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生理学报 2016年第5期68卷 585-591页

作者：徐爱丽姜明春陈筱涵陈文芳青岛大学医学院生理学教研室山东省神经退变疾病协同创新中心青岛266071 滨州医学院生理学教研室烟台264003 泰山医学院生理学教研室泰安271016

淫羊藿苷是传统中药淫羊藿的主要活性成分。研究显示淫羊藿苷可能是一个潜在的抗老年疾病的药物。本研究旨在探讨淫羊藿苷对MPP^+诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用及其可能机制。细胞活力检测结果显示MPP^+可剂量依赖性地损伤MES23.5细... 详细信息

淫羊藿苷是传统中药淫羊藿的主要活性成分。研究显示淫羊藿苷可能是一个潜在的抗老年疾病的药物。本研究旨在探讨淫羊藿苷对MPP^+诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用及其可能机制。细胞活力检测结果显示MPP^+可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞,降低细胞存活率,淫羊藿苷可以显著抑制MPP^+所诱导的细胞毒性作用。此外,免疫细胞化学和免疫印迹结果显示淫羊藿苷可对抗MPP^+引起的酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数的减少和蛋白水平的降低。流式细胞术结果显示,淫羊藿苷可以逆转MPP^+所导致的线粒体膜电位的降低。Real-time RT-PCR和Western blot结果显示,淫羊藿苷可逆转MPP^+所导致的Bax基因和蛋白表达水平的上调以及Bcl-2基因和蛋白表达水平的下调;同时,淫羊藿苷也可以抑制MPP^+所诱导的cleaved caspase-3蛋白的表达水平。以上结果提示,淫羊藿苷可明显对抗MPP^+对MES23.5细胞的神经毒性作用,其作用机制可能与抗凋亡有关。

关键词：淫羊藿苷 1-甲基-4-苯吡啶离子 MES23.5细胞

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淫羊藿苷及17β-雌二醇对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用机制研究

淫羊藿苷及17β-雌二醇对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用机...

引用

作者：冯晓庆青岛大学

学位级别：硕士

帕金森病（Parkinson's Disease,PD）是一种以黑质区域的致密带（substantia nigra par compacta,SNpc）多巴胺能神经元的进行性变性、缺失为主要病变的疾病。流行病学的统计结果表明,在PD患者中,男性多于女性,提示雌激素可能发挥... 详细信息

帕金森病（Parkinson's Disease,PD）是一种以黑质区域的致密带（substantia nigra par compacta,SNpc）多巴胺能神经元的进行性变性、缺失为主要病变的疾病。流行病学的统计结果表明,在PD患者中,男性多于女性,提示雌激素可能发挥着重要的作用。人体中,17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）是最主要的雌激素,对神经细胞具有保护作用及防止神经退化的功能。目前有研究认为,雌激素可通过基因组途径和非基因组途径发挥其神经保护作用。基因组途径与胞内经典的雌激素核受体（estrogen receptor,ER）的激活有关,而非基因组途径是通过膜表面的G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor,GPER）来介导。另有研究表明,在中枢神经系统雌激素可通过雌激素受体与胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R）信号通路的交互对话,发挥神经保护作用。但流行病学资料显示长期使用雌激素可产生严重的副作用。因此,从传统中药中寻找具有类雌激素样作用,但副作用小的植物雌激素,系统研究其对神经元的保护作用和药理作用机制,将对中国传统中药的推广应用具有重要意义。淫羊藿苷（icariin,ICA）是淫羊藿的主要活性成分,具有类雌激素样作用。本课题组的前期工作证明ICA能够对抗神经毒素MPTP对多巴胺能神经元的损伤,但其神经元保护作用的靶点及机制,有待于进一步探讨。本实验在1-甲基-4-苯吡啶离子（1-methy-4-phenylpyridinium,MPP+）制备的SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞损伤的模型上,采用MTT、免疫印迹技术的实验方法,应用GPER特异性激动剂G1,GPER特异性阻断剂G15、ER特异性阻断剂ICI182,780及IGF-1R特异性阻断剂JB1,研究淫羊藿苷和E2抗MPP+神经毒性的作用及其可能机制。实验结果如下:1.应用不同浓度MPP+（0.1 mM10 mM）处理SH-SY5Y细胞,随着MPP+浓度的增加,细胞的存活率逐渐降低。其中1 mM和10 mM MPP+组细胞存活率分别下降了26%和84%（P<0.01,P<0.001）。在后续实验中,我们选用1 mM MPP+。2.不同浓度的淫羊藿苷（0.001μM10μM）单独处理SH-SY5Y细胞,对细胞的存活率没有影响（P>0.05）。淫羊藿苷预处理SH-SY5Y细胞24 h,再与1 mmol/L MPP+共同作用细胞24 h,结果显示,0.01μM和10μM浓度的淫羊藿苷预处理组,细胞存活率较单用MPP+组明显升高（P<0.05;P<0.05）。在后续实验中,我们选用0.01μM的淫羊藿苷。3.单用E2（0.001μM、0.01μM）处理细胞,对SH-SY5Y细胞的存活率无影响（P>0.05）。应用E2预处理细胞24 h,再与MPP+共同作用24 h,0.001μM和0.01μM E2均能够明显降低MPP+的毒性作用（P<0.05）。在后续实验中,我们选用0.01μM E2。4.应用不同浓度的GPER特异性激动剂G1（0.001μM、0.01μM、0.1μM、1μM、2μM）预处理细胞24 h,再与MPP+共同作用24 h,可明显降低MPP+对细胞的毒性作用,其中0.01μM G1保护作用最为明显（P<0.05）。而1μM和2μM G1共处理组则对细胞存活率有不同程度的降低（P<0.05;P<0.001）。单用0.001μM0.1μM G1对SH-SY5Y细胞存活率没有影响,而1μM和2μM G1可明显抑制细胞的存活（P<0.05;P<0.001）。5.分别应用GPER特异性阻断剂G15（1μM）、IGF-1R特异性阻断剂JB1（1μg/m L）或ER特异性阻断剂ICI182,780（1μM）预处理细胞1 h,再应用淫羊藿苷或E2预保护细胞24 h,继而与MPP+共同作用24h。结果显示,JB1或ICI182,780共处理组,淫羊藿苷或E2的神经保护作用被阻断（P<0.05;P<0.001）,而G15预处理不能阻断淫羊藿苷或E2的神经保护作用（P>0.05）。单用阻断剂对细胞的存活率没有影响。6.为进一步明确G15的阻断效应,本研究应用G15预处理细胞,观察其对G1神经保护作用的阻断效应。结果显示G1对由MPP+诱导的神经元细胞损伤的保护作用能够被G15所阻断（P<0.01）。*** blotting结果显示,淫羊藿苷或E2预处理能够对抗MPP+诱导的Bcl-2蛋白表达的降低（P<0.001;P<0.01）和Bax蛋白表达的增加（P<0.01;P<0.001）。应用阻断剂JB1或ICI182,780,

关键词：淫羊藿苷 17β-雌二醇雌激素受体 1-甲基-4-苯吡啶离子 SH-SY5Y细胞

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淫羊藿苷减轻MPP+对MES23.5细胞的神经毒性损伤（英文）

淫羊藿苷减轻MPP+对MES23.5细胞的神经毒性损伤（英文）

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作者：徐爱丽姜明春陈筱涵陈文芳青岛大学医学院生理学教研室山东省神经退变疾病协同创新中心滨州医学院生理学教研室泰山医学院生理学教研室

淫羊藿苷是传统中药淫羊藿的主要活性成分。研究显示淫羊藿苷可能是一个潜在的抗老年疾病的药物。本研究旨在探讨淫羊藿苷对MPP诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用及其可能机制。细胞活力检测结果显示MPP可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞,... 详细信息

淫羊藿苷是传统中药淫羊藿的主要活性成分。研究显示淫羊藿苷可能是一个潜在的抗老年疾病的药物。本研究旨在探讨淫羊藿苷对MPP诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用及其可能机制。细胞活力检测结果显示MPP可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞,降低细胞存活率,淫羊藿苷可以显著抑制MPP所诱导的细胞毒性作用。此外,免疫细胞化学和免疫印迹结果显示淫羊藿苷可对抗MPP引起的酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数的减少和蛋白水平的降低。流式细胞术结果显示,淫羊藿苷可以逆转MPP所导致的线粒体膜电位的降低。Real-time RT-PCR和Western blot结果显示,淫羊藿苷可逆转MPP所导致的Bax基因和蛋白表达水平的上调以及Bcl-2基因和蛋白表达水平的下调;同时,淫羊藿苷也可以抑制MPP所诱导的cleaved caspase-3蛋白的表达水平。以上结果提示,淫羊藿苷可明显对抗MPP对MES23.5细胞的神经毒性作用,其作用机制可能与抗凋亡有关。

关键词：淫羊藿苷 1-甲基-4-苯吡啶离子 MES23.5细胞

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