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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1645-1650,1657页

作者：廖迎新范锦戴张梦茹刘晨晨章洋溢孙显月陈金顶赵明秋华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东茂名农林科技职业学院广东茂名525000

a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA),也称为塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV),是单股正链RNA病毒,属于小RNA病毒科塞内卡病毒属成员。SVA感染可引发母猪水泡性相关疾病,并可导致新生仔猪急性死亡,严重影响养猪生产。自2015年广东... 详细信息

a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA),也称为塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV),是单股正链RNA病毒,属于小RNA病毒科塞内卡病毒属成员。SVA感染可引发母猪水泡性相关疾病,并可导致新生仔猪急性死亡,严重影响养猪生产。自2015年广东省发生SVA感染以来,我国多省份陆续有感染报道,如何有效防控SVA感染是养猪从业人员须面对的问题。现拟对SVA流行情况、感染免疫机理、诊断及疫苗研发等方面进行综述,旨在为SVA防控提供有效信息。

关键词： a型塞内卡病毒流行病学致病机理疫苗

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a型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2022年第10期52卷 1288-1293页

作者：马雪青孙婕妤李平花付元芳朵瑞锦杨林张婧白兴文刘在新卢曾军孙普中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050

为了研究a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP3蛋白的功能,将SVA的VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒p ET32a-SVA-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达;用纯化复性后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用... 详细信息

为了研究a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP3蛋白的功能,将SVA的VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒p ET32a-SVA-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达;用纯化复性后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western-blot与间接免疫荧光试验鉴定其特异性。结果表明,重组SVA VP3蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)以包涵体形式表达,分子质量约为44 ku;制备的家兔多克隆抗体能与SVA表达的VP3蛋白特异性结合,而不与口蹄疫病毒抗原反应,表明制备的SVA VP3蛋白家兔多抗血清具有良好的反应原性和特异性。重组SVA VP3蛋白及其多克隆抗体的成功制备为SVA血清学检测方法的建立、SVA致病机制及VP3蛋白功能的研究提供了材料支撑。

关键词： a型塞内卡病毒 VP3蛋白原核表达多克隆抗体

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a型塞内卡病毒的分离与鉴定

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中国兽医科学 2022年第10期52卷 1281-1287页

作者：郑敏杨帆曹伟军张伟唐丽杰郑海学东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了确定2020年河南某猪场水疱性疾病的病因,通过提取发病猪的水疱皮样品的RNA,用RT-PCR方法初步检测,经BHK-21细胞分离培养病毒,进一步用间接免疫荧光试验(IFA)鉴定;利用蚀斑形成试验及病毒一步生长曲线,分析病毒分离株的增殖特性;RT-... 详细信息

为了确定2020年河南某猪场水疱性疾病的病因,通过提取发病猪的水疱皮样品的RNA,用RT-PCR方法初步检测,经BHK-21细胞分离培养病毒,进一步用间接免疫荧光试验(IFA)鉴定;利用蚀斑形成试验及病毒一步生长曲线,分析病毒分离株的增殖特性;RT-PCR方法扩增全基因组序列,进而构建基于P1基因的系统进化树。RT-PCR鉴定结果表明,猪场水疱性疾病的样品中只有a型塞内卡病毒(SVA)核酸呈阳性;细胞分离和IFA鉴定结果表明,成功分离到的1株病原为SVA,并命名为SVA/HN/2020,该分离株能够与SVA免疫家兔多抗发生特异性反应;蚀斑试验和病毒一步生长曲线结果表明,该毒株能够在BHK-21细胞层上形成蚀斑,并在感染后的第16小时病毒滴度达到最高为1×10^(9.5)TCID_(50)/100μL;全基因组测序结果表明,该毒株基因组全长7279 bp(不含Poly A),开放阅读框为6546 bp,可编码含2181个氨基酸残基的多聚蛋白;其中P1基因大小为2574 bp,其核苷酸序列分析显示,该分离株与在我国分离的SVAHB/CH/2016和SVA CH/01/2015的同源性最高,为99.6%~99.7%,而与2018-2020年间从广东、广西、河南、河北等地的分离毒株的同源性为95.6%~97.0%。结论:本研究成功分离到1株SVA分离株,为进一步研究SVA致病机制及防控技术研发奠定了基础。

关键词： a型塞内卡病毒分离鉴定遗传进化分析

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a型塞内卡病毒衣壳蛋白的原核表达及其五聚体的组装

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中国兽医科学 2019年第8期49卷 969-976页

作者：莫亚霞宋品穆素雨董虎曹随忠郭慧琛姚学萍孙世琪四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为实现a型塞内卡病毒(SVA)衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并组装为五聚体,本试验以带His标签和SUMO(小泛素样修饰系统)标签的pSMK及pSMA为载体,将塞内卡病毒衣壳蛋白基因VP0、VP1和VP3构建为重组质粒pSMA-VP0、pSMK-VP1、pSMK-VP3,... 详细信息

为实现a型塞内卡病毒(SVA)衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并组装为五聚体,本试验以带His标签和SUMO(小泛素样修饰系统)标签的pSMK及pSMA为载体,将塞内卡病毒衣壳蛋白基因VP0、VP1和VP3构建为重组质粒pSMA-VP0、pSMK-VP1、pSMK-VP3,在大肠杆菌原核表达系统中对其进行共表达并优化诱导表达条件,包括诱导温度、诱导剂IPTG浓度、诱导前细菌D600值以及诱导时间,纯化后获得SVA衣壳蛋白后进行免疫印迹分析,之后利用His-SUMO蛋白酶切除标签蛋白,在体外进行组装和鉴定。结果,a型塞内卡病毒衣壳蛋白VP0、VP1、VP3在20℃下、D600值为1.1、 IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导12 h后蛋白表达效果最好。经超声破碎、镍柱纯化后获得VP0、VP1、VP3蛋白,免疫印迹结果表明,目的蛋白能与SVA阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性。动态光散射和扫描电镜检测结果显示,去除His-MUMO后还原天然构象的目的蛋白可组装成五聚体。上述研究结果为制备SVA病毒样颗粒奠定了物质基础。

关键词： a型塞内卡病毒重组质粒原核表达五聚体

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a型塞内卡病毒P12A-3C基因真核表达质粒的构建及其免疫效力的研究

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中国兽医科学 2020年第7期50卷 861-868页

作者：魏婷杨帆张伟王志芳孙晓林郑海学甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州703370 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为构建a型塞内卡病毒(SVA)P12A-3C基因的真核表达质粒,提取SVACH-FJ-2017株的RNA,经RT-PCR方法扩增得到衣壳前体蛋白P12A基因和蛋白酶3C基因,利用融合PCR方法获得P12A-3C基因并将其构建到真核表达质粒pc DNATM3.1/myc-His(-)上,获得表... 详细信息

为构建a型塞内卡病毒(SVA)P12A-3C基因的真核表达质粒,提取SVACH-FJ-2017株的RNA,经RT-PCR方法扩增得到衣壳前体蛋白P12A基因和蛋白酶3C基因,利用融合PCR方法获得P12A-3C基因并将其构建到真核表达质粒pc DNATM3.1/myc-His(-)上,获得表达质粒pCD-P12A-3C,用脂质体LipofectamineTM2000将该质粒转染293T细胞后,进行间接免疫荧光(IFA)检测;且用Myc单抗和SVA VP1单抗进行Western-blot分析;大量提取并纯化表达质粒,免疫小鼠后用间接ELISA法检测抗体水平变化情况。结果,SVA真核表达质粒pCD-P12A-3C经酶切及测序鉴定证明构建正确,转染293T细胞后IFA可见明显的绿色荧光,表明P12A-3C基因可在细胞内表达;将转染细胞裂解后进行Western-blot分析,结果显示该质粒可表达3C蛋白,且表达产物可与SVA VP1单抗发生特异性反应;免疫小鼠后抗体检测结果表明,二免后第14天,免疫小鼠抗体水平比对照组明显增高;该结果表明本研究构建的真核表达质粒pCD-P12A-3C可正确表达相应蛋白,且所表达的蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。结论:本研究成功构建了a型塞内卡病毒P12A-3C基因真核表达质粒并进行了免疫效力初步验证,为A型塞内卡核酸疫苗的研制奠定了基础。

关键词： a型塞内卡病毒 P12A-3C基因真核表达核酸疫苗

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a型塞内卡病毒研究进展

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动物医学进展 2022年第4期43卷 69-74页

作者：肖佳旭郭笑然赵款袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071000

a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是近年来新发的一种能够引起猪水疱性相关疾病的病毒,为小RNA病毒科塞内卡病毒属唯一成员。据报道,该病先后在加拿大、美国、巴西、泰国等国家流行,2015年SVA首次在我国广东省检出,随后多个省、自治区... 详细信息

a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是近年来新发的一种能够引起猪水疱性相关疾病的病毒,为小RNA病毒科塞内卡病毒属唯一成员。据报道,该病先后在加拿大、美国、巴西、泰国等国家流行,2015年SVA首次在我国广东省检出,随后多个省、自治区和直辖市均检测到SVA阳性病例,可见SVA已经在我国流行。猪感染SVA后能够引起猪鼻镜及蹄冠处出现水疱、溃烂,严重者甚至出现死亡,其临床症状与口蹄疫、猪水疱病非常相似,难以进行辨别。该病目前尚无商品化疫苗,但已有灭活疫苗、减毒活疫苗以及病毒样颗粒疫苗研究的报道。论文对塞内卡病的病原学、流行病学、致病机理、诊断以及疫苗研究等方面进行概述,为深入研究和防控该病提供理论依据。

关键词： a型塞内卡病毒流行病学致病机理诊断

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a型塞内卡病毒SVA/CH-GX01-2020株全基因组特征分析

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南方农业学报 2024年第11期55卷 3453-3462页

作者：王睿敏施开创冯淑萍尹彦文龙凤陆文俊屈素洁广西水牛研究所广西南宁530001 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001

【目的】通过对a型塞内卡病毒(SVA)广西分离株全基因组特征进行深入分析,了解其病原特征和分子流行病学特点,为有效防止疫情暴发和流行提供理论依据。【方法】对2020年采集自广西的病料进行病毒分离,通过RTPCR检测和间接免疫荧光试验(I... 详细信息

【目的】通过对a型塞内卡病毒(SVA)广西分离株全基因组特征进行深入分析,了解其病原特征和分子流行病学特点,为有效防止疫情暴发和流行提供理论依据。【方法】对2020年采集自广西的病料进行病毒分离,通过RTPCR检测和间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定。对SVA分离株全基因组进行分段扩增和测序后,采用Lasergene 7.1拼接序列,使用MegAlign将SVA分离株全基因组序列与国内外不同年份的55株SVA代表毒株进行比对,利用MEGA11.0构建系统发育进化树。【结果】经鉴定分离到1株SVA,命名为SVA/CH-GX01-2020株。SVA/CH-GX01-2020株基因组全长为7250 bp,开放阅读框(ORF)编码2181个氨基酸残基。与国内外不同年份的55株SVA代表毒株进行比对,结果显示,SVA/CH-GX01-2020株与国内外SVA分离株全基因组的核苷酸序列及其推导氨基酸序列的相似性分别为93.3%~98.7%和97.3%~99.6%,其中,与美国经典毒株SVV-001和ATCC PTA-5343全基因组相似性较低。遗传进化分析发现,SVA/CH-GX01-2020株与美国经典毒株SVV-001和ATCC PTA-5343亲缘关系较远,与大多数中国分离株聚在同一分支,亲缘关系较近,与广西分离株SVA/GX/CH/2018亲缘关系非常近。进行氨基酸序列比对分析发现,与美国经典毒株SVV-001、中国首株分离株CH-01-2015、广西分离株SVA/GX/CH/2018相比,SVA/CH-GX01-2020株氨基酸突变位点主要集中在非结构蛋白3D区域,在结构蛋白VP4和非结构蛋白2A区域相对保守。【结论】SVA/CH-GX01-2020株具有其独特的遗传变异特点,不同地域的SVA毒株亲缘关系远近程度不同,临床流行毒株具有遗传多样性,应加强疫情监测和流行病学调查。

关键词： a型塞内卡病毒病毒分离系统发育进化树基因组特征遗传变异

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a型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国畜牧兽医 2019年第1期46卷 256-263页

作者：张永宁张舟诸明欣梅琳王彩霞吴绍强林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所北京100176

本研究旨在表达a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质... 详细信息

本研究旨在表达a型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。

关键词： a型塞内卡病毒衣壳蛋白原核表达多克隆抗体

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a型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 195-200页

作者：秦文珍李挺赵欣董苏洁翟焕杰叶晨倩叶曼青童武郑浩于海单同领童光志兰道亮孔宁西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

a型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重... 详细信息

a型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重组蛋白。结果显示:VP1-pCold-I表达的目的蛋白在沉淀(包涵体)中,VP1-pCold-TF表达的蛋白为可溶性蛋白。分别纯化上述表达的蛋白,并免疫BALB/c小鼠,经四次免疫后得到多克隆抗体。经Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定,制备的多克隆抗体具有良好的Western blot效价和IFA效价,为相关基础研究和应用研究提供了工具。

关键词： a型塞内卡病毒 VP1 原核表达多克隆抗体

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a型塞内卡病毒序列元件与蛋白功能研究进展

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 89-95页

作者：南福龙孟海蓝李紫薇沙洲尼博刘拂晓青岛农业大学动物医学院中国动物卫生与流行病学中心

a型塞内卡病毒(SVA)是一种引起猪水疱性疾病的新发病毒。该病毒是小RNA病毒科、塞内卡病毒属的唯一成员。SVA基因组为单股、正链、不分节段的线性RNA,其中间为较长的编码区，共编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白；两端分别为5′和3′非编... 详细信息

a型塞内卡病毒(SVA)是一种引起猪水疱性疾病的新发病毒。该病毒是小RNA病毒科、塞内卡病毒属的唯一成员。SVA基因组为单股、正链、不分节段的线性RNA,其中间为较长的编码区，共编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白；两端分别为5′和3′非编码区，在病毒复制、启动蛋白表达以及影响病毒毒力等过程中起到了重要的作用。SVA的结构蛋白为VP1、VP2、VP3和VP4,主要参与病毒衣壳的形成；非结构蛋白则与病毒复制和免疫逃逸密切相关。作为一种新发病原体，关于SVA分子机制的研究尚未深入。本文系统地总结了SVA基因组结构和功能的研究进展，为SVA的深入研究，尤其是抗病毒制剂的研制提供参考依据。

关键词： a型塞内卡病毒基因蛋白结构功能

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