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靶向SARS-CoV-2棘突蛋白中独特b细胞抗原表位的鲨鱼单域抗体的研制

中国人兽共患病学报 2025年第1期41卷 32-39页

作者：王越沈立军方权张锋罗永能杭州医学院基础医学与法医学院杭州310013 杭州医学院检验医学院杭州310013 杭州医学院临床医学院杭州310013

目的制备特异性识别SARS-CoV-2棘突蛋白中独特b细胞抗原表位的鲨鱼单域抗体,并探究其在靶向SARS-CoV-2棘突蛋白S的免疫学检测中的作用。方法根据SARS-CoV-2棘突蛋白独特b细胞抗原表位序列人工合成多肽S9,与载体蛋白KLH偶联后对条纹斑竹... 详细信息

目的制备特异性识别SARS-CoV-2棘突蛋白中独特b细胞抗原表位的鲨鱼单域抗体,并探究其在靶向SARS-CoV-2棘突蛋白S的免疫学检测中的作用。方法根据SARS-CoV-2棘突蛋白独特b细胞抗原表位序列人工合成多肽S9,与载体蛋白KLH偶联后对条纹斑竹鲨进行背部皮下免疫。尾静脉采血并分离外周血淋巴细胞,从中提取总RNA后逆转录为cDNA,以cDNA为模板扩增条纹斑竹鲨vNAR片段,与载体pComb3XSS连接构建噬菌体文库。从噬菌体文库中淘选识别该抗原表位的阳性克隆。将抗体基因克隆至pET-28a构建表达载体,诱导大肠杆菌原核表达并纯化获得鲨鱼单域抗体,分别应用于Wb、ELISA和IFA等方法检测SARS-CoV-2棘突蛋白。结果共获得1个鲨鱼单域抗体克隆T01。重组表达并纯化的鲨鱼单域抗体T01与多肽S9结合的亲和力良好,EC50为(2.050±0.064)nmol/L且可特异性结合棘突蛋白的NTD片段。Wb检测显示鲨鱼单域抗体T01能特异性地识别重组SARS-CoV-2棘突蛋白S1片段,而与其他6种感染人的冠状病毒的重组棘突蛋白S1片段没有交叉反应;IFA检测提示鲨鱼单域抗体T01可特异性地结合瞬间表达于HEK293细胞内的SARS-CoV-2棘突蛋白。结论成功制备一株靶向SARS-CoV-2棘突蛋白中独特b细胞抗原表位的鲨鱼单域抗体,为新型冠状病毒抗原检测提供了有效工具。

关键词：新型冠状病毒棘突蛋白 b细胞抗原表位条纹斑竹鲨单域抗体

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b细胞抗原表位鉴定方法的研究进展

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中国免疫学杂志 2024年第6期40卷 1329-1334页

作者：伍春平尹苗陈希文四川生猪重大疫病监测与防控工程研究中心绵阳621000

抗原表位是抗原决定其抗原性的基础,是诱导机体产生免疫应答的最小功能单位。b细胞抗原表位研究对于新型疫苗和治疗性药物的研发以及诊断试剂的开发具有重要意义。本文总结了近几年应用b细胞抗原表位研究的技术,并分析了各种技术的优缺点。

关键词： b细胞抗原表位免疫筛选鉴定

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b细胞抗原表位预测方法的研究进展

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中国畜牧兽医 2016年第1期43卷 63-67页

作者：马凡舒张蕾王洋孙彦刚闫喜军中国农业科学院特产研究所长春130112

抗原表位是抗原分子的主要功能单位。b细胞抗原表位的准确定位对疫苗设计、诊断试剂的研发及高通量抗体的制备均具有重要意义。作者对目前常用的b细胞线性表位预测方法和b细胞构象表位预测方法进行概述,并对不同预测方法进行比较,旨在... 详细信息

抗原表位是抗原分子的主要功能单位。b细胞抗原表位的准确定位对疫苗设计、诊断试剂的研发及高通量抗体的制备均具有重要意义。作者对目前常用的b细胞线性表位预测方法和b细胞构象表位预测方法进行概述,并对不同预测方法进行比较,旨在为病原微生物抗原表位研究提供一定的理论参考。

关键词： b细胞抗原表位线性表位构象表位表位预测

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Arg77和Glu80定点突变同时去除葡激酶中的T和b细胞抗原表位(英文)

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微生物学报 2011年第5期51卷 692-703页

作者：徐瑞光贺进田贾锴陈希刘建伟朱科河北师范大学生命科学学院石家庄050016 石家庄制药集团河北中润制药技术有限公司石家庄05004l

【目的】对葡激酶的T和b细胞抗原表位重叠的关键氨基酸Arg77和Glu80进行定点突变以降低葡激酶的免疫原性。【方法】基于Arg77和Glu80的溶剂可及表面积设计葡激酶的突变体;突变体在大肠杆菌DH5α中进行表达。经过三步层析法纯化后,分析... 详细信息

【目的】对葡激酶的T和b细胞抗原表位重叠的关键氨基酸Arg77和Glu80进行定点突变以降低葡激酶的免疫原性。【方法】基于Arg77和Glu80的溶剂可及表面积设计葡激酶的突变体;突变体在大肠杆菌DH5α中进行表达。经过三步层析法纯化后,分析突变体的纤溶活性和免疫原性。【结果】免疫学实验提示,葡激酶导致Th2免疫反应;Glu80突变为丙氨酸和丝氨酸减少了溶剂可及表面积,同时去除了部分T和b细胞抗原表位;Arg77突变为天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸仅去除了部分T细胞抗原表位;6个组合突变体中,Sak(R77Q/E80A)和Sak(R77Q/E80S)有效去除了部分b和T细胞抗原表位,降低了葡激酶的免疫原性;Sak(R77Q/E80A)and Sak(R77Q/E80S)的纤溶活性和催化效率与r-Sak相当。

关键词：葡激酶 T细胞抗原表位 b细胞抗原表位免疫原性蛋白质工程

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重组牛乳源金黄色葡萄球菌GapC蛋白优势b细胞抗原表位的预测和筛选

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生物技术通报 2023年第5期39卷 306-313页

作者：陈晓萌张雪静张欢张宝江苏艳新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

旨在表达牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)GapC蛋白并对其b细胞抗原表位进行预测与鉴定,本研究利用实验室分离鉴定的***分离株15119扩增GapC基因并构建重组表达质粒pET-28a-GapC,诱导纯化得到分子量为44 kD重组蛋白GapC,以... 详细信息

旨在表达牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)GapC蛋白并对其b细胞抗原表位进行预测与鉴定,本研究利用实验室分离鉴定的***分离株15119扩增GapC基因并构建重组表达质粒pET-28a-GapC,诱导纯化得到分子量为44 kD重组蛋白GapC,以此免疫新西兰大白兔,获得特异多克隆抗体。利用生物信息学方法,对GapC蛋白的二级及三级结构进行分析,预测其b细胞抗原表位,并利用特异性抗体对筛选的表位进行鉴定。结果表明,GapC蛋白具有良好的免疫原性,筛选出7个线性b细胞抗原表位,利用兔抗重组GapC蛋白多克隆抗体鉴定得到了PL 5(^(221)IPEIDGKLDGGAQRVP^(236))多肽和PL 7(^(264)KNASNESFGYTEDEIVSSDVVGM^(286))2个优势b细胞表位。本研究成功制备了GapC蛋白,预测并鉴定了2个优势抗原表位,为其嵌合表位疫苗的开发提供了技术支持。

关键词：牛源金黄色葡萄球菌 GapC蛋白表达 b细胞抗原表位预测与鉴定

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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP3蛋白空间结构及其b细胞抗原表位的预测

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1106-1111页

作者：费东亮毛靖宇宋英今马鸣潇辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州121001 赤峰市翁牛特旗医院检验科内蒙古赤峰024500 天津大学农业与生物工程学院天津300072

目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSbV)LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其b细胞抗原表位。方法采用RT-PCR法从感染CSbV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶... 详细信息

目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSbV)LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其b细胞抗原表位。方法采用RT-PCR法从感染CSbV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶切鉴定并测序,通过与SbV-KOR、CSbV-UK株VP3基因序列的比对,获得LN-QY株VP3基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列,建立VP3蛋白的3D结构。在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP3结构蛋白的空间构象较规则,其可能的b细胞抗原表位区域位于4个区域:25-50,101-109,112-120,250-268氨基酸区段,其中,可能出现抗原表位的2个区域在100-150和250-300氨基酸区段,应作为抗原表位研究的重点区域。结论预测了CSbV LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其b细胞抗原表位,为CSbVVP3蛋白单克隆抗体的制备以及表位疫苗的设计奠定了理论基础。

关键词：中蜂囊状幼虫病毒 VP3结构蛋白空间结构 b细胞抗原表位预测

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犬瘟热病毒N蛋白的b细胞抗原表位预测

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中国兽医学报 2014年第1期34卷 10-16页

作者：张海雷白换力薛慧亮李志萍苏红艳唐志文靳朝夏志平吉林大学动物医学学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

将1段犬瘟热病毒N蛋白氨基酸序列（Genbank编号为：AEV77096．1）与Genbank登录的其他氨基酸序列进行比对，分析其同源性；通过DNAStar生物信息学分析软件中的Protean模块及The PredictProteinserver在线蛋白分析工具预测犬瘟热病毒N蛋... 详细信息

将1段犬瘟热病毒N蛋白氨基酸序列（Genbank编号为：AEV77096．1）与Genbank登录的其他氨基酸序列进行比对，分析其同源性；通过DNAStar生物信息学分析软件中的Protean模块及The PredictProteinserver在线蛋白分析工具预测犬瘟热病毒N蛋白的理化性质、二级结构、亲水性、表面可及性、柔韧性、抗原指数、跨膜螺旋、蛋白相互作用位点、蛋白功能位点等特性，并预测其b细胞优势抗原表位。结果显示，犬瘟热病毒N蛋白具有规则的二级结构、亲水性、柔韧性片段多，多处于表面可及性大，抗原指数高，蛋白质相互作用位点区域。潜在的b细胞优势抗原表位为12～18、61～66、243～246、410～415、421～429、434～447、452～456、480～487氨基酸序列。结果表明，本试验预测了犬瘟热病毒N蛋白的b细胞优势抗原表位，为进一步设计犬瘟热病毒的诊断抗原多肽、免疫用抗原多肽和研发血清学检测试剂盒奠定了理论基础。

关键词：犬瘟热病毒生物信息学 b细胞抗原表位

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与SARS-CoV有交叉免疫反应的SARS-CoV-2 S蛋白b细胞抗原表位预测

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生物技术通报 2021年第10期37卷 169-178页

作者：高竞溪高珂星鲁非纪锋郭志刚南京师范大学生命科学学院南京210046

综合预测可与SARS-CoV发生交叉免疫反应的SARS-CoV-2棘突蛋白(S蛋白)优势b细胞抗原表位,为开发SARS-CoV-2和SARS-CoV S蛋白通用表位疫苗和相关单抗奠定基础。采用MEGA5.05中的Neighbor-joining法构建基于SARS-CoV-2 S蛋白氨基酸序列的... 详细信息

综合预测可与SARS-CoV发生交叉免疫反应的SARS-CoV-2棘突蛋白(S蛋白)优势b细胞抗原表位,为开发SARS-CoV-2和SARS-CoV S蛋白通用表位疫苗和相关单抗奠定基础。采用MEGA5.05中的Neighbor-joining法构建基于SARS-CoV-2 S蛋白氨基酸序列的系统发生树;参考SARS-CoV-2毒株与SARS-CoV毒株S蛋白氨基酸序列比对及跨膜分析结果,筛选出二者可能存在的共同抗原表位区段(944-1213aa)。以SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1株为研究对象,其目标区段的亲水性指数、柔性区段、蛋白质表面可能性和抗原指数等参数由DNAStar软件中的Protean模块进行分析预测;结合Phyre2在线工具模拟的空间结构,综合预测可与SARS-CoV发生交叉免疫反应的SARS-CoV-2 S蛋白b细胞优势抗原表位。SARS-CoV-2 S蛋白氨基酸序列与SARS-CoV S蛋白具有最高相似性(77.5%),与其它可感染人类的冠状病毒(MERS-CoV、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-229E)S蛋白存在显著差异,相似性均低于30.3%。Wuhan-Hu-1株S蛋白具有3个疏水核心,可能存在较强的可变性。目标b细胞抗原表位大概率分布于959-966、973-979、1003-1011、1030-1037、1057-1070、1079-1085、1123-1132、1174-1179位氨基酸区段。预测的SARS-CoV-2和SARS-CoV S蛋白共同抗原表位可为通用表位疫苗的设计、单抗的制备、相关药物的快速筛选等工作提供参考。

关键词： SARS-CoV-2 SARS-CoV 棘突蛋白 b细胞抗原表位交叉免疫

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鸭甲型肝炎病毒衣壳蛋白b细胞抗原表位和密码子偏爱性的分析

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中国兽医科学 2012年第11期42卷 1112-1120页

作者：李传峰陈宗艳刘光清中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 国家家禽工程技术研究中心上海200331

为了筛选血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV)衣壳蛋白的优势b细胞抗原表位及其各结构蛋白的最佳宿主表达系统,通过RT-PCR获得DHAV衣壳蛋白的编码基因(P1基因)序列,并分别运用DNAStar和EMbOSS软件分析其b细胞抗原表位区和密码子偏爱性特征,然... 详细信息

为了筛选血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV)衣壳蛋白的优势b细胞抗原表位及其各结构蛋白的最佳宿主表达系统,通过RT-PCR获得DHAV衣壳蛋白的编码基因(P1基因)序列,并分别运用DNAStar和EMbOSS软件分析其b细胞抗原表位区和密码子偏爱性特征,然后进行各结构蛋白抗原性的Western-bolt分析以及与大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较。结果显示,DHAV的优势b细胞抗原表位主要存在于VP1和VP3蛋白,且每种蛋白各包含2个潜在的优势b细胞抗原表位。DHAV 3种结构蛋白基因的ENc值分别为54.631、49.502和45.924。VP3和VP1蛋白与酵母的密码子偏爱性差异最小,VP0蛋白与人的密码子偏爱性差异最小。结果表明,3种结构蛋白密码子出现的频率较为均一。VP1和VP3蛋白均是DHAV基因工程疫苗研制的候选免疫原,且适宜在酵母表达系统中表达,而VP0蛋白更适宜在人源细胞中表达。

关键词：鸭甲型肝炎病毒 b细胞抗原表位密码子偏爱性

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口蹄疫病毒A/WH/09株结构蛋白P1基因的克隆及其b细胞抗原表位的预测

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中国兽医科学 2011年第3期41卷 221-228页

作者：娄慧张中旺陈启伟张永光甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

对口蹄疫病毒(FMDV)A/WH/09株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。结果显示,FMDV A/WH/09株P1基因长2 208bp,包含完整的开放阅读框,编码736个氨基酸,其中VP1长636bp,编码212个氨基酸;VP2长654bp,编码218个氨基酸;VP3长663bp,编... 详细信息

对口蹄疫病毒(FMDV)A/WH/09株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。结果显示,FMDV A/WH/09株P1基因长2 208bp,包含完整的开放阅读框,编码736个氨基酸,其中VP1长636bp,编码212个氨基酸;VP2长654bp,编码218个氨基酸;VP3长663bp,编码221个氨基酸;VP4长255bp,编码85个氨基酸。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行了综合分析,并预测其b细胞的抗原表位分布。结果表明,VP1、VP2和VP3上均有多个区域为b细胞抗原优势表位,VP4上也有少量潜在的b细胞抗原表位。与已鉴定的b细胞抗原表位相比,本试验所用方法预测的结果有较高的准确度,是一种较为先进的表位研究方法。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白P1 测序 b细胞抗原表位

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