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应用MEc-1与HG3细胞株建立慢性淋巴细胞白血病balb/c裸鼠皮下移植瘤的模型

中国实验血液学杂志 2016年第6期24卷 1644-1648页

作者：付春玲龚艳青万艳徐开林徐州医学院徐州医学院附属医院干细胞实验室江苏省血液病研究所江苏徐州221002

目的：通过对免疫缺陷鼠（balb/c）不同部位、不同密度接种人慢性淋巴细胞白血病（cLL）细胞,探索裸鼠皮下移植瘤模型建立的条件。方法：通过慢病毒系统建立稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的人cLL细胞（MEc-1-GFP与HG3-GFP细胞）。首先将M... 详细信息

目的：通过对免疫缺陷鼠（balb/c）不同部位、不同密度接种人慢性淋巴细胞白血病（cLL）细胞,探索裸鼠皮下移植瘤模型建立的条件。方法：通过慢病毒系统建立稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的人cLL细胞（MEc-1-GFP与HG3-GFP细胞）。首先将MEc-1-GFP细胞（5×10^7/ml）分别接种于裸鼠的前肢腋下、腹部及后肢腋下,观察不同接种部位对cLL细胞成瘤率的影响;其次将同等密度的MEc-1-GFP、HG3-GFP细胞（5×10^7/ml）分别接种于裸鼠的前肢腋下部位,观察两种细胞的成瘤时间及成瘤率。再次以同样接种方法,将不同密度的MEc-1-GFP与HG3-GFP细胞（1×10^7/ml与5×10^7/ml）分别接种于裸鼠的前肢腋下,观察不同接种密度的细胞成瘤时间及成瘤率。观察5周后,通过眼球取血获得外周静脉血,经EDTA抗凝及溶血素处理后,用流式细胞术检测GFP阳性的cLL细胞;同时,将荷瘤鼠处死,剥离肿瘤组织并制备冰冻切片,进行组织病理学检查。结果：成功获得稳定表达标记蛋白GFP的MEc-1与HG3细胞株;接种后裸鼠的前肢腋下、腹部及后肢腋下都形成了皮下移植瘤,且前肢腋下更有利于移植瘤的形成;接种密度为5×10^7/ml的MEc-1-GFP和HG3-GFP细胞均可形成皮下移植瘤,且5周后的成瘤率均为80%;接种密度分别为1×10^7/ml与5×10^7/ml MEc-1-GFP与HG3-GFP细胞均可有效地形成皮下移植瘤。流式细胞术检测显示,2组荷瘤鼠外周血中均未见GFP阳性的MEc和HG3细胞,组织病理检查表明cLL细胞向腹腔转移。结论：利用cLL细胞株MEc-1-GFP和HG3-GFP建立了cLL裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究cLL的发病机制提供了实验工具。

关键词：慢性淋巴细胞白血病 MEc-1-GFP、HG3-GFP细胞 balb/c裸鼠模型皮下移植瘤

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鼠巨细胞病毒感染裸鼠肝脏损伤模型的建立

鼠巨细胞病毒感染裸鼠肝脏损伤模型的建立

引用

作者：宋孙莉江苏大学

学位级别：硕士

目的巨细胞病毒（cytomegalovirus,cMV）是一种疱疹病毒,在世界上感染非常普遍,本研究是为了建立鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,McMV）感染balb/c裸鼠肝脏损伤的模型,为人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HcMV）感染免疫缺... 详细信息

目的巨细胞病毒（cytomegalovirus,cMV）是一种疱疹病毒,在世界上感染非常普遍,本研究是为了建立鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,McMV）感染balb/c裸鼠肝脏损伤的模型,为人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HcMV）感染免疫缺陷患者所致的肝损伤提供研究平台。方法将10只雄性4周龄balb/c裸鼠随机分为2组,每组5只。实验组裸鼠用半数细胞感染剂量(median tissue culture infective dose,TcID50)为10-6.5/0.1 m L的病毒悬液250μL经腹腔注射;对照组裸鼠腹腔接种等量DMEM培养液。每日观察记录裸鼠行为表现及进食情况,第7天麻醉后处死所有裸鼠,无菌分离其肝脏,通过测定肝组织谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、荧光定量PcR检测McMV DNA拷贝数、苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE staining）等方法,观察裸鼠肝脏组织的损伤程度。采用独立t检验比较两组间的进食量和ALT。结果实验组裸鼠的反应变得迟钝、呼吸频率加快,而对照组裸鼠表现无异常;实验组裸鼠进食量明显少于对照组（t=-3.738,P=0.003）,喝水量也明显少于对照组（t=-4.853,P=0.000）;实验组裸鼠肝脏受损率为100%,所有实验组的裸鼠均出现了不同程度的腹水;测定的肝脏ALT值较对照组有明显上升（t=5.361,P=0.001）;实验组实时荧光定量PcR检测McMV DNA为阳性,而对照组结果为阴性;实验组裸鼠肝脏病理切片HE染色法可见大量炎症细胞浸润,肝细胞嗜酸性变,可见不规则的病毒包涵体,而对照组肝组织病理切片HE染色显示结构正常。结论经腹腔注射250μL McMV病毒悬液7天后成功构建了balb/c裸鼠肝脏损伤的模型。

关键词：鼠巨细胞病毒肝脏损害 balb/c裸鼠模型

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