检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2011年第3期31卷 334-337页

作者：李瑶瑶刁有祥吴海洋山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定最佳抗原包被质量浓度为11.85mg/L,血清样品稀释... 详细信息

提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定最佳抗原包被质量浓度为11.85mg/L,血清样品稀释倍数为1:20,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1:1000,抗原抗体最佳结合时间为1h,血清与二抗最适反应时间为45min。试验结果确定的判定标准为:样品D_(490nm)≥0.639判定为阳性,D_(490nm)≤0.350判定为阴性,介于两者之间的为可疑。试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为11.7%(24/205)。

关键词：鼻气管鸟杆菌外膜蛋白间接ELISA 检测

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鼻气管鸟杆菌病的研究进展

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中国预防兽医学报 2002年第3期24卷 232-234页

作者：马保华毕英佐吕平曹永长南海出入境检验检疫局广东南海528200 华南农业大学动物科学系

鼻气管鸟杆菌病是由鼻气管鸟杆菌（Qrnithobacterium rhinotrotracheale, ORT）引起的禽呼吸道细菌病。ORT主要引起火鸡呼吸系统发病，常发生坏死性肺炎、气囊炎、支气管炎、生长抑制，也常合并、继发和加重病毒如NDV、细菌如博代杆菌... 详细信息

鼻气管鸟杆菌病是由鼻气管鸟杆菌（Qrnithobacterium rhinotrotracheale, ORT）引起的禽呼吸道细菌病。ORT主要引起火鸡呼吸系统发病，常发生坏死性肺炎、气囊炎、支气管炎、生长抑制，也常合并、继发和加重病毒如NDV、细菌如博代杆菌和真菌性感染，从而引起急性死亡，危害很大，是一种值得重视的新病。

关键词：鼻气管鸟杆菌鸡吸收道细菌病病原学症状病变

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鼻气管鸟杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 121-124页

作者：李富祥段志华赵文华信爱国杨仕标李华春云南省畜牧兽医科学院云南昆明650224 保山市动物疾病预防控制中心云南保山678000

为建立鼻气管鸟杆菌(ORT)TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据ORT 16S rRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件、特异性、敏感性、重复性试验和临床样品的检测,建立了ORT TaqMan荧光定量PCR检测方法。实验结... 详细信息

为建立鼻气管鸟杆菌(ORT)TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据ORT 16S rRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件、特异性、敏感性、重复性试验和临床样品的检测,建立了ORT TaqMan荧光定量PCR检测方法。实验结果表明:该方法具有良好特异性;最低可以检测到1.09×102拷贝/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%;23份临床样品检测的阳性率为48%。该方法可以用于鸡ORT感染的早期诊断及ORT的快速鉴定和定量分析。

关键词：鼻气管鸟杆菌 TaqMan荧光定量PCR 16S rRNA基因

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鼻气管鸟杆菌单克隆抗体的防治效果

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中国家禽 2019年第11期41卷 58-61页

作者：周花艳王安妮黄亚奇周淑婷姜勇魏若瑶徐建生扬州大学兽医学院江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

利用单克隆制备技术制备了两株稳定分泌针对鼻气管鸟杆菌外膜蛋白OMA87的单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并对其进行株特异性鉴定、效价鉴定、Western-blot、中和试验及防治效果鉴定,选择其中2株高沉淀效价及中和效价的单克隆抗体(2C4和5G9)... 详细信息

利用单克隆制备技术制备了两株稳定分泌针对鼻气管鸟杆菌外膜蛋白OMA87的单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并对其进行株特异性鉴定、效价鉴定、Western-blot、中和试验及防治效果鉴定,选择其中2株高沉淀效价及中和效价的单克隆抗体(2C4和5G9)进行了鼻气管鸟杆菌引起的呼吸道疾病防治试验,抗体治愈率分别达到95%和80%,具有良好的防治效果,在临床应用上具有较高的实用价值。

关键词：鼻气管鸟杆菌淋巴细胞杂交瘤技术单克隆抗体存活率

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鼻气管鸟杆菌生长曲线的测定

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中国家禽 2019年第8期41卷 53-55页

作者：王安妮周花艳魏若瑶姜勇刘林徐建生扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了解鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的生长规律,试验采用分光光度法测定鼻气管鸟杆菌不同生长时间的OD600nm值,并绘制鼻气管鸟杆菌生长曲线,再利用平板菌落计数法绘制生长曲线进一步验证,探究该菌在合适时间段内... 详细信息

为了解鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的生长规律,试验采用分光光度法测定鼻气管鸟杆菌不同生长时间的OD600nm值,并绘制鼻气管鸟杆菌生长曲线,再利用平板菌落计数法绘制生长曲线进一步验证,探究该菌在合适时间段内的吸光值OD600nm与平板菌落计数法测定的活菌数(cfu)的关系。结果显示:两种方法测定的生长曲线基本一致,2~16 h为对数生长期,16~20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期。对16 h鼻气管鸟杆菌吸光值与活菌数的关系进行探讨,成功建立回归方程:y=2.7591x-0.0897(R2=0.9973),为根据不同需要控制鼻气管鸟杆菌的生长提供了参考。

关键词：鼻气管鸟杆菌 OD600nm 生长曲线

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鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及致病性研究

鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及致病性研究

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作者：吴海洋山东农业大学

学位级别：硕士

鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale, ORT)是一种不运动、高度多形性、无芽孢的革兰氏阴性(G-)小杆菌。在血液琼脂上生长缓慢,5%-10%CO2条件下,于5%绵羊血液琼脂37℃恒温培养24h后可形成针尖大小、不溶血的灰白色圆形菌落。... 详细信息

鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale, ORT)是一种不运动、高度多形性、无芽孢的革兰氏阴性(G-)小杆菌。在血液琼脂上生长缓慢,5%-10%CO2条件下,于5%绵羊血液琼脂37℃恒温培养24h后可形成针尖大小、不溶血的灰白色圆形菌落。培养48h后可形成圆形、灰色到灰白色奶酪状的直径为1-3mm的小菌落,有时颜色稍变浅红并发出类似酪酸的气味。临床上以呼吸道症状、生长障碍、死亡率增加为特征,病理上以严重的单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎、气囊炎为特征。目前,该病在欧洲、美洲、南非的许多发达国家流行,并呈上升的趋势,严重危害养禽业的发展,因此,应引起人们的广泛注意。我国陈小玲等首次在国内分离到2株ORT,但是还未见从山东省分离到该菌的报道,本课题应用生化试验和PCR方法首次从山东省的商品肉鸡中分离到5株ORT,并通过不同途径感染雏鸡,探讨ORT对雏鸡的致病性和体内抗原的分布,为更好的控制本病提供理论依据。本试验采集山东省不同地区有呼吸道症状的病死鸡进行鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale ,ORT)的分离,根据培养特性、生化试验和玻片凝集试验对分离的菌株进行鉴定。应用PCR方法对分离菌株16S rRNA基因的一段保守序列进行扩增,应用琼脂扩散沉淀试验(AGP)对分离菌株的血清型进行鉴定,并对分离株进行药敏试验。试验共分离到5株ORT,所有分离菌株均能扩增到一段671bp的特异性片段,而阴性对照菌株的扩增结果为阴性;5株ORT分离菌株可分为3个血清型,其中血清A型3株,血清B型1株,血清D型1株;分离ORT菌株对羟氨苄青霉素、头孢曲松、丁胺卡那、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。选择1株血清A型ORT分离菌株分别通过气管、消化道和肌肉注射接种途径人工感染肉雏鸡和SPF雏鸡,观察试验鸡的发病情况及症状,称量各试验组和对照组的增重;利用建立的PCR检测方法对试验组和对照组排菌情况进行动态观察;于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸡只,采集心脏、肝脏、肺脏和气管等组织固定、切片、H.E.染色,观察各器官病理组织学变化,利用建立的IFA方法对ORT在雏鸡体内的分布进行研究,并进行血常规和血液生化指标检测。ORT接种后,引起雏鸡的呼吸困难、咳嗽等症状,增重明显降低;病理组织学变化以肝脏、心脏组织细胞变性、坏死,气管和肺脏广泛性出血和炎性细胞浸润为特征;IFA阳性信号主要分布于肺脏和气管;从感染后的第2d到第8d一直可持续排菌;HGB、WBC、RBC、BUN和AST发生显著变化。以1株ORT分离株免疫清洁级新西兰白兔,高免血清经辛酸-硫酸铵法和葡聚糖G200柱纯化,制得第一抗体。以FITC标记的山羊抗兔IgG为第二抗体,通过反应条件的优化,建立了ORT间接免疫荧光(IFA)快速诊断方法。试验结果表明:一抗的最佳稀释度为1:25,感作时间为4℃过夜,二抗的最佳工作浓度为1:200,感作时间为37℃1h,ORT特异性黄绿色荧光最清晰。应用建立的IFA对ORT人工感染雏鸡的各组织器官进行检测,气管、肺脏、肝脏、心脏均可检测到ORT,其中气管和肺脏检出率最高,表明这两个器官是ORT的主要靶器官。研究表明本法用于ORT的诊断具有简单、快速、特异性强等特点,是对ORT进行检测和抗原定位的良好方法。

关键词：鼻气管鸟杆菌分离鉴定致病性间接免疫荧光抗原定位

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鼻气管鸟杆菌诊断方法的研究与应用

鼻气管鸟杆菌诊断方法的研究与应用

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作者：李瑶瑶山东农业大学

学位级别：硕士

鼻气管鸟杆菌病(Ornithobacterium rhinotracheale, ORT)是由鼻气管鸟杆菌引起的主要感染肉鸡和火鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,临床上以呼吸道症状、生长障碍、死亡率增加为特征,病理上以严重的单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎... 详细信息

鼻气管鸟杆菌病(Ornithobacterium rhinotracheale, ORT)是由鼻气管鸟杆菌引起的主要感染肉鸡和火鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,临床上以呼吸道症状、生长障碍、死亡率增加为特征,病理上以严重的单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎、气囊炎为特征。目前,该病在欧洲、美洲、南非的许多发达国家流行,并呈上升的趋势,严重危害养禽业的发展。我国已有分离到该病菌的报道,因此,应引起人们的广泛注意。本课题对鼻气管鸟杆菌病的诊断方法做了详细的研究,成功建立了PCR、地高辛标记探针、间接ELISA检测方法,为ORT的诊断和流行病学调查奠定了基础,对预防和控制本病也具有重要意义。本研究内容分为三部分: 一、气管鸟杆菌PCR诊断方法的建立与应用根据GenBank已发表的鼻气管鸟杆菌16S rRNA基因序列,设计1对可扩增671bp目的片段的引物,建立了检测ORT的PCR方法。该方法能在ORT参考菌株中扩增到特异性片段,而鸡大肠杆菌、副鸡嗜血杆菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性;敏感性试验表明该方法最低检出限量为90pg DNA。表明所建立的PCR方法具有敏感性高、特异性强的特点。利用建立的方法对分离菌株进行检测,结果2株为阳性。二、地高辛标记探针检测鼻气管鸟杆菌的建立与应用利用PCR扩增鼻气管鸟杆菌16S rRNA基因的671bp的特异性片段,经回收纯化后用地高辛标记,建立了地高辛标记探针诊断ORT的方法。特异性试验表明,地高辛探针可与ORT不同血清型参考菌株的核酸发生特异性杂交,而与鸡大肠杆菌、副鸡嗜血杆菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌的核酸杂交均为阴性;敏感性实验结果表明,地高辛标记探针对ORT的最低检出量为100pg/μL;利用该探针对分离菌株进行检测,结果2株为阳性,利用该探针对211份疑似病料进行检测,结果4株为阳性,与PCR检测结果一致。三、鼻气管鸟杆菌间接ELISA检测方法的建立及应用提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为11.85μg/mL,血清样品稀释倍数为1∶20,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶1000,抗原抗体最佳结合时间为1h,血清与二抗最适反应时间为45min。试验结果确定的判定标准为:样品OD490nm≥0.639判定为阳性,OD490nm≤0.350判定为阴性,介于二者之间的为可疑。试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为11.7% (24/205)。

关键词：鼻气管鸟杆菌 PCR 地高辛标记探针间接ELISA 检测

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鼻气管鸟杆菌分离鉴定与OMA87蛋白单克隆抗体制备

鼻气管鸟杆菌分离鉴定与OMA87蛋白单克隆抗体制备

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作者：薛营扬州大学

学位级别：硕士

1.肉鸡感染鼻气管鸟杆菌的分离与鉴定从江苏省某白羽肉鸡场出现呼吸道症状的鸡群中分离获得3株病原菌,在绵羊血琼脂上划线,37℃,5%的CO2培养箱中培养48 h后可见灰白色、表面隆起、边缘整齐、圆形有丁酸样气味的菌落,而在麦康凯琼脂上不... 详细信息

1.肉鸡感染鼻气管鸟杆菌的分离与鉴定从江苏省某白羽肉鸡场出现呼吸道症状的鸡群中分离获得3株病原菌,在绵羊血琼脂上划线,37℃,5%的CO2培养箱中培养48 h后可见灰白色、表面隆起、边缘整齐、圆形有丁酸样气味的菌落,而在麦康凯琼脂上不生长。经革兰氏染色后,在显微镜下可观察到粉红色、短小杆菌(长0.6～1.5μm,宽0.2～0.6μm),单个或呈短丝状排列呈多形性。经负染通过电镜观察未发现有荚膜、鞭毛、菌毛等细菌的特殊结构。用API20NE生化反应试剂盒检测其结果显示,硝酸盐反应、吲哚试验为阴性,葡萄糖、氧化酶、β-半乳糖苷酶、脲酶均为阳性。根据GenBank已发表的鼻气管鸟杆菌(Omithobacterium rhinotracheale,ORT)16SrRNA基因序列进行多重比对后设计出一对特异引物,经PCR扩增出 379bp条带。经测序后其基因序列与GenBank已发表的ORT基因序列进行比较结果显示,同源性均在99.4%以上,表明该扩增片段为鼻气管鸟杆菌的特异片段。2.鼻气管鸟杆菌OMA87蛋白原核表达及抗原性鉴定通过参考 GenBank 中 ORT-DSM 15997 株基因序列(GenBank:CP003283.1),设计了覆盖全部ORTOMA87编码区(第32322至第34886位碱基)的特异性引物,使用PCR方法将其扩增并插入pMD 18-T Vector中进行克隆。测序正确后,用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ对重组质粒进行双酶切,并分别将目的片段连接入原核表达载体pGEX-6p-1,提取质粒pGEX-6p-1-OMA87,将质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。分析发现,融合蛋白GST-OMA87(121KD)在上清和沉淀中均有表达。将上清中的蛋白纯化、浓缩后,用ORT阳性SPF鸡血清作为一抗,兔抗鸡IgG作为二抗进行Western-blot验证,结果显示融合蛋白GST-OMA87可与SPF鸡ORT阳性血清发生反应,具有较好的抗原性,说明此融合蛋白可用作制备针对ORT单克隆抗体。3.鼻气管鸟杆菌OMA87蛋白的单克隆抗体制备利用研究二所得纯化的重组蛋白GST-OMA87作为免疫原,按照常规程序免疫6～8周龄Balb/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接ELISA筛选阳性细胞株,最终获得两株稳定分泌抗重组蛋白OMA87的单克隆抗体细胞株:ORT-OMA87-2C4和ORT-OMA87-5G9;抗体亚类鉴定2C4抗体重链IgG2a,5G9抗体重链为IgG1,轻链均为Kappa型;其腹水抗体效价分别为1:32000、1:64000。经间接ELISA特异性检测结果显示2C4、5G9均能与ORT包被抗原呈阳性反应,且与包被其它几种抗原之间无交叉反应。利用单抗检测分离鉴定的ORT阳性菌株,为进一步建立特异性强、敏感度高、简便快捷的检测方法奠定了基础。

关键词：鼻气管鸟杆菌分离鉴定 PCR OMA87 原核表达单克隆抗体

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肉鸡和蛋鸡鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及其新生物学特性分析

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中国兽医科学 2014年第1期44卷 55-61页

作者：李富祥李华春杨仕标许琳覃袖伟朱建波赵文华云南省畜牧兽医科学院云南昆明650224

为了确诊疑似肉鸡和蛋鸡鼻气管鸟杆菌（0RT）感染并研究其病原的新生物学特性，对其病原进行分离鉴定并分析其16SrDNA序列特征、溶血活性、凝血活性和药物敏感性。从云南省有鼻炎症状的蛋鸡和肉鸡中分离到5株革兰氏阴性多形性杆菌，分... 详细信息

为了确诊疑似肉鸡和蛋鸡鼻气管鸟杆菌（0RT）感染并研究其病原的新生物学特性，对其病原进行分离鉴定并分析其16SrDNA序列特征、溶血活性、凝血活性和药物敏感性。从云南省有鼻炎症状的蛋鸡和肉鸡中分离到5株革兰氏阴性多形性杆菌，分别被命名为YNll061、YN12071、YN12072、YN12091和YN12092。生化试验表明，5株分离株氧化酶阳性，过氧化氢酶阴性，发酵葡萄糖、乳糖、半糖、麦芽糖、甘露糖和果糖，产酸不产气；16SrDNA序列分析表明，5株分离株与GenBank上12株国外代表株之间的核苷酸序列同源性为99．39／6～100％，进一步鉴定为ORT。溶血试验和凝血试验表明，5株分离株具有p溶血性，能够凝集戊二醛醛化的绵羊红细胞。5株分离株同时对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、红霉素、氧氟沙星、诺氟沙星显示多重耐药性。结果证实，云南省存在ORT感染。本研究首次报道了ORT的溶血性和凝血性，为ORT的分离鉴定和新型诊断检测方法的建立奠定了基础。

关键词：鼻气管鸟杆菌分离 16 S rDNA 溶血性凝血性云南省

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山东省鸡鼻气管鸟杆菌的分离与鉴定

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第7期38卷 1-6页

作者：吴海洋刁有祥李瑶瑶李建侠孙静刘霞陈琳山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

【目的】对山东省鸡鼻气管鸟杆菌进行分离鉴定。【方法】采集山东省不同地区有呼吸道症状的病(死)鸡,进行鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的分离,根据培养特性及生化试验和玻片凝集试验结果对分离的菌株进行鉴定;应... 详细信息

【目的】对山东省鸡鼻气管鸟杆菌进行分离鉴定。【方法】采集山东省不同地区有呼吸道症状的病(死)鸡,进行鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的分离,根据培养特性及生化试验和玻片凝集试验结果对分离的菌株进行鉴定;应用PCR方法对分离菌株16SrRNA基因的一段保守序列进行扩增,应用琼脂扩散沉淀试验(AGP)对分离菌株的血清型进行鉴定,并对分离株进行药敏试验。【结果】试验共分离到5株ORT,所有分离菌株均能扩增到1条长671bp的特异性片段,而阴性对照菌株的扩增结果为阴性;5株ORT分离菌株可分为3个血清型,其中血清A型3株、血清B型1株、血清D型1株;分离ORT菌株对羟氨苄青霉素、头孢曲松、丁胺卡那、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。【结论】从山东省病死肉鸡中分离鉴定到5株ORT。

关键词：鼻气管鸟杆菌分离鉴定山东省鸡

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