检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年

作者：韩松段宏勇杨楠王树茂高飞赵款周艳君童武姜一峰童光志李丽薇中国农业科学院上海兽医研究所河南师范大学生命科学学院河北农业大学动物医学院

a型塞内卡病毒(senecavirus A，SVA)作为一种可以引起猪水泡样症状的外来病原，与口蹄疫病毒引起的临床症状难以区分。本研究成功分离1株SVA，将其命名为HN2019。经全基因组测序和进化分析发现，该分离株与我国毒株CH-HN-2017亲缘性最... 详细信息

a型塞内卡病毒(senecavirus A，SVA)作为一种可以引起猪水泡样症状的外来病原，与口蹄疫病毒引起的临床症状难以区分。本研究成功分离1株SVA，将其命名为HN2019。经全基因组测序和进化分析发现，该分离株与我国毒株CH-HN-2017亲缘性最高。该毒株可在猪肾传代细胞(PK-15)、乳仓鼠肾细胞(BHK-21)中有效复制增殖，感染后均能产生细胞病变。通过病毒一步生长曲线、间接免疫荧光、Western-blot等试验研究了该毒株的生物学特性。同时，利用pCold-TF质粒构建该毒株非结构蛋白3A的原核表达载体，转化大肠杆菌系统，发现该重组蛋白可在上清中可溶性表达。将纯化后的重组蛋白分4次免疫BALB/c小鼠，成功制备针对3A蛋白的多克隆抗体。该抗体效价为1∶128 000，可特异性识别病毒感染的细胞产生特异性荧光，证明该抗体具有良好的反应性和特异性，为进一步研究SVA 3A蛋白的生物学功能及病毒的致病机制提供有效工具。

关键词： a型塞内卡病毒遗传进化分析 3A蛋白多克隆抗体

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a型塞内卡病毒、口蹄疫病毒和猪捷申病毒3重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2025年第1期45卷 22-29页

作者：甘诗琪魏千禾倪语晨倪健波赵秀玲董婉玉周莹珊王晓杜浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室宁波海关技术中心

针对a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus, PTV)核酸的保守区域，设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的... 详细信息

针对a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus, PTV)核酸的保守区域，设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重组阳性质粒标准品为模板，建立了3重TaqMan荧光定量PCR方法，并对该体系进行了优化，确定了该方法的特异性、重复性、灵敏性及标准曲线，同时建立了混合感染模型。此外，利用所构建的3重TaqMan荧光定量PCR方法对临床样品进行了检测。结果显示，该方法能够特异性检测SVA、FMDV和PTV 3种病毒，与其他病原体无交叉反应；检测SVA、FMDV和PTV的最低浓度均可达到1×10～1拷贝/μL;组间和组内变异系数均小于5%;在126份样品中未检出这3种病毒。上述结果表明，该方法具有较强的特异性、高灵敏性和良好的稳定性，可用于临床检测。

关键词： a型塞内卡病毒口蹄疫病毒猪捷申病毒荧光定量RT-PCR

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a型塞内卡病毒的病毒样颗粒的制备及其免疫原性分析

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生物工程学报 2021年第9期37卷 3211-3220页

作者：伍春平茹毅田宏马坤郝荣增李亚军罗俊聪石正旺刘华南左志郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了研制a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,以SVA田间流行毒株CH-FJ-2017结构蛋白基因序列为研究对象,构建了能够同时表达SVA的3种结构蛋白VP0、VP1和VP3的单个原核重组表达质粒pET28a-SVA... 详细信息

为了研制a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,以SVA田间流行毒株CH-FJ-2017结构蛋白基因序列为研究对象,构建了能够同时表达SVA的3种结构蛋白VP0、VP1和VP3的单个原核重组表达质粒pET28a-SVA-VP031。通过大肠杆菌Escherichia coli表达、亲和层析纯化和体外自组装,获得SVA VLPs。透射电子显微镜鉴定显示,SVA的3种结构蛋白在体外能够自组装成直径约25–30 nm的VLPs,并且动物免疫试验结果表明,该VLPs能够有效刺激豚鼠产生高水平的抗原特异性中和抗体。上述研究结果为SVA VLPs疫苗的研制奠定了基础。

关键词： a型塞内卡病毒病毒样颗粒结构蛋白免疫原性

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a型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

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江苏农业学报 2019年第4期35卷 868-873页

作者：杨钰楚王晨曦周雪珂赵军徐志文朱玲四川农业大学动物医学院四川成都611130 四川大学生命科学学院四川成都611130 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测a型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法。利用建立的RT-L... 详细信息

为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测a型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法。利用建立的RT-LAMP检测方法对口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒与塞内卡病毒进行特异性试验。将SVA VP1质粒10倍梯度稀释液作为模板(1×10~0~1×10~7拷贝)进行RT-LAMP和RT-PCR反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性。采集疑似发病猪的鼻腔拭子和水疱液共126份样品,应用RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化鉴定。结果表明,与传统RT-PCR相比,RT-LAMP检测方法灵敏度高1 000倍,且与其他病毒无交叉反应,具有高度敏感性和特异性。临床样品检测结果显示,鼻腔拭子样本SVA阳性率为29.6%,水疱液样本SVA阳性率为100.0%,2种方法检测结果一致,符合率为100%。综上所述,本研究建立的RT-LAMP检测方法准确、简便、经济有效,尤其适用于现场和基层实验室对SVA的快速诊断。

关键词： a型塞内卡病毒 RT-LAMP 快速检测

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a型塞内卡病毒2C蛋白通过STING调控IFNβ、TNF-α和IL-6的表达

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微生物学通报 2023年第5期50卷 2087-2098页

作者：王梦瑶张瑞谭小雨游青马潇雨周泷柏玲张志雄李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

【背景】a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是新发猪塞内卡病毒病的病原,属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)的单股正链RNA病毒。可引起新生仔猪死亡和成年猪口、蹄部出现水泡。先天免疫是宿主抵御病毒入... 详细信息

【背景】a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是新发猪塞内卡病毒病的病原,属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)的单股正链RNA病毒。可引起新生仔猪死亡和成年猪口、蹄部出现水泡。先天免疫是宿主抵御病毒入侵的第一道防线,但SVA与宿主抗病毒先天免疫的相互作用机制尚不清楚。【目的】探究SVA非结构蛋白2C在先天免疫应答中的作用机制。【方法】利用SVA感染和通过在猪PK-15细胞中过表达SVA 2C蛋白,利用RT-qPCR和Western blotting分析2C蛋白对细胞因子表达及其关键信号通路的影响。【结果】RT-qPCR检测发现,SVA感染PK-15细胞导致IFNβ、TNF-α和IL-6表达的显著升高;同时,SVA感染导致TBK1和NF-κB的磷酸化。进一步的研究发现,SVA的2C蛋白能够激活TBK1和NF-κB磷酸化,并诱导IFNβ、TNF-α和IL-6的表达;2C蛋白能够激活抗DNA病毒感染关键蛋白干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)磷酸化,敲除STING抑制TBK1、NF-κB的磷酸化和IFNβ、TNF-α、IL-6的表达。【结论】本研究初步揭示了SVA 2C蛋白通过激活STING诱导天然免疫应答的作用机制,揭示了STING参与调控RNA病毒SVA介导的免疫应答的功能,为抗病毒药物和疫苗的研发提供了理论基础。

关键词： a型塞内卡病毒天然免疫应答 2C蛋白细胞因子干扰素基因刺激因子

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a型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2023年第10期45卷 1025-1031页

作者：翟刚顾文源王晶刘莹赵云环刘涛张帅左玉柱范京惠河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001 河北省动物疫病预防控制中心河北石家庄050053 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071001

为建立高效的a型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化... 详细信息

为建立高效的a型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在42 ku处出现特异性条带,表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h,待检血清的最适稀释度为1∶500,兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10000,最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时,样品检测结果为阴性;当检测样品的S/P值≥0.201时,结果为阳性。利用该方法检测SVA,猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清,结果显示,除SVA检测为阳性外,其他病毒均为阴性,特异性较强。将SVA阳性血清2倍倍比稀释(1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600)后经该间接ELISA方法检测,评估其敏感性,结果显示,SVA阳性小鼠血清在1∶800稀释后检测结果仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r VP2包被ELISA板,按照该ELISA方法检测8份猪SVA阳性血清,评估该方法的重复性。结果显示,批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测,结果显示,本研究建立方法检测的样品阳性率为19.1%,中和试验检测的样品阳性率为19.55%,两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于SVA r VP2建立的间接ELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为SVA的检测和其感染的防控提供了可靠的技术支持。

关键词：猪 a型塞内卡病毒 VP2 间接ELISA

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a型塞内卡病毒CH-HNXC株的分离鉴定及其致病性研究

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动物医学进展 2019年第8期40卷 18-23页

作者：胡东波李雪锋晋春霞刘栓孙哲普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471003 洛阳中科基因检测诊断中心有限公司河南洛阳471003

自2007年a型塞内卡病毒(SVA)在猪体内被发现以来,给全球养猪业造成了严重的经济损失,SVA感染的典型症状包括猪口鼻部囊泡的形成及破裂,以及蹄部冠状带水疱引起的跛行。用RT-PCR从河南某猪场具有水疱样病变的猪水疱皮或水疱液中检测到了... 详细信息

自2007年a型塞内卡病毒(SVA)在猪体内被发现以来,给全球养猪业造成了严重的经济损失,SVA感染的典型症状包括猪口鼻部囊泡的形成及破裂,以及蹄部冠状带水疱引起的跛行。用RT-PCR从河南某猪场具有水疱样病变的猪水疱皮或水疱液中检测到了SVA的特异性核酸片段,并通过IBRS-2细胞进行SVA的分离和传代,将分离得到的SVA命名为CH-HNXC,扩增和测定了VP1基因序列后分析发现,分离株CH-HNXC与之前报道的2017年河南和福建分离株位于较近的进化分支中,与加拿大和泰国分离株亲缘关系较远,表明SVA流行和进化中由相近时间点和较近地理位置带来高的同源性;分离株攻毒猪鼻吻部和蹄部可见水疱和溃烂、跛行等,表明本分离株能引起SVA所致的典型临床症状,为SVA在国内的流行提供了新的证据,为进一步研究SVA的致病机制、开发诊断试剂和疫苗奠定了基础。

关键词：猪 a型塞内卡病毒病毒分离序列分析致病性试验

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a型塞内卡病毒VP2蛋白间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 152-158页

作者：申珊史雪坤李蕊马玉忠秦建华汪恩强河北农业大学动物医学院

为建立一种检测塞内卡病毒VP2蛋白的间接ELISA方法,本试验将a型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。结果显示,VP2蛋白包被量... 详细信息

为建立一种检测塞内卡病毒VP2蛋白的间接ELISA方法,本试验将a型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。结果显示,VP2蛋白包被量为2μg/m L(1∶1000稀释);用2%BSA封闭液稀释标准阳性血清为1∶20;二抗做1∶5000稀释;TMB底物显色液室温避光显色反应10 min。特异性试验结果显示,同FMDV、PRRSV、CSFV、PRV和APP阳性血清均无交叉反应。此方法对塞内卡病毒阳性血清的敏感性为1∶160。批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10%。对200份猪血清样本分别进行间接荧光抗体免疫方法和间接ELISA方法的检测,结果符合率为95.5%。上述结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。

关键词： a型塞内卡病毒抗体间接ELISA

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a型塞内卡病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2024年第10期46卷 1034-1042页

作者：周函蓉苏世博孙明霞蒙靓杨巍史鑫琪李鑫安同庆蔡雪辉王海伟孟凡丹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江省兽用生物药物工程技术研究中心黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江省免疫学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种快速检测a型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5... 详细信息

为建立一种快速检测a型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5株MAb标记HRP(MAb-HRP),并采用ELISA法检测标记效果。将7株MAb与5株MAb-HRP两两组合进行抗体配对试验。结果显示,5株MAb均标记上HRP,且其中各稀释度标记的MAb 2C8-HRP的反应性均最强;当MAb 2G7作为捕获抗体,MAb 2C8-HRP作为检测抗体时,P/N值最大,表明这两种MAb的配对效果最好。在此基础上,通过优化各反应条件初步建立检测SVA的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、O型和A型口蹄疫病毒和SVA,结果显示,该方法仅能检测SVA,其他常见的猪源病毒均为阴性结果,表明该方法特异性强。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测系列稀释的SVA上清液(1~1:80000,对应的病毒滴度分别为107.5TCID50/mL~1.25×10^(2.5)TCID_(50)/mL)和2倍倍比稀释的SVA猪阳性猪血清(1:2~1:256),同时采用猪塞内卡病毒抗原(SVA-Ag)ELISA试剂盒分别检测上述SVA上清液和SVA猪阳性血清,评估本研究建立DAS-ELISA方法的敏感性。结果显示SVA稀释40000倍后,其OD450nm值仍大于临界值0.115,即该方法对SVA上清液的检测限为2.5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且1:64倍稀释的SVA猪阳性血清样品仍为阳性;(SVA-Ag)ELISA结果显示,该方法检测的SVA最大稀释度为1:20000,即对SVA上清液的检测限为5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且仅能检测到稀释至32倍的SVA猪阳性血清,均低于本实验建立的DAS-ELISA方法,表明该方法敏感性高。对4份SVA猪阳性血清和1份SVA猪阴性血清采用DAS-ELISA方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批间和批内重复性试验的变异系数均在10%以下,重复性较好。对采集的205份疑似SVA感染的猪扁桃体组织、鼻咽拭子及血清样品分别采用DAS-ELISA及RT-PCR方法检测。DAS-ELISA的检测结果显示,36份样品为阳性,169份样品为阴性;RT-PCR检测结果显示,50份样品为阳性,155份样品为阴性。经计算两种方法的阳性符合率为72%(36/50),总符合率为93%(191/205)。以上结果表明,本研究建立的DAS-ELISA适用于大规模多种临床样品的检测,为SVA的检测及流行病学调查提供技术支撑。

关键词： a型塞内卡病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA方法

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a型塞内卡病毒激活炎症因子表达及诱导细胞焦亡

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 586-594页

作者：李媛媛马旭升 Mohiuddin 郑海学刘湘涛马永华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

初步探索a型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎... 详细信息

初步探索a型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎症因子分泌水平;采用CCK-8检测细胞活力;用乳酸脱氢酶释放试验检测细胞膜的损伤程度;用Western-blot检测目的基因在蛋白水平的表达程度。结果显示:SVA感染细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA表达水平均升高,与转录水平相似,SVA能够诱导IL-1β、IL-6、TNF-α以及IL-12分泌水平上调;SVA感染3D4/21细胞后,焦亡相关基因在mRNA水平表达增加,焦亡相关蛋白GSDMD、IL-1β以及Caspase-1被激活;SVA感染细胞后,导致细胞活力下降,细胞膜完整性丧失;转染sh-NLRP3或加入NLRP3抑制剂MCC950,Caspase-1抑制剂VX765,然后感染SVA,发现焦亡相关活性蛋白表达降低。结论:SVA感染3D4/21细胞后引起上述细胞因子表达增加,激活Caspase-1引起的细胞焦亡,且与NLRP3炎症小体途径相关。

关键词： a型塞内卡病毒炎症反应细胞焦亡 NLRP3炎症小体

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