检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：蔡季濠国立台湾大学

学位级别：博士

多环芳香烃受体 (Aryl hydrocarbon receptor, AhR) 为一配体活化之转录因子，当接触到环境污染物多环芳香烃 (polycyclic aromatic hydrocarbon, PAH) 时AhR会被活化并启动下游基因转录。其中苯芘(benzo[a]pyrene, B[a]P)属多环芳香烃... 详细信息

多环芳香烃受体 (Aryl hydrocarbon receptor, AhR) 为一配体活化之转录因子，当接触到环境污染物多环芳香烃 (polycyclic aromatic hydrocarbon, PAH) 时AhR会被活化并启动下游基因转录。其中苯芘(benzo[a]pyrene, B[a]P)属多环芳香烃家族之一，暴露来源多为环境中燃烧不完全所产生之废气，诸如：汽机车废气、森林燃烧、香烟与烹饪油烟等。过去文献指出苯芘可能与人体肺癌发生有关，并造成多种肿瘤恶化，其主要机转被认为透过活化AhR所调控。肿瘤发展过程中，细胞失去上皮细胞紧密结合型态，转变为间质细胞型态之过程称为细胞上皮-间质转换 (epithelial - mesenchymal transition, EMT)，EMT不仅促进胚胎发育过程中型态改变，在癌症中更促使癌细胞侵袭及转移。近年许多文献指向AhR于EMT中扮演重要角色，其中TCDD活化AhR可诱导乳癌细胞诸多EMT指标蛋白改变。此外，亦有文献报导AhR与调控细胞骨架重组及细胞型态有关。然而，对于AhR如何调控EMT目前仍属未知。细胞自噬为一种细胞自我保护机制，于肿瘤恶化过程中扮演重要角色，主要因其调控了细胞周期与死亡，对于EMT发生具有双面刃式的调控作用。有证据指向暴露PAHs所导致的肿瘤恶化会伴随自噬的发生，然而PAHs引发细胞自噬是否与AhR讯息传递有关仍不清楚，由于AhR可能于EMT扮演重要角色，因此本研究主要目的在于了解AhR调控EMT的过程是否与细胞自噬有关。首先我们发现不同肺癌细胞A549、H1299与CL1-5中AhR蛋白表现量愈高其细胞侵袭能力较弱，而AhR蛋白表现少则会增加细胞侵袭能力。此外，免疫萤光染色结果也显示，透过改变AhR蛋白表现量，可以调控LC3I-LC3II蛋白转换趋势，我们也发现AhR表现量少之CL1-5与H1299其细胞自噬能力较A549大， A549及CL1-5之细胞型态与细胞侵袭能力也可因改变AhR蛋白表现而改变。接着我们以A549 AhR静默之细胞模式，证明了AhR静默可透过改变bnip3 ubiqutination之降解途径以促发细胞自噬。另一方面，苯芘可诱发肺癌细胞之移行能力，并且比较A549、H1299及CL1-5之细胞移行能力，可以发现AhR表现量较少之H1299与CL1-5对苯芘诱导之细胞移行能力大于A549细胞。其中，苯芘亦改变三株细胞之EMT相关标记、减少bnip3之蛋白表现并促使细胞自噬。进一步分析苯芘诱发ROS与调控细胞骨架蛋白Rac1/cdc42与FAK间之关联，亦可发现抑制细胞自噬可回复苯芘诱发之ROS与Rac1/cdc42表现量增加之现象。综合以上，此研究观察到内生性AhR蛋白表现量是调控细胞自噬的重要角色之一，并解释AhR透过bnip3调控细胞自噬，进而改变EMT相关指标蛋白，导致癌细胞迁移及侵袭能力受到影响。

关键词：多环芳香烃受体上皮间质转移细胞自噬 bnip3 LC3

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低氧诱导因子HIF3α在神经管畸形中的表达及作用分析

低氧诱导因子HIF3α在神经管畸形中的表达及作用分析

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作者：郭倩山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨低氧诱导因子在神经管畸形中的作用及其可能的机制。首先使用维甲酸建立神经管畸形(NTDs)动物模型,取NTDs胚胎脑组织进行转录组测序,经过生物信息学分析后得到低氧诱导因子HIF3α与基因bnip3表达发生变化,所以将其作为本次实... 详细信息

目的:探讨低氧诱导因子在神经管畸形中的作用及其可能的机制。首先使用维甲酸建立神经管畸形(NTDs)动物模型,取NTDs胚胎脑组织进行转录组测序,经过生物信息学分析后得到低氧诱导因子HIF3α与基因bnip3表达发生变化,所以将其作为本次实验的主要研究靶点。其次,通过使用维甲酸体外干预PC12细胞,在细胞水平探讨靶基因HIF3a与bnip3以及细胞凋亡之间的相互关系,进而揭示其在神经管畸形发生发展过程中的作用和可能的机制。方法:1.在C57BL/6J小鼠怀孕7.5天(E7.5)时通过灌胃将一定量的维甲酸注入小鼠体内,造成胚胎神经管畸形(NTDs)的模型;造模成功后取E10.5天胚胎脑组织进行转录组测序并分析测序结果,发现在神经管畸形的形成过程中低氧诱导因子HIF1a、HIF3a及相关下游基因bnip3的表达发生了改变。2.通过实时定量聚合酶链反应Real-time PCR检测胚胎脑组织中HIF1a、HIF3a、bnip3 mRN A表达情况,即对测序结果进行了验证。3.在细胞水平进一步验证,通过使用不同浓度维甲酸(0μM、20μM、40μM)在体外对PC12细胞干预培养,采用Real-time PCR和Western blotting检测靶基因在细胞中的表达变化;4.为研究靶基因变化与细胞凋亡的关系,使用流式细胞仪分别检测不同浓度维甲酸干预后细胞的凋亡情况、产生活性氧的变化以及细胞线粒体膜电位的变化情况;5.为进一步研究HIF3a和bnip3以及细胞凋亡机制之间的相互关系,通过使用脂质体将化学合成的siRNA转染进PC12细胞干扰HIF3α的表达,抑制了HIF3α表达后,将细胞分为四组,即正常对照组、维甲酸干预组,HIF3αsiRNA细胞转染组和hif3αsirna细胞转染后再加维甲酸干预组,采用real-timepcr和westernblotting检测分析bnip3的表达变化;6.使用流式细胞仪分别检测四组细胞的凋亡情况;7.对四组细胞进行活化的caspase3染色,在荧光显微镜下观察各组caspase3的激活情况。结果:1.使用21mg/kg剂量的维甲酸,小鼠胚胎神经管畸形造模成功,对照组胚胎整体形态完整,轮廓、体节清晰,体积较大,脑部充盈饱满,畸形组胚胎体积较小,体节不明显,常有脑部发育不足或脑膨出,测序分析得到畸形组低氧诱导因子hif1a表达下降,差异无统计学意义,hif3a、bnip3表达升高,差异有统计学意义;***-timepcr检测结果与测序结果一致,畸形组低氧诱导因子hif1α表达下降,差异无统计学意义,hif3α、bnip3表达升高,差异有统计学意义,推测hif3a、bnip3可能与ntds的有关;3.在细胞水平上,通过real-timepcr和westernblotting的结果分析得到,细胞中hif3α、bnip3随着使用维甲酸剂量的加大表达升高,与体内组织中的实验结果一致。4.流式的细胞分析结果显示,使用维甲酸的剂量越大,细胞凋亡越多,产生的活性氧越多,细胞线粒体膜电位越低,表明维甲酸可能是通过上调靶基因表达诱导细胞凋亡。5.通过脂质体转染sirna进pc12细胞,转染效率一般为70%左右,干扰hif3α的表达抑制了bnip3的表达以及维甲酸诱导的bnip3表达的升高;6.流式结果显示,干扰hif3α的表达抑制了维甲酸诱导的细胞凋亡,由此说明,维甲酸诱导的细胞凋亡是通过hif3α调控bnip3实现的。7.维甲酸能够激活caspase3,干扰hif3α能在一定程度上抑制对caspase3的活化。结论:维甲酸诱导HIF3α、bnip3表达升高并激活caspase3,HIF3α通过调控bnip3的表达从而影响细胞凋亡。

关键词：维甲酸神经管畸形 HIF3α bnip3 细胞凋亡

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间歇低氧状态下HIF-1α介导海马神经自噬激活的机制研究

间歇低氧状态下HIF-1α介导海马神经自噬激活的机制研究

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作者：李萌萌天津医科大学

学位级别：硕士

目的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)可导致或加重认知功能障碍,其机制与间歇低氧(IH)所致海马神经细胞凋亡有关。我们前期研究已证实间歇低氧可以诱导自噬激活并加重了海马神经细胞凋亡。然而,间歇低氧是如何诱导海马神经细胞... 详细信息

目的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)可导致或加重认知功能障碍,其机制与间歇低氧(IH)所致海马神经细胞凋亡有关。我们前期研究已证实间歇低氧可以诱导自噬激活并加重了海马神经细胞凋亡。然而,间歇低氧是如何诱导海马神经细胞自噬激活并加重凋亡的,其具体机制仍不清楚。低氧诱导因子1(HIF-1)是由对氧敏感的α亚基和结构亚基β亚基组成,在低氧、缺血/再灌注等处理后其表达均明显增加并可以介导细胞自噬激活。此外,HIF-1α的下游靶蛋白bnip3与自噬相关蛋白Beclin1的表达也密切相关。因此,我们推测HIF-1α可能介导了间歇低氧致海马神经细胞凋亡中自噬的变化。本研究通过间歇低氧处理海马神经细胞建立OSAHS模型,应用药物干预HIF-1α表达及多种分子生物学检测技术,检测各组海马神经细胞自噬强度和HIF-1α-bnip3-Beclin1信号通路及细胞凋亡的变化,研究间歇低氧是否通过HIF-1α-bnip3-Beclin1信号通路介导了海马神经细胞自噬激活并促进了细胞凋亡。方法(1)研究对象:取新生SD乳鼠(出生24h内),剥离出海马组织,制备细胞悬液,接种并行原代海马神经细胞培养,普通光学显微镜下观察海马神经元的生长情况。(2)模型建立与分组:建立不同时间段的间歇低氧细胞模型,设正常对照组(NC)、间歇低氧4h、8h、12h组。IH组循环给予常氧21%O2持续10min,低氧1.5%O2持续5min,分别处理4h、8h和12h,NC组持续给予21%浓度的常氧。(3)药物干预与分组:给予YC-1干预HIF-1α表达,设正常对照组、IH组、YC-1干预组、IH+YC-1干预组。选取HIF-1α及自噬表达变化最明显的间歇低氧时间点12h进行处理,YC-1预处理方法:YC-1稀释液在间歇低氧或常氧前预处理2h。(4)检测指标:通过免疫荧光染色检测海马神经细胞膜标记蛋白MAP-2的表达;通过western blot技术和免疫荧光技术检测各组海马神经细胞LC3-II和cleaved-caspase-3以及HIF-1α-bnip3-Beclin1信号通路相关蛋白的表达变化,TUNEL法检测各实验组海马神经细胞凋亡率。结果(1)海马神经细胞的生长状态观察:光学显微镜下观察到成熟的海马神经细胞呈现出聚集生长趋势,神经元的轴突和树突增粗并相互交织形成网状,且免疫荧光显示海马神经细胞特异性表达MAP-2。(2)间歇低氧对海马神经元HIF-1α和LC3-II蛋白表达的影响:western blot法检测结果显示,IH组HIF-1α和LC3-II蛋白表达均明显增多,两种蛋白表达均与间歇低氧时间有关,间歇低氧12h表达最多,与NC组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色检查显示间歇低氧处理后分别代表HIF-1α、LC3-II绿色荧光增加(P<0.05)(3)干预HIF-1α表达对海马神经元的自噬水平影响:western blot检测结果显示,与NC组相比IH组LC3-II蛋白表达显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05);YC-1+IH组LC3-II表达较IH组明显减少(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,与对照组相比IH组代表LC3-II的绿色荧光点数显著增多(P<0.05);YC-1+IH组绿色荧光点数较IH组明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);(4)干预HIF-1α表达对原代海马神经细胞凋亡的影响:western blot技术检测结果显示,IH组cleaved caspase-3蛋白表达明显增多,并与间歇低氧时间有关,间歇低氧12h表达最多,与NC组相比差异具有统计学意义(P<0.05);YC-1+IH组cleaved-caspase3蛋白表达较IH组明显减少(P<0.05);TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测结果也显示,间歇低氧处理后细胞凋亡阳性细胞数增加(P<0.05),YC-1+IH组细胞凋亡阳性细胞数较IH组明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)干预HIF-1α表达对海马神经细胞HIF-1α-bnip3-Beclin1通路蛋白及自噬标记蛋白LC3-II表达的影响:western blot技术检测结果显示,IH组HIF-1α、bnip3、Beclin1和LC3-II蛋白表达明显增高,且随着间歇低氧时间的增加,蛋白表达也逐渐增多IH12h表达最多,与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);YC-1+IH组HIF-1α、bnip3、Beclin1和LC3-II蛋白表达较IH组明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);YC-1单独给药组HIF-1α、bnip3、Beclin1和LC3-II蛋白表达与对照组无显著差异。结论本研究证实:(1)间歇低氧处理后海马神经细胞自噬激活伴随着HIF-1

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征海马神经细胞间歇低氧自噬 HIF-1α bnip3 细胞凋亡 YC-1

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MiR-182对乳腺癌细胞顺铂耐药的相关性研究

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中国现代应用药学 2016年第6期33卷 721-726页

作者：龙景培万芳周俊张峰陈欣王一刻浙江大学医学院附属妇产科医院外科杭州310006

目的探讨miR-182与乳腺癌细胞顺铂耐药性的关系。方法 MTT法检测miR-182对顺铂杀伤乳腺癌细胞能力的影响。利用生物信息学、定量PCR及Western blot法验证miR-182是否能调节乳腺癌细胞bnip3的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及Western... 详细信息

目的探讨miR-182与乳腺癌细胞顺铂耐药性的关系。方法 MTT法检测miR-182对顺铂杀伤乳腺癌细胞能力的影响。利用生物信息学、定量PCR及Western blot法验证miR-182是否能调节乳腺癌细胞bnip3的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot法研究miR-182影响顺铂疗效的信号通路。结果 miR-182模拟物可减弱顺铂对MCF-7细胞的杀伤活性,而miR-182抑制剂则增强顺铂对MCF-7细胞的杀伤活性。定量PCR及Western blot实验表明miR-182的靶基因可能为bnip3。miR-182抑制剂联合顺铂可引起MCF-7细胞线粒体膜电位显著下降并诱导caspase-3的活化和凋亡的发生,转染bnip3 siRNA后miR-182抑制剂联合顺铂对MCF-7细胞的凋亡诱导效应显著降低。结论 Mi R-182在乳腺癌中通过下调bnip3的表达影响顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性。

关键词： miR-182 bnip3 乳腺癌 MCF-7 顺铂

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低氧促进小鼠卵泡颗粒细胞凋亡

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现代畜牧兽医 2016年第8期 18-23页

作者：杜学海漫晓丹宁彩波周成利王宝东刘红林辽宁省畜牧业经济管理站辽宁沈阳110032 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

为研究低氧是否能促进小鼠卵泡颗粒细胞凋亡,将体外培养的小鼠卵泡颗粒细胞分成对照组和低氧处理组。对照组的细胞一直在常规的二氧化碳培养箱内培养,低氧处理组的细胞先在常规二氧化碳培养箱内培养一段时间后放入三气培养箱内(1%的氧气... 详细信息

为研究低氧是否能促进小鼠卵泡颗粒细胞凋亡,将体外培养的小鼠卵泡颗粒细胞分成对照组和低氧处理组。对照组的细胞一直在常规的二氧化碳培养箱内培养,低氧处理组的细胞先在常规二氧化碳培养箱内培养一段时间后放入三气培养箱内(1%的氧气,5%的二氧化碳,94%的氮气)培养,一定时间后收集两组细胞样:用流式细胞仪结合Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况;用荧光定量PCR检测HIF1α及bnip3基因在两组细胞中的mRNA转录水平;用TUNEL染色法检测两组细胞的DNA断裂情况;在小鼠颗粒细胞中过表达HIF1α,检测bnip3基因的mRNA转录情况。结果表明:与对照组相比,低氧处理能够显著促进体外培养的小鼠卵泡颗粒细胞凋亡;低氧处理组HIF1α和bnip3基因的mRNA转录水平显著高于对照组;低氧处理的小鼠卵泡颗粒细胞内有明显的核固缩现象,但DNA断裂多发生在胞质内;在小鼠颗粒细胞中过表达HIF1α能够引起bnip3的mRNA转录水平升高。这些结果表明低氧处理能促进小鼠卵泡颗粒细胞的凋亡及细胞内HIF1α与bnip3基因的表达量升高;由低氧处理后小鼠卵泡颗粒细胞内DNA断裂多发生在细胞质内,推测低氧引起小鼠颗粒细胞凋亡可能是通过线粒体凋亡途径实现的。

关键词：低氧 HIF1 bnip3 小鼠卵泡颗粒细胞凋亡机制

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自噬在低氧促神经干细胞增殖及在脑缺血损伤中的调节作用

自噬在低氧促神经干细胞增殖及在脑缺血损伤中的调节作用

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作者：黄广海中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

神经干细胞(Neural Stem Cell,NSC)是指具有分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力,能自我更新并能生成大量脑组织细胞的细胞群。在胚胎期,神经干细胞主要分布在大脑的皮层、海马、纹状体和中脑等区域;在成年期,神经干细胞主... 详细信息

神经干细胞(Neural Stem Cell,NSC)是指具有分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力,能自我更新并能生成大量脑组织细胞的细胞群。在胚胎期,神经干细胞主要分布在大脑的皮层、海马、纹状体和中脑等区域;在成年期,神经干细胞主要局限在海马齿状回SGZ、环绕侧脑室的室脑膜下层SVZ和纹状体。神经干细胞因其具有自我更新能力和分化能力,通过移植神经干细胞给治疗神经退行性疾病带来了新的希望,因而对神经干细胞的增殖和分化的研究是最近几年的热点。神经干细胞的增殖受到多方面因素的影响和调节,其中内因主要有基因、神经干细胞内蛋白、转录因子等,外因则包括神经干细胞的营养因素、细胞间相互作用、各种理化因素如低氧等。在哺乳动物中由于脑部区域的特殊构造,通常情况下在胚胎发育阶段和成年脑组织中氧含量只有3%-5%,称之为“生理性低氧”。因此,研究生理性低氧情况下神经干细胞的增殖情况具有重要的生理意义。本实验即在生理性低氧条件下开展对神经干细胞增殖特性的研究,从细胞代谢的角度阐释低氧对神经干细胞增殖的调控作用。自噬(autophagy)是溶酶体介导细胞内蛋白质和细胞器降解的正常新陈代谢过程,在维持细胞自身内环境稳定,保护细胞免受应激损伤等方面发挥着重要作用。在各种应激状态下,自噬被激活,可以清除细胞内异常折叠的蛋白质和衰老、受损的细胞器,促进细胞的存活,但如果细胞自噬被过度激活,细胞自噬压力超出细胞自身可调节的程度,也会加速细胞的死亡。在神经干细胞的低氧过程中自噬会起到什么作用还不得而知。Wip1(Wild type p53-induced phosphatase 1)是一种原癌基因,属于丝氨酸/苏氨酸家族成员的磷酸酶,因此关于Wip1的研究主要集中在识别Wipl的靶蛋白与去磷酸化位点上。到目前为止已经发现至少7种Wipl靶蛋白,包括与细胞增殖周期密切相关的p53、p38等,Wip1通过使p53、p38发生去磷酸化解除它们抑制细胞增殖的作用,从而在细胞增殖过程中发挥重要的调节作用。那么,在神经干细胞低氧过程中Wip1是否参与对细胞增殖的调控?该调控作用是否与自噬调节相关?本文将就这些问题分别进行讨论。在本研究中,我们采用3%O2低氧模型(以20%O2为常氧对照)首先探讨了低氧条件下神经干细胞中自噬的变化,及其对细胞存活的影响;然后检测了Wip1在低氧过程中的表达变化及其对细胞存活和自噬的影响,并进一步分析了Wip1与自噬在低氧条件下调节神经干细胞增殖时的关联。研究结果如下:1.低氧对神经干细胞活性的影响我们采用常氧(20%)和低氧(3%)对神经干细胞进行不同时间的处理,通过比较低氧和常氧对神经干细胞的存活和增殖的影响,以及不同氧浓度条件下神经干细胞中活性氧ROS的变化,探究低氧对神经干细胞活性的影响。1.1神经干细胞分离和培养取SD大鼠14.5天胚胎的中脑,接种于含有EGF,b FGF等因子的无血清培养基中,原代细胞经过一天的培养就可以观察到神经干细胞的增殖现象,神经干细胞悬浮在培养液中,2到3天可以观察到神经干细胞形成神经球,悬浮生长5天左右可以经消化传代。1.2神经干细胞的鉴定为了证明我们所分离培养的细胞是神经干细胞,我们取生长状态良好、大小合适的神经球,进行Nestin染色鉴定。实验结果显示,神经干细胞生长时成球状,神经球中绝大部分细胞显示Nestin染色阳性,结果证实我们培养的细胞确实为神经干细胞,且细胞纯度较高,可以进行后续的实验。1.3低氧对神经干细胞存活的影响我们用CCK-8实验比较不同氧浓度、不同低氧处理时间对神经干细胞存活能力的影响。实验结果显示,神经干细胞经过3%低氧24 h、48 h、72 h处理后存活能力显著提高,表明3%低氧能够显著促进神经干细胞的存活。1.4低氧对神经干细胞增殖的影响为了进一步探究低氧对神经干细胞增殖的影响,我们通过Brd U和HPI(Hypoxyprobe?-1 Kit)低氧探针掺入法观察了不同氧浓度下神经干细胞的增殖状态。结果显示:神经干细胞经过3%低氧处理后Brd U阳性细胞较常氧组明显增加,并且Brd U阳性细胞主要分布在神经球的外围,表明该部位是神经干细胞增殖的主要区域。1.5低氧对神经干细胞中ROS含量的影响低氧与ROS联系密切,正常含量的ROS可作为第二信使影响细胞周期,过量的ROS将会造成细胞损伤。我们进一步应用ROS荧光分子探针孵育神经干细胞,经过染色后用流式细胞仪检测分析。结果显示:与常氧对照组相比,神经干细胞经过3%低氧处理不同时间点后ROS都明显升高,48 h时增加最为显著,其含量增加了约2.5倍,低氧72 h ROS含量降低,但仍明显高于常氧对照组。1.6自噬(线粒体自噬)抑制剂Mdivi-1对神经干细胞中ROS含量的影响ROS主要是在线粒体中产生,线粒体自噬作为自噬的

关键词：神经干细胞自噬 Wip1 低氧线粒体自噬脑缺血 bnip3 p MCAO

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JNK modulates FOXO3a for the expression of the mitochondrial death and mitophagy marker bnip3 in pathological hypertrophy and in heart failure

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CELL DEATH & DISEASE 2012年第2期3卷 265-265页

作者： Chaanine, A. H. Jeong, D. Liang, L. Chemaly, E. R. Fish, K. Gordon, R. E. Hajjar, R. J. Mt Sinai Sch Med Cardiovasc Inst New York NY 10029 USA Mt Sinai Sch Med Dept Pathol New York NY 10029 USA

Bcl-2 E1B 19-KDa interacting protein 3 (bnip3) is a mitochondrial death and mitophagy marker, which is involved in inducing cardiac remodeling post myocardial infarction. In this study, we show that bnip3 expression increases in stressed cardiomyocytes in vitro and in response to pressure overload in vivo, and that its transcription is directly related to JNK activity. bnip3 expression gradually increased in the first weeks after pressure overload and peaked at the heart failure stage. Ultrastructurally, the mitochondrial area was inversely proportional to bnip3 expression. Both JNK and AKT activities increased with pressure overload;however, JNK signaling dominated over AKT signaling for the activation of the transcription factor FOXO3a and for the transcription of its effector, bnip3. 3-methyladenine attenuated JNK signaling and significantly decreased bnip3 expression and reversed cardiac remodeling in heart failure. Ultrastructurally, the mitochondrial area was significantly increased in the 3-methyladenine group compared with placebo. Moreover, adenoviral gene delivery of dominant negative JNK in a rat model of pressure overload hypertrophy abolished the increase in bnip3 expression in response to pressure overload. These results suggest that JNK signaling is a critical modulator of the transcription factor FOXO3a driving the expression of its effector, bnip3, in heart failure and that JNK, through bnip3, induces mitochondrial apoptosis and mitophagy. Cell Death and Disease (2012) 3, e265;doi: 10.1038/cddis.2012.5;published online 2 February 2012

关键词： heart failure JNK FOXO3a bnip3 mitochondrial apoptosis mitophagy

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腹腔冲洗液bnip3基因甲基化与胃癌患者腹膜微转移及疾病的相关性研究

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中国医科大学学报 2012年第10期41卷 934-936页

作者：王银玲王亿龙王齐晖李花周立平李富顺中国医科大学附属第一医院检验科沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤放射治疗科沈阳110001

目的探讨胃癌术中腹腔冲洗液游离细胞bnip3基因启动子区甲基化水平与胃癌腹膜微转移及疾病进展的相关性。方法收集80例胃癌患者的胃癌组织与相应癌旁组织及术中腹腔冲洗液。用甲基化特异的聚合酶链式反应(MSP)方法检测bnip3基因启动子... 详细信息

目的探讨胃癌术中腹腔冲洗液游离细胞bnip3基因启动子区甲基化水平与胃癌腹膜微转移及疾病进展的相关性。方法收集80例胃癌患者的胃癌组织与相应癌旁组织及术中腹腔冲洗液。用甲基化特异的聚合酶链式反应(MSP)方法检测bnip3基因启动子区异常高甲基化。结果胃癌组织的bnip3甲基化阳性率显著高于癌旁组织;腹腔冲洗液游离细胞bnip3甲基化阳性率在胃癌PTNM分期、淋巴结转移,肿瘤浸润深度间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论应用MSP法检测腹腔冲洗液游离细胞bnip3基因异常甲基化可用于预测胃癌患者腹膜微转移及评估疾病进展。

关键词： bnip3 甲基化胃癌微转移腹腔冲洗液

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人bnip3真核表达载体和shRNA表达载体的构建及其对肝癌细胞自噬的影响

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山东大学学报（医学版） 2012年第6期50卷 70-74,79页

作者：孙磊魏清张颖韩丽辉山东大学医学院免疫学研究所济南250012

目的利用人bnip3的真核表达载体和靶向bnip3的shRNA表达载体,研究bnip3过表达和封闭时对肝癌细胞自噬的影响。方法从人肝癌细胞系中,通过RT-PCR扩增人bnip3基因编码区序列,酶切后插入pcDNA3.1-His-C载体,以此构建重组pcDNA3.1-bnip3真... 详细信息

目的利用人bnip3的真核表达载体和靶向bnip3的shRNA表达载体,研究bnip3过表达和封闭时对肝癌细胞自噬的影响。方法从人肝癌细胞系中,通过RT-PCR扩增人bnip3基因编码区序列,酶切后插入pcDNA3.1-His-C载体,以此构建重组pcDNA3.1-bnip3真核表达载体。同时构建靶向人bnip3基因的shRNA表达载体pSilencer-bnip3。分别经测序、酶切、RT-PCR和Western blot等方法对重组载体是否构建成功进行验证。并通过采用Western blot检测自噬标志物LC3蛋白的剪切,研究bnip3过表达和抑制时对肝癌细胞自噬的影响。结果pcDNA3.1-bnip3和pSilencer-bnip3分别过表达bnip3和抑制bnip3的表达。bnip3过表达能够显著增加肝癌细胞的自噬;bnip3表达受到抑制时,肝癌细胞的自噬明显减少。结论成功构建了人bnip3的真核表达载体pcDNA3.1-bnip3和shRNA表达载体pSilencer-bnip3,并在人肝癌细胞系中证实bnip3对肝癌细胞自噬的促进作用。

关键词： bnip3 表达载体 shRNA 自噬癌肝细胞

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兔髓核组织中bnip3表达与椎间盘退变的关系

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中国脊柱脊髓杂志 2012年第1期22卷 65-71页

作者：刘杰彭娜陆焱王建第三军医大学新桥医院骨科重庆市400037 第三军医大学新桥医院手术室重庆市400037 解放军187医院骨科海口市571159

目的:探讨兔椎间盘髓核组织中bnip3表达量与椎间盘退变的相关性。方法:健康1月龄新西兰白兔24只,随机分为4组,每组6只。在每只动物的L4/5、L5/6和L6/7椎间盘进行纤维环穿刺术,建立椎间盘退变模型,作为实验椎间盘;穿刺椎间盘近端3个椎间... 详细信息

目的:探讨兔椎间盘髓核组织中bnip3表达量与椎间盘退变的相关性。方法:健康1月龄新西兰白兔24只,随机分为4组,每组6只。在每只动物的L4/5、L5/6和L6/7椎间盘进行纤维环穿刺术,建立椎间盘退变模型,作为实验椎间盘;穿刺椎间盘近端3个椎间盘(L1/2、L2/3、L3/4)作为正常对照椎间盘。分别于术后即刻、2、4、8周对椎间盘进行MRI及组织学评分,应用Real-time PCR定量检测髓核组织bnip3 mRNA表达,免疫组织化学染色半定量髓核组织bnip3表达,同时分析同一椎间盘bnip3表达与MRI评分、组织学评分之间的相关性,并与正常椎间盘进行对照。结果:正常及手术后即刻实验椎间盘在MRI T2加权像上呈高密度,评分为1.0±0.0;手术后2周实验椎间盘信号呈不均一的高密度,评分为2.9±0.4;手术后4周实验椎间盘信号呈不均一中低密度,评分4.2±0.3;手术后8周实验椎间盘信号呈低密度,评分4.9±0.1,各时间点MRI评分比较有显著性差异(P<0.05)。组织学染色显示正常及手术后即刻椎间盘结构整齐,髓核与纤维环交界清晰,组织学评分4.0±0.0;手术后2周实验椎间盘纤维环出现小裂隙,髓核与纤维环交界轻度不清,组织学评分7.5±0.2;手术后4周实验椎间盘纤维环出现较大裂隙,髓核与纤维环交界中度不清,组织学评分10.0±1.0;手术后8周实验椎间盘正常结构丧失,髓核组织纤维化,组织学评分11.8±0.2,各时间点间组织学评分比较有显著性差异(P<0.05)。手术后即刻、2周、4周及8周实验椎间盘bnip3 mRNA表达是正常组的1.0±0.3倍、2.0±0.1倍、2.8±0.3倍和4.2±0.2倍,与椎间盘MRI退变评分呈显著性正相关(r=0.92,P<0.01)。正常及手术后即刻实验椎间盘髓核组织bnip3灰度值分别为55.3±6.2和60.7±4.4;而手术后2周、4周及8周实验椎间盘分别为150.4±13.4、176.0±35.1和173.6±7.9,其灰度值与椎间盘组织学评分呈显著性正相关(r=0.92,P<0.01)。结论:兔椎间盘髓核组织中bnip3 mRNA表达量与椎间盘退变相关,bnip3表达上调可能在椎间盘退变过程中发挥了重要作用。

关键词：椎间盘退变髓核 bnip3 兔

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