目的观察三株弥漫大B细胞性淋巴瘤（Diffuse large B celllymphoma DLBCL）细胞株中akt及磷酸化akt（pakt，phospha-akt）表达状态及其对DLBCL细胞生物学行为的影响；探讨DLBCL细胞中akt调控细胞周期的可能机制；观察PI3K抑制剂LY294002...
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目的观察三株弥漫大B细胞性淋巴瘤（Diffuse large B celllymphoma DLBCL）细胞株中akt及磷酸化akt（pakt，phospha-akt）表达状态及其对DLBCL细胞生物学行为的影响；探讨DLBCL细胞中akt调控细胞周期的可能机制；观察PI3K抑制剂LY294002对DLBCL化疗增敏作用；观察akt激活状态与BCL6表达的关系及可能的调控机制。
方法分别采用PI3K抑制剂LY294002、mTOR（mammalian target ofRapamycin）抑制剂Rapamycin抑制PI3K／akt信号传导通路，采用胰岛素刺激PI3K／akt信号传导通路；采用Western blotting检测DLBCL细胞株ly1、ly8、ly10在不同状态下akt、pakt、pS6K1、pGSK3、cyclinD1、p27Kip1、p21WAF1、peIF4G、peIF4E和BCL6的表达；应用阿霉素（doxorubicin）与LY294002联用探讨LY294002在DLBCL中的化疗增敏效果；采用流式细胞术结合PI单染分析细胞周期、结合Annexin V-FITC染色检测细胞凋亡、结合Brdu法观察细胞增殖状态的改变。
结果（1）三株DLBCL细胞株在不同的培养条件下均显示有pakt，即akt呈活化状态，ly8和ly10在10％FBS培养下pakt水平高于无血清培养，而ly1相反，在无血清培养下pakt略高于有血清培养；（2）在有血清培养下，LY294002可明显降低三株细胞pakt水平，并显示S期细胞明显减少（P＜0.05），G0-G1期细胞增加，增殖细胞比例显著降低（P＜0.05），以细胞株ly8、ly10尤为明显，但凋亡细胞无明显增加（P＞0.05）；（3）在有血清培养下，胰岛素都可以提高akt磷酸化水平，但并不能引起DLBCL细胞株细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖等细胞生物学行为变化（P＞0.05）；（4）Rapamycin可以明显降低S6K1磷酸化水平，但提高了akt磷酸化水平（P＜0.05），亦未引起DLBCL细胞株细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖等的细胞生物学行为改变（P＞0.05）；（5）三株DLBCL细胞株在LY294002作用后pGSK3，p27KIP1表达显著增高（P＜0.05）、cyclinD1表达显著降低（P＜0.05），p21WAF1表达不受LY294002作用的影响，LY294002作用前后三株细胞中均无表达；（6） LY294002预处理序贯使用doxo组中细胞凋亡的发生率比单独使用LY294002、doxo或同时联合使用LY294002、doxo均明显提高，在24h、48h、72h（ly1）或48h、72h（ly8）或24h（ly10）差异均呈显著性（P＜0.05）；（7）在有血清培养下，LY294002在0到4小时可明显降低细胞中pakt水平（P＜0.05），BCL6在2小时出现显著降低（P＜0.05），peIF4G持续降低（P＜0.05），pmTOR变化不明显（P＞0.05），而eIF4E在30分钟后出现显著磷酸化；Rapamycin作用后可明显降低细胞中pS6K1水平（P＜0.05），BCL6在1／2小时就出现显著降低（P＜0.05），peIF4G在1／2小时出现显著降低随后升高（P＜0.05），eIF4E在30分钟后出现显著磷酸化。
结论（1） LY294002、Rapamycin和胰岛素能有效地调控PI3K／akt／mTOR信号传导通路；（2） akt活化在DLBCL的发生中可能起重要作用，它与细胞周期和细胞增殖密切相关，与细胞凋亡无显著相关；（3）akt主要通过p27Kip1和cyclinD1控制细胞周期的分布；（4） PI3K抑制剂LY294002对doxo诱导DLBCL细胞凋亡的促进作用，提示其可能是DLBCL治疗中一潜在具有较好的化疗增敏作用的分子靶向药物；（5） akt／mTOR信号通路可能通过调节翻译起始因子eIF4E和eIF4G的磷酸化水平调控BCL6翻译表达。
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