检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：罗敏华杨波周月鹏姚永璇梅梦杰伍锦鹏曾文波 430207 湖北省武汉市江夏区郑店金龙大街262号

本发明提供了一种基因工程改造的鼠巨细胞病毒(MCMV)‑K181毒株衍生的工具病毒，包括一个示踪因子表达盒，一个BAC骨架，其中所述BAC骨架和示踪因子表达盒一起插入到MCMV‑K181毒株基因组的M06开放阅读框和M07开放阅读框之间；所述示踪因... 详细信息

标准号: CN115806945A

本发明提供了一种基因工程改造的鼠巨细胞病毒(MCMV)‑K181毒株衍生的工具病毒，包括一个示踪因子表达盒，一个BAC骨架，其中所述BAC骨架和示踪因子表达盒一起插入到MCMV‑K181毒株基因组的M06开放阅读框和M07开放阅读框之间；所述示踪因子表达盒包括三个示踪因子编码序列，从5’到3’依次为第一荧光蛋白、第一连接子、第二荧光蛋白、第二连接子、荧光素酶、PolyA。

关键词：示踪因子表达开放阅读框荧光蛋白连接子毒株基因工程改造鼠巨细胞病毒因子编码序列荧光素酶基因组病毒

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鼠巨细胞病毒感染C57BL/6小鼠急性肝炎动物模型的建立与鉴定

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温州医科大学学报 2022年第5期52卷 345-351,357页

作者：阮宇菲刘琦吴博许智勇陈珂蒋敏之张俊玲余金生陈益平温州医科大学附属第二医院育英儿童医院儿童感染科浙江温州325027 安徽医科大学基础医学院安徽合肥230000

目的:建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染C57BL/6小鼠急性肝炎模型并对其感染特点进行分析及鉴定。方法:将24只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组(n=12)及病毒感染组(n=12),病毒感染组腹腔注射1.0×10^(6) PFU(200μL)MCMV悬液,阴性对照组注... 详细信息

目的:建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染C57BL/6小鼠急性肝炎模型并对其感染特点进行分析及鉴定。方法:将24只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组(n=12)及病毒感染组(n=12),病毒感染组腹腔注射1.0×10^(6) PFU(200μL)MCMV悬液,阴性对照组注射等体积小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)悬液。于感染后第3天和第7天取外周血分离血清检测谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)。同时进行肝组织病毒分离、组织病理学及MCMV IE和M55基因、细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的检测。结果:病毒感染组肝组织匀浆病毒分离均为阳性,肝炎发生率为100%。在感染后第3天即发生肝炎病理改变,病毒感染组血清ALT及AST较阴性对照组明显升高(P<0.01);病毒感染组肝脏HE染色第3天可见局灶性炎性细胞浸润及肝脏点灶状坏死,持续至第7天,Ishak评分较阴性对照组明显升高(P<0.01);在感染后第3天病毒感染组肝组织内可检测到MCMV IE及M55基因,且在感染后第7天仍可测得IE基因;感染后第3天及第7天病毒感染组炎性细胞因子IL-6、TNF-α及IL-1βmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:成功建立MCMV感染C57BL/6小鼠急性动物肝炎模型,其感染表现主要集中在急性感染前期。

关键词：鼠巨细胞病毒小鼠,近交C57BL 病毒性肝炎模型,动物

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鼠巨细胞病毒感染裸鼠肝脏损伤模型的建立

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现代生物医学进展 2022年第4期22卷 621-625页

作者：宋孙莉柴竹洁顾绍庆方圆詹纪春江苏大学医学院江苏镇江212013 江苏大学附属人民医院儿科江苏镇江212002

目的:建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染BALB/c裸鼠肝脏损伤的模型。方法:健康SPF级BALB/c裸鼠10只随机分为实验组和对照组,每组5只。实验组小鼠每只经腹腔注射接种250μL MCMV病毒悬液,对照组小鼠每只腹腔接种250μL DMEM培养液,于接种后第7... 详细信息

目的:建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染BALB/c裸鼠肝脏损伤的模型。方法:健康SPF级BALB/c裸鼠10只随机分为实验组和对照组,每组5只。实验组小鼠每只经腹腔注射接种250μL MCMV病毒悬液,对照组小鼠每只腹腔接种250μL DMEM培养液,于接种后第7天处死,无菌分离其肝脏,通过测定肝组织谷丙转氨酶(ALT)、实时荧光定量PCR检测MCMV DNA拷贝数、苏木精-伊红(HE)染色等方法,观察裸鼠肝脏组织的受损情况。结果:所有实验组的裸鼠均出现了不同程度的腹水;实验组裸鼠测定的肝组织ALT值较对照组明显上升(P<0.05);实时荧光定量PCR检测出实验组裸鼠肝脏MCMV DNA呈阳性;实验组肝脏病理切片HE染色可见大量炎症细胞浸润,肝细胞嗜酸性变,可见不规则包涵体,而对照组正常。结论:经腹腔注射250μL MCMV病毒悬液7天后成功构建了裸鼠肝脏损伤的模型,为探究人巨细胞病毒(HCMV)的发病机制以及抗病毒新药和疫苗的研发提供了有利条件。

关键词：鼠巨细胞病毒肝脏损伤 BALB/c裸鼠模型

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鼠巨细胞病毒感染裸鼠肝脏损伤模型的建立

鼠巨细胞病毒感染裸鼠肝脏损伤模型的建立

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作者：宋孙莉江苏大学

学位级别：硕士

目的巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）是一种疱疹病毒,在世界上感染非常普遍,本研究是为了建立鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染BALB/c裸鼠肝脏损伤的模型,为人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染免疫缺... 详细信息

目的巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）是一种疱疹病毒,在世界上感染非常普遍,本研究是为了建立鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染BALB/c裸鼠肝脏损伤的模型,为人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染免疫缺陷患者所致的肝损伤提供研究平台。方法将10只雄性4周龄BALB/c裸鼠随机分为2组,每组5只。实验组裸鼠用半数细胞感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)为10-6.5/0.1 m L的病毒悬液250μL经腹腔注射;对照组裸鼠腹腔接种等量DMEM培养液。每日观察记录裸鼠行为表现及进食情况,第7天麻醉后处死所有裸鼠,无菌分离其肝脏,通过测定肝组织谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、荧光定量PCR检测MCMV DNA拷贝数、苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE staining）等方法,观察裸鼠肝脏组织的损伤程度。采用独立t检验比较两组间的进食量和ALT。结果实验组裸鼠的反应变得迟钝、呼吸频率加快,而对照组裸鼠表现无异常;实验组裸鼠进食量明显少于对照组（t=-3.738,P=0.003）,喝水量也明显少于对照组（t=-4.853,P=0.000）;实验组裸鼠肝脏受损率为100%,所有实验组的裸鼠均出现了不同程度的腹水;测定的肝脏ALT值较对照组有明显上升（t=5.361,P=0.001）;实验组实时荧光定量PCR检测MCMV DNA为阳性,而对照组结果为阴性;实验组裸鼠肝脏病理切片HE染色法可见大量炎症细胞浸润,肝细胞嗜酸性变,可见不规则的病毒包涵体,而对照组肝组织病理切片HE染色显示结构正常。结论经腹腔注射250μL MCMV病毒悬液7天后成功构建了BALB/c裸鼠肝脏损伤的模型。

关键词：鼠巨细胞病毒肝脏损害 BALB/c裸鼠模型

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巨细胞病毒感染诱导miR-1929-3p下调在小鼠血管重塑中的作用和机制研究

巨细胞病毒感染诱导miR-1929-3p下调在小鼠血管重塑中的作用和机...

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作者：周维石河子大学

学位级别：硕士

目的:探究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染所致miR-1929-3p差异表达在小鼠血管平滑肌细胞增殖重塑中的作用和机制。方法:(1)采用MCMV Smith株腹腔感染小鼠血管平滑肌细胞(MOVAS),实验分为对照组(Control组)及MCMV感染组(MCMV组:感染复数MOI分别... 详细信息

目的:探究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染所致miR-1929-3p差异表达在小鼠血管平滑肌细胞增殖重塑中的作用和机制。方法:(1)采用MCMV Smith株腹腔感染小鼠血管平滑肌细胞(MOVAS),实验分为对照组(Control组)及MCMV感染组(MCMV组:感染复数MOI分别为0,0.001,0.01,0.1,1,感染时间为8h、12h、24h、48h)。采用PCR技术对MOVAS进行MCMV-DNA检测,从而建立MCMV感染小鼠的血管平滑肌细胞模型。(2)将20nM的miR-1929-3p模拟剂(miR-1929-3pmimic)和30nM的抑制剂(miR-1929-3p inhibitor)转染 24h,再次将小鼠分为六组:Control 组、MCMV 组、MCMV-+ mimic-NC组、MCMV+miR-1929-3p mimic 组、MCMV+inhibitor-NC 组和 MCMV+miR-1929-3p inhibitor 组,建立miR-1929-3p干预模型。(3)采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法验证差异表达miR-1929-3p及靶基因内皮素A型受体(ETAR)mRNA相对表达量水平。(4)通过转染ETAR过表达腺病毒载体,转染时间为48h和MOI为1000,再次分为六组:Control组、MCMV组、MCMV+mimic-NC组、MCMV+mimic 组、MCMV+ mimic+Ad-NC 组和 MCMV+ mimic+Ad-ETAR 组。(5)加入 10nM ETAR抑制剂(BQ123)或100nM的NLRP3炎症小体抑制剂(MCC950)后,进行分组:Control组、MCMV组、MCMV+BQ123 组、MCMV+inhibitor-NC、MCMV+ inhibitor 组和 MCMV+ inhibitor+MCC950组。(6)EdU检测用来检测miR-1929-3p对小鼠血管平滑肌细胞增殖的影响;细胞流式检测对细胞凋亡的影响。(7)ELISA检测小鼠血管平滑肌细胞培养基上清液中IL-18、IL-1β的浓度。(8)运用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定miR-1929-3p对血管增殖重塑蛋白(a-SMA、PCNA、OPN)及NLRP3炎症小体激活的相关蛋白(NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18)及ETAR的表达影响。(9)实验数据进行统计学处理,统计方式采用SPSS 20.0统计学软件。结果:(1)模型建立:将小鼠血管平滑肌细胞用MCMV感染,检测到MCMV DNA表达,说明MCMV感染模型成功建立。(2)MCMV不同感染复数和感染时间CCK8检测细胞增殖率:结果显示:在MOI=0.01、48h时小鼠血管平滑肌细胞增殖最明显。(3)MCMV 对miR-1929-3p和靶基因ETAR的调控:qRT-PCR结果显示:与Control组相比,MCMV组的miR-1929-3p的表达下降(P<0.05);ETAR mRNA 表达明显升高(P<0.05);MCMV+mimic 组与 MCMV+mimic NC 组相比,miR-1929-3p 表达量明显升高(P<0.001),ETAR 的 mRNA 表达下降(P<0.05);MCMV+inhibitor 组的 miR-1929-3p的表达与MCMV+inhibitor NC组相比无明显差异(P>0.05),而ETAR mRNA水平明显升高(P<0.05)。Western blot 结果显示:MCMV组与 Control组相比,ETAR蛋白表达增多(P<0.05);MCMV+mimic 组与 MCMV+ mimic NC 组相比,ETAR 明显减少(P<0.05);与 MCMV+ inhibitor NC 组相比,MCMV+inhibitor组的ETAR表达增高(P<0.05)。(4)MCMV诱导miR-1929-3下调对细胞增殖重塑作用:免疫荧光和Western blot结果显示,与Control组相比,MCMV组的EdU的阳性率、OPN和PCNA的蛋白表达明显增多(P<0.05),α-SMA蛋白表达降低(P<0.05);与MCMV+mimic NC组相比,MCMV+miR-1929-3p mimic组的EdU的阳性率和OPN和PCNA的蛋白减少(P<0.05),α-SMA 蛋白增多(P<0.05);与 MCMV+inhibitor NC 组相比,MCMV+miR-1929-3p inhibitor 组的EdU的阳性率和OPN和PCNA蛋白含量升高(P<0.05),α-SMA蛋白含量下降(P<0.05)。(5)MCMV感染诱导miR-1929-3下调对细胞凋亡作用:流式细胞检测和Western blot结果显示,MCM

关键词：鼠巨细胞病毒原发性高血压非编码RNA 内皮素A型受体血管重塑炎症小体

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巨细胞病毒感染C57BL/6小鼠诱导NK细胞免疫应答的模型研究

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国际免疫学杂志 2021年第1期44卷 7-14页

作者：吴舒婷彭虹艳方芳王莉莉李梨平湖南省儿童医院儿科医学研究所长沙410007 湖南师范大学生命科学学院长沙410081

目的研究小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染C57BL/6小鼠诱导自然杀伤(natural killer,NK)细胞免疫应答的最佳剂量和最佳时间。方法分别根据剂量和时间效应进行分组,剂量效应:无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级... 详细信息

目的研究小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染C57BL/6小鼠诱导自然杀伤(natural killer,NK)细胞免疫应答的最佳剂量和最佳时间。方法分别根据剂量和时间效应进行分组,剂量效应:无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级8周龄C57BL/6雌鼠15只,根据MCMV滴度分为四组,未感染的0个蚀斑形成单位(plaque forming unit,PFU)组(3只)、2.5×10^(4)PFU组(4只)、5.0×10^(4)PFU组(4只)和10.0×10^(4)PFU组(4只),随后常规饲养7天;时间效应:将8周龄C57BL/6雌鼠14只随机分为四组,分别为0天组(4只)、3天组(4只)、7天组(4只)、14天组(2只),建模0天腹腔注射5.0×10^(4)PFU的MCMV感染各组小鼠。在感染后对应天数处死各组小鼠,取小鼠脾脏制成单细胞悬液,并用流式细胞术分析各种组NK细胞比例、Ly49H及颗粒酶B(granzyme B,GZMB)、NK细胞溶酶体相关膜蛋白-1(CD107a)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的表达。结果 MCMV感染7天后,与0PFU组相比,2.5×10^(4)PFU组、5.0×10^(4)PFU组和10.0×10^(4)PFU组脾脏NK细胞占淋巴细胞的比例明显下降{(1.90±0.32)%比[(0.91±0.14)%,(0.62±0.16)%,(0.85±0.26)%],F=21.271,P<0.05},CD27^(+)CD11b^(+)NK细胞比例显著下降{(22.40±4.55)%比[(13.20±1.29)%,(10.78±1.21)%,(11.38±1.76)%],F=17.272,P<0.05},CD11b^(+)NK细胞比例显著增加{(59.87±5.33)%比[(71.08±1.82)%,(74.25±1.95)%,(70.90±2.49)%],F=14.641,P<0.05)},CD43^(+)KLRG1^(+)NK细胞占NK细胞的比例增加{(39.40±5.73)%比[(77.00±0.67)%,( 81.23±2.21)%,( 76.63±7.36)%],F=55.282,P<0.05)},Ly49H^(+)NK细胞亚群数量显著增加{(42.07±1.21)%比[(63.50±1.30)%,(63.58±3.71)%,(61.68±4.84)%],F=32.273,P<0.05)},组间差异具有统计学意义。在NK细胞功能方面,MCMV感染7天后,与0 PFU组相比,2.5×10^(4)PFU组、5.0×10^(4)PFU组和10.0×10^(4)PFU GZMB的表达显著增加{(287.00±30.79)%比[(384.25±63.91)%,(529.75±66.08)%,(466.50±83.38)%],F=8.730,P<0.05},IFN-γ分泌减少{(36.00±5.33)%比[(4.88±3.35)%,(3.03±1.56)%,(3.61±2.18)%],F=87.663,P<0.05}。时间效应的比较结果显示,MCMV感染3天后,NK细胞CD107a和颗粒酶B表达与0天相比显著升高[(22.98±4.58)%比(6.32±0.75)%,(5969.25±1159.86)%比(788.50±88.17)%,F值分别为41.072和67.448,P值均<0.05],差异具有统计学意义。结论本研究表明,MCMV感染C57BL/6小鼠模型可选择的最佳感染剂量为5×10^(4)PFU,最佳建模时间为感染后3天。

关键词：自然杀伤细胞鼠巨细胞病毒 C57BL/6小鼠

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小鼠巨细胞病毒核酸检测方法

小鼠巨细胞病毒核酸检测方法

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作者：吕亚丽刘丽宏万子睿安卓玲刘河贾阳杰宫丽丽玄玲玲韩菲菲 100020 北京市朝阳区工体南路8号

本发明公开了一种小鼠巨细胞病毒核酸检测方法，包括：S1、标准质粒的构建；S2、检测标准曲线的构建；S3、待检测样提取获得待检测DNA产物，以待检测DNA产物作为模板进行PCR扩增，获得待检测DNA基因引物扩增产物，待检测DNA基因引物扩... 详细信息

标准号: CN110684868A

本发明公开了一种小鼠巨细胞病毒核酸检测方法，包括：S1、标准质粒的构建；S2、检测标准曲线的构建；S3、待检测样提取获得待检测DNA产物，以待检测DNA产物作为模板进行PCR扩增，获得待检测DNA基因引物扩增产物，待检测DNA基因引物扩增产物进行荧光定量PCR，获得C_T值，并依据标准曲线获得待检测DNA基因引物扩增产物浓度，以定性及定量检测待检测样中的小数巨细胞病毒。本发明具有定性检测小鼠巨细胞病毒的同时，实现定量检测细胞、小鼠全血、血浆、尿液、脏器中小鼠巨细胞病毒核酸的有益效果。

关键词：检测基因引物扩增产物小鼠巨细胞病毒标准曲线检测样构建定量检测细胞鼠巨细胞病毒荧光定量PCR 巨细胞病毒标准质粒定量检测定性检测核酸检测小数核酸尿液全血小鼠血浆脏器定性

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AIM2炎性体识别胞浆鼠巨细胞病毒DNA的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第1期32卷 31-35页

作者：李旭芳刘玲玲舒赛男刘兴楼李革方峰华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科武汉430030

目的观察AIM2（absent in melanoma2）在感染早期识别胞浆小鼠巨细胞病毒（MCMV）DNA的变化状况。方法建立MCMV全身播散型感染模型，接种MCMVSmith株后第1、3、5和7天各处死3只小鼠；同时设模拟感染小鼠作为正常对照。Western blot检测... 详细信息

目的观察AIM2（absent in melanoma2）在感染早期识别胞浆小鼠巨细胞病毒（MCMV）DNA的变化状况。方法建立MCMV全身播散型感染模型，接种MCMVSmith株后第1、3、5和7天各处死3只小鼠；同时设模拟感染小鼠作为正常对照。Western blot检测脾脏巨噬细胞中AIM2、衔接子凋亡相关点样蛋白（ASC）和caspase-1蛋白的表达状况；同时应用ELISA法检测血清中IL-1β和IL-18的水平；空斑法测定感染小鼠唾液腺感染性病毒滴度。结果MCMV感染后第3、5、7天，小鼠唾液腺组织中感染性病毒滴度逐渐增加；MCMV感染鼠脾脏巨噬细胞中AIM2、ASC和caspase-1蛋白的表达呈现一致的变化，与模拟感染对照鼠比较，AIM2、ASC和caspase-1蛋白相对吸光值在感染后第1天开始升高（P〉0．05），第3天明显升高并达峰值[分别为（1．121±0．243）vs（0．240±0．046），（1．318±0．333）VS（0．248±0．090），（1．085±0．243）VS（0．247±0．064）；P〈0．01]，其后接近正常；MCMV感染鼠血清IL-1β和IL-18水平在感染后第3天也明显高于模拟感染对照鼠[分别为（112．72±5．20）pg／ml VS（47．86±4．35）pg／ml，（42．74±4．23）pg／ml VS（22．60±2．82）pg／ml；P〈0．01]，其后均逐渐下降接近正常。结论MCMC感染早期巨噬细胞通过AIM2炎性体识别胞浆MCMVDNA，可能成为CMV感染及感染后所引起的疾病的治疗靶点。

关键词： AIM2炎性体鼠巨细胞病毒 IL-1β IL-18

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小鼠巨细胞病毒感染的免疫应答和致病机制研究 1）小鼠播散性巨细胞病毒感染后肺免疫细胞CD11c表达模式 2）小鼠母体巨细胞病毒感染对胎盘和胎脑血清素代谢通路的影响

小鼠巨细胞病毒感染的免疫应答和致病机制研究 1）小鼠播散性巨细...

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作者：廖毅华中科技大学

学位级别：博士

【研究背景】人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是一种线状双链DNA病毒,属疱疹病毒β亚科,在人群中感染率高。在健康人群,通常呈无症状或潜伏感染,但在免疫缺陷或抑制个体则易引发HCMV相关疾病。HCMV具有独特的与宿主相互作... 详细信息

【研究背景】人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是一种线状双链DNA病毒,属疱疹病毒β亚科,在人群中感染率高。在健康人群,通常呈无症状或潜伏感染,但在免疫缺陷或抑制个体则易引发HCMV相关疾病。HCMV具有独特的与宿主相互作用模式,大量研究表明,多种类型免疫细胞参与宿主抗HCMV免疫应答反应,例如树突状细胞（dendritic cells,DCs）、自然杀伤细胞（natural killer,NK）和T细胞等,共同参与限制病毒原发感染与抑制潜伏病毒活化。CD11c,即整合素蛋白αx,可与整合素β2链蛋白（CD18）形成异二聚体,主要参与细胞黏附、迁移和吞噬等过程。因CD11c高表达于DCs表面,常被用作DCs的特异性标志。但NK细胞、T细胞、单核细胞和巨噬细胞等多种免疫相关细胞也有不同程度的CD11c表达。近年来的多项研究发现,CD11c不仅能作为细胞识别标志,还可能与各种免疫细胞的活化和效应功能相关。由此推测,在小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染模型中,各种免疫细胞具有独特的CD11c表达模式,且这种表达模式的差异可能与MCMV对BALB/c（易感和易慢性化）和C57BL/6（非易感和急性自限）鼠系的致病性差异和不同感染结局之间存在一定相关性。HCMV还是引起先天性感染的常见病毒,影响儿童的神经发育和远期健康。而先天性HCMV感染多是源于母体孕期原发感染或潜伏感染活化。近年来众多流行病学证据表明,母体孕期感染与子代神经精神障碍性疾病例如自闭症和精神分裂症之间存在着明确的关联。其中,孕期HCMV感染就是子代自闭症的高危因素之一。进一步的动物学研究证明,孕期感染所致的母体免疫激活（maternal immune activation,mIA）状态是导致子代精神行为异常发生的主要原因。而mIA是通过何种方式影响子代神经精神发育,其机制目前还尚未明确。血清素（serotinin）或称5羟色胺（5-HT）,作为一种营养生长因子,在早期发育阶段能够参与多种与神经系统发育相关的重要过程。而胎盘作为母胎交界面重要的物质交换和免疫脏器,是早期胎儿前脑5-HT的主要提供者。因此,任何改变胎盘5-HT合成和代谢的母体因素都有可能间接的影响子代神经精神发育。且已有动物研究证实,病毒模拟感染所致的母体炎症能够增强胎盘向胎脑的5-HT输送,从而影响胎儿前脑的5-HT能神经元分布。可以推测,孕期MCMV感染同样可以导致母体免疫激活,并引起胎盘和胎脑5-HT合成和代谢的异常。同时,由于小鼠与人胎盘结构存在一定的差异,MCMV无法通过小鼠胎盘感染胚胎,从而天然的排除MCMV感染对子代胎脑的直接影响,可以作为研究母体免疫激活对子代影响更为有利的模型。【目的】1.利用小鼠播散性MCMV感染模型,测定病毒感染后肺组织细胞CD11c和特异性表面标记的表达,以分析各种免疫细胞独特的CD11c表达模式;进一步对比观察BALB/c和C57BL/6两种鼠系的差异性,以寻找CD11c表达模式与免疫细胞功能以及MCMV慢性化之间的潜在关系。2.建立孕前和孕期MCMV感染小鼠模型,评定胎盘和胎脑重量改变,并测定胎盘母体免疫激活相关细胞因子基因转录水平,以明确MCMV感染所致母体免疫激活与子代神经精神异常的潜在相关性;测定胎盘和胎脑血清素合成和代谢通路各关键酶,并观察胎盘组织血清素表达及其改变,以明确MCMV相关mIA对胎盘和胎脑血清素代谢通路的影响。【方法】第一部分小鼠播散性巨细胞病毒感染后肺免疫细胞CD11c表达模式1.小鼠播散性巨细胞病毒感染模型的建立:雌性BALB/c小鼠,4.5周龄,腹腔接种MCMV Smith毒株（5×10～3）PFU,建立播散性感染模型,同时设立正常对照组;同步设置C57BL/6小鼠MCMV感染组及其正常对照组;2.收获MCMV感染后1、3、5、7天各组小鼠肺组织,制作单细胞悬液,抗体标记CD11c和其他特异性细胞表面分子,流式细胞学检测法测定各组CD11c阳性表达细胞;同时收集各组小鼠外周血和脾脏单个细胞悬液,分析自然杀伤细胞（NK）和T细胞表面的CD11c表达模式。第二部分小鼠母体巨细胞病毒感染对胎盘和胎脑血清素代谢通路的影响1.建立BALB/c小鼠孕期急性巨细胞病毒感染模型（acute MCMV infection druing pregnancy,a-MCMV）,同时设立孕前巨细胞病毒感染组（pre-pregnancy MCMV infection,p-MCMV）、LPS对照组（LPS）和正常对照组。其中,LPS对照组分设高中低三个剂量亚组,分别注射50μg/kg、25μg/kg和1.5μg/kg的LPS;2.自孕栓检出日为胚胎日龄（embryonic day,E）第0.

关键词：鼠巨细胞病毒 CD11c CD8+T细胞 NK细胞 B220+CD11cintNK细胞 NKp46 母体免疫激活血清素/5-羟色胺 TPH DDC SERT

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MCMV感染裸鼠重要脏器差异性分析及更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗婴幼儿CMV肝炎Meta分析

MCMV感染裸鼠重要脏器差异性分析及更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗婴...

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作者：柴竹洁江苏大学

学位级别：硕士

第一部分MCMV感染裸鼠重要脏器差异性分析实验目的鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染裸鼠重要脏器后分析不同脏器的病毒载量及其损害的病理特征,为免疫缺陷儿童感染人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的临床工... 详细信息

第一部分MCMV感染裸鼠重要脏器差异性分析实验目的鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染裸鼠重要脏器后分析不同脏器的病毒载量及其损害的病理特征,为免疫缺陷儿童感染人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的临床工作及未来研究提供基础依据。实验方法分别予A、B两组裸鼠腹腔注射0.25 m L/只（5×103 PFU）MCMV和0.25 m L/只细胞维持液,并隔离喂养且观察记录7 d后处死两组裸鼠,严格无菌提取其心脏、肝脏、脾脏、肺脏及肾脏;一份用于提取MCMV-DNA,进行荧光定量PCR检测;一份用10%多聚甲醛固定,石蜡包埋送病理。实验结果荧光定量PCR仪提示:MCMV感染裸鼠7 d后其心脏、肝脏、脾脏、肺脏及肾脏中均有MCMV-DNA表达,提示这些重要脏器均被MCMV感染;其中,相比于其它重要脏器肺脏中MCMV-DNA的表达载量最高,心脏次之,相继是肾脏、脾脏及肝脏。病理切片结果显示肝脏及脾脏组织已发生形态学改变,且肝脏及脾脏中可见病毒核内包涵体及“猫头鹰”眼征,同时组织间质可见炎症细胞;其余脏器肺脏、心脏及肾脏未见形态学改变,仅间质可见少许炎症细胞。实验结论通过予裸鼠腹腔注射本实验剂量及毒力的MCMV 7 d后,肝脏细胞和脾脏细胞可能更易在MCMV感染后受到损伤。本研究未来将扩展研究范围,检测更多时间点心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏以及脑组织、视网膜等组织中MCMV-DNA的表达量及病理学证据,以获得更充分的数据。第二部分更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗婴幼儿CMV肝炎Meta分析实验目的通过系统评价比较分析单用更昔洛韦及更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗婴幼儿巨细胞病毒性肝炎的临床疗效。实验方法使用计算机依次检索CNKI、VIP、Pub Med和万方这些数据库。检索时间是从各数据库建库以来至2020年6月30日。检索以基础保肝、退黄等和或单用更昔洛韦治疗为对照组,以在对照组基础上加用丙种球蛋白治疗为治疗组,对检索出的文献首先通过Jadad量表进行质量分析评价。通过质量评价的文献再用Rev Man5.4统计软件来进行最终数据分析。实验结果纳入文献质量评估均为低质量。总共纳入9篇文献,共有患者626例,包括治疗组327例,对照组299例。Meta分析结果显示:***水平:MD=-12.58,95%CI（-15.90,-9.25）,P＜0.00001;DBIL水平:MD=-14.36,95%CI（-19.28,-9.43）,P＜0.00001;ALT水平:MD=-25.70,95%CI（-41.86,-9.54）,P=0.002。2.总有效率:OR=5.93,95%CI（3.36,10.47）,P＜0.00001;血CMV-Ig M转阴率:OR=7.08,95%CI（1.74,28.80）,P=0.006;血/尿CMV-DNA转阴率:OR=7.08,95%CI（1.74,28.80）,P=0.006。实验结论对于改善婴幼儿巨细胞病毒感染性肝炎的实验室指标,明显的更昔洛韦联合丙种球蛋白优于单用更昔洛韦,且统计的文献中更昔洛韦联合丙种球蛋白不良反应发生率整体低于单用更昔洛韦。但考虑到纳入文献均为低质量文献,仍需更高质量的文献来确认结果。此外,不良反应也需采用标准化检测或自我报告的形式,以更好的了解发生的相关因素。

关键词：巨细胞病毒巨细胞病毒感染鼠巨细胞病毒裸鼠免疫缺陷儿童更昔洛韦联合丙种球蛋白巨细胞病毒性肝炎更昔洛韦系统评价

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