服感染6 周龄BALB/c 小鼠的LD50 为6.63 × 108 CFU,毒力较亲本株sl1344 下降至0.048％;免疫保护效力实验显示,小鼠免疫后第14 天血清抗体IgG 含量达到最高,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17 天的小鼠攻毒有62.5％的保护率.以上研究结果表明,sl1344 株sseK1 基因缺失株构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为研究sseK1 基因的致病机制及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础.

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 重组自杀性质粒 sseK1基因生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sl1344株侵袭性蛋白B缺失株的构建及免疫学特性

鼠伤寒沙门菌SL1344株侵袭性蛋白B缺失株的构建及免疫学特性

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会

作者：陈松彪李静郁川余祖华颜云飞金修哲陈桂华赵战勤丁轲程相朝河南省动物疫病与公共安全院士工作站/河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室

为构建缺失侵袭性蛋白B（SipB）基因（585 bp）的鼠伤寒沙门菌。本研究以鼠伤寒沙门菌sl1 344株为亲本株,利用重组自杀性质粒（pRE△sipB）介导的同源重组技术,两步法缺失并筛选sipB基因缺失株（sl1344△sipB）。结果表明,S L1344△sip... 详细信息

为构建缺失侵袭性蛋白B（SipB）基因（585 bp）的鼠伤寒沙门菌。本研究以鼠伤寒沙门菌sl1 344株为亲本株,利用重组自杀性质粒（pRE△sipB）介导的同源重组技术,两步法缺失并筛选sipB基因缺失株（sl1344△sipB）。结果表明,S L1344△sipB保留了亲本菌株S L1344的血清型1,4,5,12:i:1,2,生长速度没有发生明显改变;但与亲本株sl1344相比,其毒力发生明显改变,缺失株口服感染6周龄Balb/c小鼠的LD为1.70×10～8CFU,毒力较亲本株下降至1.4%。免疫保护效力试验显示,6周龄Balb/c小鼠免疫sl1344△sipB后第17d,利用鼠伤寒沙门菌野生株攻毒,保护率为53.3%,免疫后14天血清抗体滴度达到峰值。本研究结果为进一步研究鼠伤寒沙门菌SipB蛋白与其致病力之间的关系,以及其缺失株的免疫原性奠定基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 sipB基因缺失株免疫生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sl1344株分泌性蛋白K1缺失株构建及其生物学特性初步研究

鼠伤寒沙门菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株构建及其生物学特性初步...

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：杨亚东张春杰丁轲贾艳艳李静程相朝河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株。本研究首先构建了含缺失1011 bp sse K1基因的重组自杀性质粒PREΔsse K1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选sl1344的sse K1缺失株。PCR、双酶切... 详细信息

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株。本研究首先构建了含缺失1011 bp sse K1基因的重组自杀性质粒PREΔsse K1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选sl1344的sse K1缺失株。PCR、双酶切及测序结果表明sl1344Δsse K1构建成功。生物学特性初步研究表明,与亲本菌株sl1344相比,缺失株sl1344Δsse K1保留了亲本株sl1344的血清型1,4,5,12:i:1,2,且能够稳定遗传缺失后的sse K1基因,生长速度及生化特性没有发生明显改变;但小鼠毒力试验表明,sl1344Δsse K1缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为6.63×108 CFU,毒力较亲本株sl1344下降至0.048%;免疫保护效力实验显示,小鼠免疫后第14天血清抗体Ig G含量达到最高,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率。以上研究结果表明,sl1344株sse K1基因缺失株构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为研究sse K1基因的致病机制及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 重组自杀性质粒 sseK1基因生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sseK2基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第4期39卷 256-263页

作者：张晓洁张春杰程相朝李银聚杨亚东郁川廖成水贾艳艳杜付玉河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室471023 洛阳职业技术学院微生物与食品检验实验室 471003

目的检测sseK2基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供新思路。方法首先通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除1 047 bp sseK2基因并成功构建缺失株及其回复株,进而检测... 详细信息

目的检测sseK2基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供新思路。方法首先通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除1 047 bp sseK2基因并成功构建缺失株及其回复株,进而检测其生物学和免疫学特性。结果PCR、双酶切及测序结果分析,证实构建了sl1344△sseK2缺失株及其回复株。生物学特性研究表明,缺失株sl1344△sseK2保留了亲本株sl1344的血清型1,4,[5],12:i:1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK2基因,生化特性和生长速度并未发生明显改变,但与亲本株sl1344相比,其毒力发生明显改变。缺失株sl1344△sseK2口服感染6周龄BALB/c小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD50)为3.44×10^8菌落形成单位(colony-forming units,CFU),毒力较亲本株sl1344降低了1 620倍。免疫保护效力试验显示,缺失株免疫17 d后对鼠伤寒沙门菌野生株攻毒小鼠的保护率为62.5%,小鼠免疫14 d后血清抗体IgG达到最高。回复株与亲本株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平。结论成功构建了sl1344△sseK2基因缺失株,其遗传稳定,毒力明显降低,且具有较好的免疫原性,推测sseK2对sl1344的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及评估其作为用于减毒活疫苗的候选株提供参考。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 重组自杀性质粒缺失株sl1344△sseK2 回复株sl1344C-△sseK2 生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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中国免疫学杂志 2019年第19期35卷 2375-2380页

作者：杜付玉廖成水(指导) 郁川张春杰(指导) 程相朝杨亚东河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023 洛阳职业技术学院洛阳471003

目的:检测sseK3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。方法:通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sseK 3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物... 详细信息

目的:检测sseK3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。方法:通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sseK 3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物学和免疫学特性。结果:PCR、双酶切及测序结果证实成功构建了sseK3缺失株及其回复菌株。生物学特性研究表明,sseK3缺失菌株和亲本株sl1344血清型均为1,4,5,12:i:1,2,生化特性和生长速度无明显差异,且sseK3缺失株能够稳定遗传;sseK3缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD 50为2.96×10^8 CFU,与亲本菌株sl1344相比,sseK3缺失株的LD 50值升高约1 035倍,毒力显著下降;免疫保护效力实验显示:sseK3缺失株免疫后第17天保护率为66.7%;在免疫小鼠后的第14天血清IgG达到最高水平;回复菌株与亲本亲株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平。结论:成功构建了鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株,可稳定遗传,毒力显著降低,具有良好的免疫原性,推测sseK3对鼠伤寒沙门菌的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 sseK 3基因缺失株回复菌株生物学特性

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鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因缺失株的构建及其生物学特性的研究

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中国兽医科学 2019年第5期49卷 589-597页

作者：张梦珂廖成水毛福超王晓利张春杰李银聚吴庭才程相朝河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023 河南科技大学医学院河南洛阳471023 洛阳职业技术学院河南洛阳471099

为了探究5'-nucleotidase基因的功能及其在鼠伤寒沙门菌感染中的作用,本研究首先构建缺失1 112 bp的5'-nucleotidase基因的重组自杀性质粒pR E 112Δ5'-nucleotidase,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选... 详细信息

为了探究5'-nucleotidase基因的功能及其在鼠伤寒沙门菌感染中的作用,本研究首先构建缺失1 112 bp的5'-nucleotidase基因的重组自杀性质粒pR E 112Δ5'-nucleotidase,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选出sl1344Δ5'-nucleotidase缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。PCR及测序结果表明,sl1344Δ5'-nucleotidase构建成功,且回复株sl1344CΔ5'-nucleotidase构建成功。进一步研究表明,缺失株sl1344Δ5'-nucleotidase保留了亲本菌株sl1344的血清型1,4,5,12∶i∶1,2,且能够稳定遗传缺失1 112 bp的5'-nucleotidase基因,生长速度没有发生明显改变。但是,缺失株sl1344Δ5'-nucleotidase口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为4.30×10~7CF U,毒力降低至亲本株sl1344的1.96%。免疫保护率试验结果显示,对6周龄BALB/c小鼠免疫后第17天,鼠伤寒沙门菌野生株攻毒有50%的保护率。缺失株免疫小鼠后第21天,血清抗体IgG水平达到最高。回复菌株与亲本亲株之间生物学特性无显著性差异,基本恢复到野生型水平。上述结果表明,sl1344Δ5'-nucleotidase基因缺失株构建成功,遗传稳定,毒力明显降低,且具有较好的免疫原性,为研究鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因与其致病力之间的关系提供了依据,并为研究它在鼠伤寒沙门菌感染中的作用奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 5’-nucleotidase基因缺失株回复株生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株的构建及其生物学特性研究

鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会

作者：杜付玉廖成水郁川张春杰程相朝河南科技大学动物科技学院/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳职业技术学院

通过检测sse K3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sse K3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物学和... 详细信息

通过检测sse K3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sse K3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物学和免疫学特性。结果显示,PCR、双酶切及测序结果证实成功构建了sse K3缺失株及其回复菌株。生物学特性研究表明,sse K3缺失菌株和亲本株sl1344血清型均为1, 4,[5], 12:i:1, 2,生化特性和生长速度无明显差异,且sse K3缺失株能够稳定遗传;然而sse K3缺失株的生物被膜形成能力明显下降;粘附和侵入结果显示,sse K3缺失株的粘附和侵入能力较亲本菌株无明显变化,但在巨噬细胞内的增殖能力发生了显著下降。此外,sse K3缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为2.96×108CFU,毒力较亲本株sl1344降低约1035倍;免疫保护效力实验显示:sse K3缺失株免疫后第17天保护率为66.7%;在免疫小鼠后的第14天血清Ig G达到最高水平;回复菌株与亲本亲株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平。本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌sse K3基因缺失株,可稳定遗传,毒力显著降低,具有良好的免疫原性,推测sse K3对鼠伤寒沙门菌的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及评估其作为用于减毒活疫苗的候选株奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌sl1344 sseK3基因缺失株回复菌株生物学特性

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