检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2008年第2期28卷 25-31页

作者：陈元鼎刘晓熊新宇曹志亮文喻玲赵庆欢余洋尹兴晓李传印范耀春中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

运用基因克隆和重组技术,从一急性胃肠炎患儿样品中克隆到一株轮状病毒(RV)全基因组cDNA。核苷酸序列测定结果表明,该株RV基因组11条RNA共含有18613个核苷酸(3302bp^751bp),编码5791个氨基酸。全基因组研究结果表明,该株RV(TB-Chen)为A... 详细信息

运用基因克隆和重组技术,从一急性胃肠炎患儿样品中克隆到一株轮状病毒(RV)全基因组cDNA。核苷酸序列测定结果表明,该株RV基因组11条RNA共含有18613个核苷酸(3302bp^751bp),编码5791个氨基酸。全基因组研究结果表明,该株RV(TB-Chen)为A组,II亚组,基因型为G2P[4]/NSP4[A]。这是首个A组人RV全基因组研究结果的报道,对研究和开发RV疫苗具有积极的意义。

关键词： a组人轮状病毒全基因组克隆基因型分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

a组人轮状病毒VP6蛋白表达及其免疫学分析

A组人轮状病毒VP6蛋白表达及其免疫学分析

引用

作者：尹兴晓中国协和医科大学

学位级别：硕士

轮状病毒(Rotavirus,RV)属呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属,是引起人类、哺乳动物类和鸟类腹泻的主要病原体。完整的RV病毒分为三层结构,VP6蛋白位于病毒的内壳中间层,为第6基因片段编码,由397个氨基酸组成,分子量约为44.8KDa。VP6蛋... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)属呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属,是引起人类、哺乳动物类和鸟类腹泻的主要病原体。完整的RV病毒分为三层结构,VP6蛋白位于病毒的内壳中间层,为第6基因片段编码,由397个氨基酸组成,分子量约为44.8KDa。VP6蛋白是轮状病毒中含量仍然最丰富的蛋白,约占病毒总蛋白量的51%,轮状病毒内壳由VP6蛋白构成的260个致密的三聚体所形成。VP6在病毒结构中具有物理受体的作用,在病毒基因转录中也具有重要作用。本研究中的VP6基因克隆自临床样品中分离的A组轮状病毒TB-Chen株。研究中,以VP6全基因为模板,经PCR扩增,基因重组,将VP6蛋白编码基因插入到质粒pET中构建了原核表达质粒pET-VP6,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达重组VP6蛋白(rVP6)。rVP6占菌体总蛋白的27.4%。rVP6经纯化后免疫兔,获得动物免疫血清抗体。Western blot检测结果显示,表达的rVP6能被抗-rVP6兔血清抗体特异性识别,能被抗-SA11和抗-Wa的兔免疫血清抗体特异性识别。免疫荧光结果显示MA104细胞中的RVVP6抗原在RV感染3h后即可观察到,在12h左右荧光强度达到最高。病毒的VP6蛋白大部份散布于细胞质间,主要以颗粒状的形式分布。中和实验结果显示,抗-rVP6的兔血清抗体具有中和RV SA11和Wa株病毒的中和病毒感染活性。这些结果为明确A组轮状病毒VP6的生物学和免疫学特性及其在RV亚单位疫苗应用开发中的价值提供了理论实验基础。

关键词： a组人轮状病毒 VP6 重组表达免疫原性免疫荧光

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

a组人轮状病毒流行病学及疫苗研究进展

引用

疾病控制杂志 2002年第2期6卷 136-139页

作者：童志礼方肇寅中国协和医科大学协和公共卫生学院，北京100021 中国预防医学科学院病毒学研究所，北京100052

a组人轮状病毒 (group A hum an rotavirus,HRV)是世界范围内婴幼儿重症腹泻的主要病因。本文在介绍 HRV结构和特性的基础上 ,对世界范围内 HRV血清型流行病学特征以及 HRV疫苗研究现状和趋势分别作了综述。

关键词： a组人轮状病毒流行病学研究进展疫苗婴幼儿重症腹泻

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

TB-Chen株轮状病毒NSP5/NSP6及基因型的初步研究

引用

病毒学报 2009年第5期25卷 349-354页

作者：文喻玲李传印范耀春张艳魏海涛陈元鼎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

TB-Chen病毒是一株分离自中国胃肠炎患儿的A组轮状病毒。研究结果表明,TB-Chen病毒的NSP5和NSP6由第10基因组节段编码,该节段全长816bp。NSP5含200个氨基酸,由第22~624位核苷酸（nt）编码,预测分子量为21.9 kD,等电点为7.86。NSP6含92... 详细信息

TB-Chen病毒是一株分离自中国胃肠炎患儿的A组轮状病毒。研究结果表明,TB-Chen病毒的NSP5和NSP6由第10基因组节段编码,该节段全长816bp。NSP5含200个氨基酸,由第22~624位核苷酸（nt）编码,预测分子量为21.9 kD,等电点为7.86。NSP6含92个氨基酸,由第80~355位nt编码,预测分子量为11 kD,等电点为9.65。对编码NSP5和NSP6的ORF核苷酸序列的分子进化分析结果表明,A组RV的NSP5至少可分为7个不同的基因型（H1~H7型）,TB-Chen株NSP5属于H2型;NSP6至少可分为8个基因型（h1~h8型）,TB-Chen株NSP6属于h2型。这是首个对A组人RV的NSP6基因分型的研究结果的报道,并且我们建议NSP6的基因型以英文字母＂h＂代表,如TB-Chen株的NSP5/NSP6基因型为H2h2,69M株的NSP5/NSP6基因型为H7h7,Wa株与KU株的NSP5/NSP6基因型为H1h8。

关键词： a组人轮状病毒 NSP5 NSP6 分子进化基因型分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

中国不同地区A、B组轮状病毒分离株VP7基因序列的比较分析

中国不同地区A、B组轮状病毒分离株VP7基因序列的比较分析

引用

作者：吕新辉山东大学

学位级别：硕士

目的：研究从我国大庆地区婴幼儿腹泻临床粪便标本中分离的一株a组人轮状病毒阳性毒株（命名为DQ-1株）VP7基因的基因分型，对DQ-1株VP7基因序列和糖蛋白VP7的蛋白质结构进行分析，并与已测序同血清型标准株和国内外地方株VP7基因序列... 详细信息

目的：研究从我国大庆地区婴幼儿腹泻临床粪便标本中分离的一株a组人轮状病毒阳性毒株（命名为DQ-1株）VP7基因的基因分型，对DQ-1株VP7基因序列和糖蛋白VP7的蛋白质结构进行分析，并与已测序同血清型标准株和国内外地方株VP7基因序列进行序列比对。方法：通过RT-PCR技术扩增人A组轮状病毒DQ-1株VP7全长基因，并将RT-PCR产物连接到pMD18-T载体，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，在含有氨苄青霉素的LB琼脂培养基上培养，形成单菌落后挑取白色菌落进行检测，从中筛选出两个PCR阳性菌落，并提取质粒，双酶切鉴定，最后利用通用引物进行测序。利用DNAStar软件对DQ-1株VP7基因测序序列与其他A组轮状病毒株VP7基因序列进行同源性比较；用RNAstructure4.4软件绘制DQ-1株VP7基因的二级结构；用Predictprotein软件对DQ-1株糖蛋白VP7蛋白结构进行分析。结果： DQ-1株VP7基因与同型的我国已测序G1型地方株T73、R96-197株基因序列同源性均为97.6％，与G1型标准株Wa株核苷酸序列同源性为92.9％，与G2血清型代表株DS-1株基因序列同源性为73.8％，与G3血清型代表株SA11株核甘酸序列同源性为75.6％，与G4血清型代表株J-4621株（78.1％）同源性也不高；其VP7基因mRNA可折叠多达20个发卡结构。DQ-1株VP7蛋白是由354个氨基酸组成的多肽，含有2个潜在的糖基化位点和多个磷酰化位点；DQ-1株氨基酸序列与T73、R96-197株同源性都达97.5％，与Wa株达94.6％，而与其它型DS-1株、SA11株和J-4621株分别仅为74.4％、79.4％和75.2％。因此，我们推定DQ-1株属于G1血清型。结论： DQ-1株VP7基因序列与已测序我国G1型地方株VP7基因序列几乎没有差别，而与G1型标准株VP7基因序列存在细微差异，这为我国人A组轮状病毒疫苗的引进和研制提供了分子生物学依据。目的：克隆中国不同地区四个B组成人腹泻轮状病毒株结构蛋白VP7基因，通过测序得到其核苷酸序列和氨基酸序列，比较与其它B组轮状病毒毒株基因和氨基酸序列同源性，从而进一步分析我国不同地区流行的B组成人腹泻轮状病毒毒株之间的系统进化关系。方法：参照文献设计引物，对中国不同地区流行的4株B组轮状病毒株进行RT-PCR，并将RT-PCR产物克隆到PCRTMⅡ载体，转化***感受态细胞，提取转化菌质粒经限制性内切酶HamHⅠ和BglⅡ双酶切分析，从中筛选阳性重组质粒进行测序，测序结果采用DNAStar6.0进行多重序列比对分析，并与B组轮状病毒代表株和其它已测序地方株的核苷酸及氨基酸序列进行同源性比较，绘制系统遗传进化树。结果：本研究获得的4株B组成人腹泻轮状病毒株核苷酸序列同源性为97.3％～98.8％，氨基酸序列同源性为95.2％～99.3％之间；与B组成人腹泻轮状病毒代表株ADRV核苷酸序列同源性为98.2％～100％，氨基酸序列同源性为97.4％～100％；与国外B组成人腹泻轮状病毒株印度、孟加拉国株核苷酸序列同源性为90.1％～92.5％，氨基酸序列同源性为92.3％～95.6％。结论：研究表明所有B组成人腹泻轮状病毒毒株均属于同一血清型，这为成人腹泻轮状病毒的流行病学监测以及将来研制成人腹泻轮状病毒疫苗提供了分子生物学依据，同时本研究可以从分子病毒学理论上证明“病毒是以居群的形式存在的”和“病毒的居群内部存在一个’差异谱’”的说法。

关键词： a组人轮状病毒 VP7结构蛋白序列比较蛋白质结构基因进化树 B组成人腹泻轮状病毒结构蛋白 VP7基因序列分析系统进化树

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究

A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究

引用

作者：李传印中国协和医科大学

学位级别：硕士

轮状病毒(rotavirus,RV)属呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),是引起人类、哺乳动物类和鸟类腹泻的主要病原体。RV基因组由11个的双链RNA片段组成,分别编码6个结构蛋白(VP1,VP2,VP3,VP4,VP5,VP6)和6个非结构蛋白(NSP1,NSP2,NSP3,NSP4,NSP5/NSP6)。RV病毒颗粒是由三层衣壳组成的二十面体结构,内层(核心)颗粒由VP2以及RNA依赖的RNA聚合酶(VP1)和mRNA帽子结构催化酶(VP3)。双层颗粒由VP6蛋白形成的中间层包裹核心颗粒形成的,双层颗粒可以直接合成病毒mRNA。最外层衣壳由VP4和VP7组成。 NSP5与NSP6由同一基因片段编码,NSP6蛋白由包含在NSP5读码框内的另一个读码框编码,大多数病毒中NSP6由92个氨基酸组成。我们对RV NSP6蛋白了解很少。为了研究NSP6的特性,本研究以a组人轮状病毒TB-Chen株病毒NSP5全基因为模板,经PCR,基因重组,将NSP6的编码基因插入到pET载体DNA中构建了表达质粒pET-NSP6,并在大肠杆菌中进行了重组表达。研究结构表明,重组表达的NSP6(rNSP6)量占菌体中总蛋白的34.2%。对rNSP6进行了蛋白纯化,动物免疫研究和在原核大肠杆菌中表达的rNSP6、在Wa或SA11感染的真核MA104细胞中NSP6的合成及亚细胞分布和免疫学性质的研究。结果表明,NSP6可在大肠杆菌细胞中高效表达;rNSP6可诱导豚鼠产生高效价的特异性血清抗体,抗rNSP6豚鼠血清抗体可特异性识别重组表达的rNSP6自身蛋白,可特异性识别菌体细胞中表达的rNSP6和SA11及Wa病毒感染的MA104细胞中合成的NSP6蛋白。进一步研究表明,SA11株和Wa株感染的MA104细胞中合成的NSP6在病毒感染细胞后3h就可以检测到,在12h表达量达到最高,在细胞中呈弥散状分布于细胞质中,并主要积聚在细胞核的周围,没有观察到毒质体样(Viroplasm-like)的结构。本研究结果对深入认识RV NSP6的结构与功能以及生物学免疫学性质奠定了良好的基础。

关键词： a组人轮状病毒 NSP6 基因克隆和重组表达免疫原性亚细胞分布

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

改进探针标记法斑点杂交在轮状病毒VP7分型中的应用

引用

中国循证儿科杂志 2009年第5期4卷 436-441页

作者：董慧瑾钱渊张又陈冬梅赵林清刘立颖首都儿科研究所病毒研究室北京市感染与免疫中心实验室北京100020

目的建立一种更加简便的a组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR... 详细信息

目的建立一种更加简便的a组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV5种常见型别(G1～4,G9型)的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT-PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析。结果建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10pg。200份PAGE阳性标本中162份RT-RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9%),G9型35例(21.6%),混合感染19例(11.7%),杂交未分出型2例(1.2%),未检测到G4型HRV。结论本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用。通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染。

关键词： a组人轮状病毒地高辛斑点杂交 G基因型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

1979～1986年云南省婴幼儿急性胃肠炎中轮状病毒及其流行病学研究

引用

中华实验和临床病毒学杂志 1991年第2期5卷 168-172页

作者：陈元鼎孙茂盛丁雪凤戴国珍万新邦庞其方徐维民陈世德谢学礼郭仁 650107 广州市卫生防疫站河南省卫生防疫站同济大学昆明医学院第一附属医院

对1979年10月至1986年云南省七个地、市（县）11家医院儿科住院部1903例婴幼儿急性胃肠炎中的A组轮状病毒及其流行病学进行的研究结果表明，轮状病毒是云南地区婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体，在婴幼儿胃肠炎中的检出率为59.6%；>6... 详细信息

对1979年10月至1986年云南省七个地、市（县）11家医院儿科住院部1903例婴幼儿急性胃肠炎中的A组轮状病毒及其流行病学进行的研究结果表明，轮状病毒是云南地区婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体，在婴幼儿胃肠炎中的检出率为59.6%；>6～24月龄患儿组中的检出率显著高于6月龄以下（包括6月）患儿组（P<0.001）；轮状病毒引起的胃肠炎全年均有流行，其高峰期为10月至1月；云南地区以流行第二亚组即 "长型" 轮状病毒为主。

关键词：婴幼儿急性胃肠炎 a组人轮状病毒中国云南省

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：