检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：侯雨菲吉林大学

学位级别：硕士

乳腺癌作为一种女性常见的恶性肿瘤,它的发病率和死亡率呈现逐年上升的趋势,随着人们对放疗这一治疗方法认知的不断深入,还有放疗技术的不断提高改善以及放疗的适应范围越来越广,目前放射治疗已经成为乳腺癌的主要治疗手段之一。自噬是... 详细信息

乳腺癌作为一种女性常见的恶性肿瘤,它的发病率和死亡率呈现逐年上升的趋势,随着人们对放疗这一治疗方法认知的不断深入,还有放疗技术的不断提高改善以及放疗的适应范围越来越广,目前放射治疗已经成为乳腺癌的主要治疗手段之一。自噬是细胞内的一种清除受损衰老的蛋白质或细胞器的自我消化的过程,近年来自噬与癌症之间的关系成为研究热点,自噬在肿瘤的发生发展过程中是把双刃剑,既可能在缺氧或饥饿时起到保护细胞的作用,也可能发生自噬性细胞死亡。Bcl-2和腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3（bnip3）是Bcl-2家族蛋白的一员,是一种包含BH3结构域的能编码线粒体蛋白的基因。bnip3既能够激活细胞凋亡也能够激活细胞自噬,bnip3的高表达与肿瘤细胞的侵袭转移以及预后密切相关。本研究着重讨论bnip3在电离辐射诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬中的作用,以及关于bnip3在自噬过程中发挥作用的相关机制的研究。目的:以人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,旨在研究bnip3在电离辐射诱导的乳腺癌细胞自噬中发挥的作用以及其可能的相关机制,为肿瘤的靶向治疗提供新途径。方法:（1）本研究选用人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,使用慢病毒感染液构建稳定的bnip3沉默模型（shbnip3）和空载体（shNC）细胞;（2）照射条件:使用X-RAD 320iX深部辐照仪进行X射线照射,电压180千伏,电流20毫安,单次源靶距70厘米,剂量率1.0 Gy/min,本实验照射剂量8Gy;（3）使用CCK8和克隆形成实验来检测细胞生存率以及辐射敏感性;（4）使用Western Blot来检测不同蛋白的表达水平,使用co-IP来检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用;（5）使用流式细胞术来检测细胞内自噬和活性氧的表达情况;（6）使用Western Blot和RT-PCR来检测bnip3沉默模型的沉默效果;（7）使用SPSS软件来进行统计分析,柱状图使用GraphPad软件并用均数±标准差表示,组间比较使用t检验,当P值小于0.05时认为差异具有统计学意义。结果:***3参与电离辐射诱导的MCF-7细胞自噬给予MCF-7细胞8Gy电离辐射,CCK8结果显示,与0Gy组细胞相比,8Gy照射使细胞的生存率明显降低,并且生存率减少的趋势呈时间依赖性;MCF-7细胞经过8Gy照射后,分别在24h和48h两个时间提取细胞中的总蛋白,Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1和MAPLC3及bnip3的表达情况,结果显示,相比于未照射组,细胞经过8Gy照射后,Beclin-1、MAPLC3和bnip3的表达均明显增加,并呈现时间依赖性,即与照射后24h组相比,照射后48h组的三种蛋白表达量更高;活性氧能够诱导自噬的发生,流式细胞术的结果表明,电离辐射不仅能导致MCF-7细胞的自噬增加,还能明显增加MCF-7细胞中的ROS水平。以上结果提示电离辐射诱导ROS产生,增加MCF-7细胞的自噬水平,并且bnip3参与了电离辐射诱导的MCF-7细胞自噬。***3如何调控电离辐射诱导MCF-7细胞自噬在MCF-7细胞中构建稳定的bnip3基因沉默模型,用Western Blot和RT-PCR进行沉默效果的验证,结果显示bnip3沉默模型建立成功,并且shbnip3-2的沉默效果比shbnip3-1的沉默效果要好;给予bnip3沉默模型8Gy的电离辐射:（1）照射后使用CCK8法检测沉默bnip3后细胞存活的情况,结果显示,照射后bnip3沉默组细胞生存率明显高于照射后空载体组细胞的生存率,说明了沉默bnip3能够明显降低电离辐射诱导的细胞死亡;（2）照射后使用克隆形成实验检测沉默bnip3对于细胞辐射敏感性的影响,结果显示,与空载体组相比,沉默bnip3能够明显降低MCF-7细胞的辐射敏感性,增加细胞对于辐射的抗性;（3）照射后使用Western Blot检测沉默bnip3对于电离辐射诱导的细胞自噬的影响,结果显示,与空载体组相比,bnip3沉默模型照射后,MAPLC3-II的表达水平明显增加,bnip3的表达水平同样明显增加,说明了沉默bnip3能够明显增加电离辐射诱导的细胞自噬;（4）流式细胞术的结果表明,电离辐射不仅能导致bnip3沉默模型的自噬增加,还能明显增加bnip3沉默模型中的ROS水平;（5）照射后使用Western Blot检测沉默bnip3对于电离辐射诱导的细胞铁代谢的影响,结果显示,与空载体组相比,bnip3沉默组照射后,Transferrin的表达水平明显升高,FTH1的表达水平明显降低,说明了bnip3参与了铁代谢的调节,并且沉默bnip3能够明显增加电离辐射诱导的细胞铁代谢;（6）使用Western Blot来检测线粒体膜蛋白TOM20的表达情况,沉默BN

关键词：乳腺癌电离辐射自噬 bnip3

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The pro-apoptosis gene,bnip3,is a potential new treatment target of clear cell renal cell carcinoma

The pro-apoptosis gene,BNIP3,is a potential new treatment ta...

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第二十五届全国泌尿外科学术会议

作者： YanxiangShao LiXiang West China Hospital

目的 To investigate the expression and epigenetic regulatory mechanism of bnip3 in clear cell renal cell carcinoma方法mRNA and protein expression of VHL,HIF,VEGF and bnip3 were detected by Q-PCR and western blot in RCC tumor tissues,with bnip3expression was also detected in RCC culture ***3 methylated and deacetylated status were identified by M-PCR and *** RCC cells were treated by demethylation inhibitor or deacetylation inhibitor,proliferation and apoptosis status and bnip3 expression of cells were detected.

关键词： carcinoma renal cell hypoxia-inducible factor(HIF) bnip3 DNA methylation histone deacetylation

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bnip3在椎间盘退变过程中表达及意义

BNIP3在椎间盘退变过程中表达及意义

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作者：王立南昌大学

学位级别：硕士

目的:通过观察退变椎间盘髓核组织中bnip3蛋白的表达情况,探讨其与椎间盘退变的相关性。材料方法:收集2017年2月-2017年8月因腰椎间盘突出症于我院接受椎间孔镜髓核摘除术手术治疗的30例腰椎椎间盘标本,根据腰椎间盘退变的Pfirrmann分... 详细信息

目的:通过观察退变椎间盘髓核组织中bnip3蛋白的表达情况,探讨其与椎间盘退变的相关性。材料方法:收集2017年2月-2017年8月因腰椎间盘突出症于我院接受椎间孔镜髓核摘除术手术治疗的30例腰椎椎间盘标本,根据腰椎间盘退变的Pfirrmann分级分成5个组,采用组织学观察和TUNEL法检查椎间盘组织中的凋亡细胞,对各组椎间盘标本应用Real-time PCR技术和蛋白质印迹法检测髓核组织bnip3的mRNA和蛋白表达量,用Real-time PCR技术检测Bax的mRNA表达量,并分析bnip3表达量、细胞凋亡与Pfirrmann分级之间的关系。结果:(1)组织学观察及TUNEL检测示Pfirrmann分级I级中髓核细胞密度高,偶见少量散在的凋亡细胞,Pfirrmann分级II级中髓核细胞密度较高,见少量凋亡细胞,Pfirrmann分级III中髓核细胞密度较低,见较多凋亡细胞,Pfirrmann分级IV级、V级中髓核细胞密度低,存在大量的凋亡细胞。(2)随着椎间盘退变程度加重,bnip3在mRNA和蛋白水平的表达逐渐增加。(3)随着椎间盘退变程度加重,Bax在mRNA水平的表达逐渐增加。结论:(1)椎间盘髓核细胞密度与椎间盘退变程度有关:(2)椎间盘髓核细胞凋亡是椎间盘髓核细胞密度降低的主要原因之一:(3)bnip3可能参与了椎间盘髓核细胞凋亡和退变,并且bnip3表达量的增加可能促进了椎间盘髓核细胞的凋亡。

关键词：腰椎髓核细胞椎间盘退变 bnip3 细胞凋亡

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bnip3介导锰经线粒体凋亡途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡的研究

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毒理学杂志 2018年第2期32卷 112-117页

作者：黄燕宁王进文巧林黄锦凤广西医科大学第一附属医院神经内科广西南宁530021

目的探讨线粒体蛋白bnip3在锰诱导线粒体依赖的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,经MnCl_2处理24 h后应用透射电子显微镜直接观察MnCl_2作用下SH-SY5Y细胞的凋亡情况,使用流式细胞仪检测SH-SY5Y... 详细信息

目的探讨线粒体蛋白bnip3在锰诱导线粒体依赖的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,经MnCl_2处理24 h后应用透射电子显微镜直接观察MnCl_2作用下SH-SY5Y细胞的凋亡情况,使用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(Δψm),通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测bnip3及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。并使用shRNA将SH-SY5Y细胞中的bnip3沉默,观察bnip3对MnCl_2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、线粒体膜电位丢失(Δψm)及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果 MnCl_2可使线粒体膜电位逐渐丢失(F=49.061,P<0.01)、并使线粒体蛋白bnip3及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达随着MnCl_2浓度的提高而上升(F=334.832,F=299.902,均P<0.01)、明显增加SH-SY5Y细胞的凋亡小体个数,上述差异均有统计学意义。沉默bnip3(F=1.301,P=0.318,t=32.647,P<0.01)可以减少MnCl_2诱导线粒体膜电位的丢失(F=1.786,P=0.252;t=20.290,P<0.01),减少凋亡相关蛋白Caspase-3的表达(F=2.816,P=0.168;t=22.073,P<0.01)并使SH-SY5Y凋亡小体的个数减少,上述差异均有统计学意义。结论在MnCl_2通过线粒体凋亡途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡的过程中bnip3起到了重要作用,这种调控机制可能是锰产生神经毒性的作用机制之一。

关键词：锰 SH-SY5Y细胞细胞凋亡 bnip3 线粒体膜电位

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针刺对HIBD模型大鼠脑组织自噬相关蛋白bnip3、LC3表达的影响

针刺对HIBD模型大鼠脑组织自噬相关蛋白BNIP3、LC3表达的影响

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作者：晁延如广州中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:研究目的:探讨”靳三针”头穴对宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织中bnip3及LC3/Atg8表达的影响,研究针刺”靳三针”头穴对治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的作用机制,并进一步通过加入自噬通路上游蛋白的激活剂及抑制剂... 详细信息

研究目的:研究目的:探讨”靳三针”头穴对宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织中bnip3及LC3/Atg8表达的影响,研究针刺”靳三针”头穴对治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的作用机制,并进一步通过加入自噬通路上游蛋白的激活剂及抑制剂等药物探索其起效通路以及观察针刺通过促进bnip3介导的线粒体自噬在改善新生儿缺氧缺血性脑损伤中发挥的作用强度,为研究新生儿缺氧缺血性脑病的机制研究及临床诊治提供客观科学依据。研究方法:用异氟烷麻醉孕21天母鼠,剖宫后钳夹孕鼠双侧子宫动脉,完全阻断血流供应10 min后娩出小鼠促醒,抢救成功小鼠由代乳鼠喂养至D14,苦味酸标记后称重,分层随机分为模型组,针刺组,激活剂组,抑制剂组,针刺加激活剂组,针刺加抑制剂组六个分组。针刺组,针刺加激活剂组,针刺加抑制剂组均进行针刺干预,其余三组同时进行空抓操作,激活剂组,抑制剂组,针刺加激活剂组,针刺加抑制剂组给予相应药物干预,模型组及针刺组相同时间腹腔注射生理盐水。六组仔鼠出生后第14天开始干预,每天一次,共干预14天,至第28天麻醉后处死取材。每组取3只仔鼠左侧脑组织做电镜检测,右侧脑组织做HE染色,每组取8只仔鼠海马做免疫印迹检测bnip3及LC3的表达情况。研究结果:1.透射电镜:与模型组相比,针刺组,激活剂组,针刺加激活剂组自噬小体增多,抑制剂组,针刺加抑制剂组减少。***染色:与模型组相比,针刺组及针刺加激活剂组细胞数量增多,且形态改善,激活剂组数量增多,抑制剂组及针刺加抑制剂组细胞数量减少且形态未见明显改善。3.各组蛋白含量检测结果:bnip3蛋白表达情况:与模型组相比,针刺组的表达增多,有统计学意义(P<0.05);激活剂组未见明显改变,无统计学意义(P>0.05);抑制剂组表达减少,有统计学意义(P<0.05);与激活剂组相比,针刺加激活剂组表达升高,有统计学意义(P<0.05);与抑制剂组相比,针刺加抑制剂组未见明显的改变,无统计学意义(P>0.05)。LC3蛋白表达情况:与模型组相比,针刺组的表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);激活剂组未见明显改变,无统计学意义(P>0.05);抑制剂组表达减少,有统计学意义(P<0.05);与激活剂组相比,针刺加激活剂组表达升高,有统计学意义(P<0.05);与抑制剂组相比,针刺加抑制剂组未见明显的改变,无统计学意义(P>0.05)。结论:1、针刺可促进神经细胞内自噬小体的增加,并改善线粒体肿胀破损情况,同时矫正细胞核及各类细胞器形态,自噬激活剂也可以增加自噬小体数量,针刺与激活剂同时存在时可较大程度增加神经细胞内自噬小体数量,促进自噬的产生及发挥自噬的细胞保护功能。抑制剂和针刺加抑制均降低自噬小体表达。2、针刺对神经细胞线粒体自噬的激活作用是通过促进bnip3及LC3的表达发挥作用的,抑制剂3-MA则通过抑制bnip3的表达抑制了自噬的过程,继而抑制LC3的表达,使在自噬的通路机制的上游及下游均受到抑制,针刺并不能逆转这种抑制状态,激活剂RAPA其作用靶点为mTOR,在促进自噬的表达上并未通过促进bnip3的表达发挥促进自噬的作用,针刺加激活剂却可以有效地促进bnip3及LC3的表达,提示针刺依赖bnip3介导的线粒体自噬通路发挥促进自噬产生,修复受损神经元,促进脑缺血状态恢复的目的。

关键词：针刺 bnip3 LC3 激活剂抑制剂

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Nutrition deficiency promotes apoptosis of cartilage endplate stem cells in a caspase-independent manner partially through upregulating bnip3

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生物化学与生物物理学报（英文版） 2017年第1期49卷 25-32页

作者： Zhiliang He Luqiao Pu Chao Yuan Min Jia Jian Wang Department of Orthopedics Xinqiao Hospital Third Military Medical University Chongqing 400038 China

Nutrition deficiency is reported to induce apoptosis of chondrocytes and degeneration of cartilage endplate (CEP) in rabbit. Cartilage endplate stem cells (CESCs) are important for the integrity of structure and function of CEP. Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa-interacting protein 3 (bnip3) has been reported to regulate apoptosis, autophagy, and cytoprotection. In this study, we aimed to determine whether nutrition deficiency induces apoptosis of CESCs, and whether or not the bnip3-related pathway is activated in CESCs during nutrition deficiency. CESCs isolated from degenerated human CEP were cultured under normal or nutrition-deficient condition. Then, apoptosis was analyzed by flow cytometry. The expression and intracellular localization of bnip3 were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction, western blot analysis, and immunofluorescence assay, respectively. Mitochondrial membrane potential (MMP) and caspase-3 activity were measured by JC-1 staining and caspase-3 activity assay. Our results showed that nutrition deficiency promotes apoptosis and bnip3 expression in CESCs. Notably, knockdown of bnip3 could partially decrease nutrition deficiency-induced apoptosis of CESCs. In addition, nutrition deficiency could also induce upregulation of bnip3, resulting in mitochondrial translocation of bnip3 and loss of MMP in CESCs in a time-dependent manner. However, nutrition deficiency showed no effects on caspase-3 activity in CESCs. In summary, nutrition deficiency may promote CESC apoptosis partially through upregulating bnip3, which might lead to activation of the bnip3-related pathway and apoptosis of CESCs in a caspase-independent manner.

关键词： cartilage endplate degeneration cartilage endplate stem cells nutrition deficiency apoptosis bnip3

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缺血性心肌病的危险因素筛选及自噬相关蛋白Beclin-1、BNIP3与缺...

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作者：陈雪影贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨缺血性心肌病的相关危险因素,以及自噬相关蛋白Beclin-1、bnip3在心肌表达情况及对缺血性心肌病的独立相关性,为缺血性心肌病的发病机制及其法医学研究提供参考依据。方法:1.缺血性心肌病组(ICM组)选自贵州医科大学法医司法鉴... 详细信息

目的:探讨缺血性心肌病的相关危险因素,以及自噬相关蛋白Beclin-1、bnip3在心肌表达情况及对缺血性心肌病的独立相关性,为缺血性心肌病的发病机制及其法医学研究提供参考依据。方法:1.缺血性心肌病组(ICM组)选自贵州医科大学法医司法鉴定中心于2013年7月至2016年12月接收的尸检案例中被确诊为“缺血性心肌病”(ischemic cardiomyophathy,ICM)的死者(n=80),非缺血性心肌病组(NICM组)为同期接收的尸检案例中经病理组织学检查确认无心肌组织病变的死者(n=122)。收集入选研究对象的临床资料,并对收集的临床数据作基线特征分析和单因素分析。2.利用免疫组化技术和平均光密度检测评估研究对象心肌组织的Beclin-1和bnip3蛋白的表达水平,建立广义线性模型,调整多个混杂因素(包括性别、年龄、身高、体重指数、左心室壁厚度、右心室壁厚度、酗酒史、Gensini评分,心肌梗死史、是否合并高血压、慢性肾病和慢性呼吸系统疾病),分别评估Beclin-1和bnip3对缺血性心肌病发病的独立作用大小;以Beclin-1作为效应修饰因子,运行三组回归模型(原始、调整多个协变量、调整多个协变量以及协变量与效应因子的交互作用项),对bnip3和缺血性心肌病的相关性作分层分析和交互作用检验。结果:本研究表明,***评分(OR=1.1;95%CI:1.0-1.2;P<0.001)、心肌梗死史(OR=1.5;95%CI:1.2-1.8;P<0.001)、左心室壁厚度(OR=1.2;95%CI:1.0-1.5;P=0.048)和右心室壁厚度(OR=1.1;95%CI:1.0-1.3;P=0.041)与缺血性心肌病均存在正相关,是缺血性心肌病的危险因素。***3在心肌细胞的表达和缺血性心肌病的发病呈负相关(OR=0.8;95%CI:0.6,1.0;P=0.016),Beclin-1在心肌细胞中的表达与缺血性心肌病呈正相关(OR=1.20;95%[CI]:1.1-1.3,P<0.001),Beclin-1是BINP3的中介变量,BINP3与ICM的变化趋势在不同Beclin-1的分层中完全不同。结论:***评分增高、心肌梗死史、以及左心室壁厚度、右心室壁厚度的增厚是缺血性心肌病的危险因素。***3是缺血性心肌病的保护因素之一,Beclin-1是缺血性心肌病的独立危险之一,bnip3对缺血性心肌病的作用受Beclin-1的影响。

关键词：缺血性心肌病自噬相关蛋白 bnip3 Beclin-1 广义线性模型

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Isoliquiritin targeting m5C RNA methylation improves mitophagy in doxorubicin-induced myocardial cardiotoxicity

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PHYTOMEDICINE 2025年 136卷 156293页

作者： Fu, Jiaqi Cheng, Li Zhang, Jie Sun, Runjie Yu, Manya Wu, Muyun Li, Suzhen Cui, Xing Shandong Univ Tradit Chinese Med Clin Med Sch 1 Jinan Peoples R China Shandong Univ Tradit Chinese Med Dept Nursing Affiliated Hosp Jinan Peoples R China Shandong Univ Tradit Chinese Med Dept Hematol Affiliated Hosp Jinan Peoples R China Shandong Univ Tradit Chinese Med Ctr Oncol & Hematol Affiliated Hosp 2 Shandong Hosp Integrated Tradit Chinese & Western 1 Jingba Rd Jinan 250001 Peoples R China

Background: Doxorubicin (DOX)-induced myocardial cardiotoxicity (DIC) severely limits its clinical application, and there is no optimal therapeutic agent available. Recent studies revealed that activation of bnip3-mediated mitophagy and the inhibition of m5C RNA methylation played a crucial role in DIC. Isoliquiritin (ISL) has remarkable cardiac protective effect. But its potential mechanisms against DIC still remains unknown. Purpose: To investigate the therapeutic effect and potential mechanism of Isoliquiritin(ISL) on doxorubicin(DOX)induced myocardial cardiotoxicity(DIC). Methods: Bioinformatics analyses and network pharmacology were carried out to identify effective target of ISL against DIC. Molecular docking and surface-plasmon resonance (SPR) were used to confirm the predict. The mechanism of ISL regulating mitophagy through M5C methylation to improve DIC was demonstrated in vitro and in vivo experiments. The methylation modification was verified by MeRIP-qPCR. Cell model of DIC was constructed to evaluate mitochondrial function by measuring cell viability, myocardial enzyme level, mitochondrial quality, mCherry-EGFP analysis and TEM morphometry with the application of mitophagy inhibitor (Baf A1) and inducer (CCCP). Myocardial injury in mice with DIC was assessed by survival rate, myocardial enzyme level, HE staining, echocardiography and detection of mitophagy markers. Results: The decreased level of m5C writer TRDMT1 and mitochondrial marker (bnip3) were chosen for the research. After the docking and SPR verification between ISL and TRDMT1, the improvement of ISL on TRDMT1 and TRDMT1-associated m5C level of bnip3 was identified. In vitro and in vivo experiments showed that the cardiac markers, heart function, and mitochondrial function were recovered after ISL application. Meanwhile, the results manifested that there was blocked autophagy flow indicated by mCherry-EGFP analysis, then the suppressed mitophagy caused the mitochondria damage associated cell

关键词： m5C RNA methylation Doxorubicin Isoliquiritin Mitophagy bnip3 Cardiotoxicity

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The protumorigenic enzyme GPAT2 inhibits arachidonic acid-triggered apoptosis in breast cancer

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LIPIDS IN HEALTH AND DISEASE 2024年第1期23卷 1-10页

作者： Ferremi, Fiorella J. Moscoso, Veronica V. Montanaro, Mauro A. Gonzalez-Baro, Maria R. Cattaneo, Elizabeth R. Univ Nacl La Plata Inst Invest Bioquim La Plata Dr Rodolfo R Brenner Consejo Nacl Invest Cient & Tecn Fac Ciencias Med La Plata Buenos Aires Argentina

BackgroundCancer is a significant health challenge and the leading cause of mortality globally. Tumor cells use multiple mechanisms to acquire their distinctive capacity for uncontrolled proliferation, one of which is the evasion of apoptosis. It has been shown that in breast, colon, and liver cancer, evasion of apoptosis is associated with the overexpression of enzymes that metabolize arachidonic acid (AA) because free AA is a strong inducer of apoptosis. Glycerol-3-phosphate acyltransferase 2 (GPAT2) is a key enzyme in AA metabolism and is highly expressed in breast and colon cancer, where it promotes the development of essential tumor *** this work, a model of GPAT2 silencing in the human breast cancer-derived cell line MDA-MB-231 was used, and the cells were exposed to exogenous AA. The role of GPAT2 in AA-induced cell death was studied using MTT and TUNEL assays and measurements of caspase activity. The underlying molecular mechanism of cell death was assessed by *** results showed that AA reduced cell viability only in GPAT2-silenced cells, and that this cell death was a consequence of an apoptotic process involving bnip3 overexpression. Additionally, it was demonstrated that GPAT2 silencing triggered a compensatory mechanism by overexpressing other genes involved in AA utilization for eicosanoid *** concluded that GPAT2 expression is necessary to prevent AA-induced apoptotic cell death in MDA-MB-231 cells and that the overexpression of other AA-metabolizing genes is not sufficient to compensate for the lack of GPAT2 and prevent apoptosis.

关键词： GPAT2 Arachidonic acid Apoptosis Breast cancer Cell viability bnip3

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MicroRNA-145靶向bnip3通过Notch信号通路促进神经胶质瘤细胞凋亡

MicroRNA-145靶向BNIP3通过Notch信号通路促进神经胶质瘤细胞凋亡

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作者：杜妍安徽医科大学

学位级别：硕士

神经胶质瘤是在临床神经外科工作中是最为常见的的颅内原发性恶性肿瘤,发病率死亡率极高。在我国,神经胶质瘤占居颅内肿瘤发病率的首位。近年来,神经胶质瘤的发病率主要以青壮年为主。神经胶质瘤主要包含少突胶质细胞瘤、室管膜瘤、髓... 详细信息

神经胶质瘤是在临床神经外科工作中是最为常见的的颅内原发性恶性肿瘤,发病率死亡率极高。在我国,神经胶质瘤占居颅内肿瘤发病率的首位。近年来,神经胶质瘤的发病率主要以青壮年为主。神经胶质瘤主要包含少突胶质细胞瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质细胞瘤以及星形胶质细胞瘤等类型。按照病理组织学特点,神经胶质瘤可以分为4级,级别越高,恶性程度越高。其中星形细胞瘤和毛细胞型细胞瘤为低分级胶质瘤,而胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤为高分级胶质瘤。由于对其发病机制尚不明确,目前的治疗手段难以治愈。最主要的治疗手段为手术切除,但由于其分化差、增殖快、侵袭性强,手术方式无法完全切除肿瘤,导致其术后复发率高,生存期短。因此寻找导致神经胶质瘤发生发展的因素,并加以诱导改善,是目前研究神经胶质瘤的重点之一。随着分子生物学的发展,特异分子的靶向治疗成为神经胶质瘤治疗的热点并取得了一定的成果。许多研究发现,MicroRNA(miRNA)在多种肿瘤疾病中,都具有一定的调控作用。据文献报道,miRNA可以调控与多种肿瘤发生发展相关的细胞因子,相反,肿瘤的发生发展又能影响多种miRNA的表达改变。近年来,大量文献显示,miR-145与神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭密切相关,但是miR-145对神经胶质瘤细胞凋亡的作用鲜有报道,这值得更深层次的探讨。本实验探讨了miR-145在神经胶质瘤发生过程中表达情况,并进一步研究miR-145对神经胶质瘤细胞的凋亡影响以及其中的分子机制。研究内容如下:(1)mi R-145和bnip3在神经胶质瘤过程中的表达首先我们从临床上收集了神经胶质瘤样本以及正常脑组织样本,通过qRT-PCR检测miR-145的表达情况,其次我们采用脑立体定位术,颅内注射大鼠C6细胞,取脑组织进行HE染色,同时采用核磁共振(MRI)监测,共同鉴定模型构建成功。通过qRT-PCR检测脑组织以及U87/U251两种神经胶质瘤细胞株中miR-145的表达,同时采用免疫组化,qRT-PCR,Western blot观察bnip3的表达情况。提示在神经胶质瘤中,miR-145呈现低表达,而bnip3呈现高表达。(2)mi R-145对U87/U251神经胶质瘤细胞凋亡的影响在U87/U251细胞中,采用miR-145 mimics建立miR-145过表达的细胞模型,紧接着采用Hoechst 33342染色,Tunel染色,流式细胞术检测细胞凋亡情况以及Western blot检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果提示:过表达miR-145可以促进神经胶质瘤细胞的凋亡。(3)bnip3对U87/U251神经胶质瘤细胞凋亡的影响在U87/U251细胞中,采用bnip3-siRNA建立bnip3细胞沉默模型,Hoechst33342染色,Tunel染色,流式细胞术检测细胞凋亡情况以及Western blot检测凋亡相关蛋白表达情况。结果提示:沉默bnip3能促进神经胶质瘤细胞的凋亡。(4)mi R-145与bnip3的靶向性研究生物信息学软件结果显示,miR-145同bnip3之间可能具有一定的靶向关系。在U87/U251细胞中,我们分别采用miR-145 inhibitor和mimics建立沉默与过表达的细胞模型。紧接着采用qRT-PCR与Western blot检测bnip3 mRNA与蛋白的表达变化。结果提示:过表达的miR-145可以使bnip3 mRNA与蛋白水平表达降低,相反的,沉默miR-145可以使bnip3 mRNA和蛋白水平升高。然后,我们采用双荧光素酶报告基因的实验证明了他们之间的靶向关系。结果显示,共转染miR-145 mimics与bnip3的3’端非编码区(3’untranslated region,3’-UTR)质粒,可以有效抑制U87/U251细胞中bnip3 3’-UTR的相对荧光值表达。同时我们采用Western blot对bnip3细胞核内外蛋白表达水平检测发现,miR-145 mimics主要减少了细胞核内bnip3的含量。(5)mi R-145和bnip3对Notch信号通路的影响在U87/U251中,采用miR-145 mimics、inhibitor、bnip3-siRNA和bnip3-vetor进行转染,Western blot技术检测Notch信号通路中的相关蛋白(Notch1,Hes1和P21)的表达情况。结果显示:过表达miR-145和沉默bnip3可以抑制Notch信号通路及其相关靶蛋白的表达,而沉默miR-145和过表达bnip3可以促进Notch信号通路及其相关靶蛋白的表达。以上结果显示,mi R-1 45可能通过靶向bnip3来调控Notch信号通路进而影响神经胶质瘤细胞的凋亡。

关键词： miR-145 神经胶质瘤 Notch通路 bnip3 凋亡

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