检索结果-内蒙古大学图书馆

中国卫生检验杂志 2015年第16期25卷 2754-2757,2760页

作者：徐洁李小兵赖盼建王锦军金华市中心医院浙江金华321000

目的研究桔梗皂苷D在体外对人肝癌细胞株Hep G2的杀伤作用及其机制。方法 MTT法检测桔梗皂苷D对Hep G2细胞增殖的抑制作用,台盼蓝染色法检测桔梗皂苷D对Hep G2细胞死亡的诱导作用。Western blot检测自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达,并用荧光定... 详细信息

目的研究桔梗皂苷D在体外对人肝癌细胞株Hep G2的杀伤作用及其机制。方法 MTT法检测桔梗皂苷D对Hep G2细胞增殖的抑制作用,台盼蓝染色法检测桔梗皂苷D对Hep G2细胞死亡的诱导作用。Western blot检测自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达,并用荧光定量PCR法检测自噬相关基因Beclin1的表达。荧光定量PCR法检测Hep G2细胞线粒体膜电位相关蛋白bnip3的表达水平。JC-1染料处理Hep G2细胞,并用流式细胞术检测桔梗皂苷D对线粒体膜电位的影响。结果桔梗皂苷D可显著抑制Hep G2细胞的增殖并杀伤肿瘤细胞。桔梗皂苷D处理后Hep G2细胞的Beclin1水平和LC3-Ⅱ表达显著增高,bnip3表达水平显著增高并诱导其线粒体肿胀,膜电位降低。结论桔梗皂苷D上调bnip3表达,诱导Hep G2细胞发生自噬性死亡。

关键词：桔梗皂苷D 自体吞噬 bnip3 线粒体膜电位

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盐酸小檗胺阻断自噬降解及其增强多柔比星抑制乳腺癌细胞活性的机制研究

盐酸小檗胺阻断自噬降解及其增强多柔比星抑制乳腺癌细胞活性的机...

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中国药理学会化疗药理专业委员会第十五届学术大会暨2018重庆化疗药物基础与前沿国际论坛

作者：邓琴傅若秋高宁中国人民解放军陆军军医大学药学院

目的探讨盐酸小檗胺(BBM)阻断乳腺癌细胞自噬降解及其增敏多柔比星抑制乳腺癌细胞活性的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞的蛋白表达水平;采用免疫共沉淀法(Co-IP)检测蛋白的... 详细信息

目的探讨盐酸小檗胺(BBM)阻断乳腺癌细胞自噬降解及其增敏多柔比星抑制乳腺癌细胞活性的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞的蛋白表达水平;采用免疫共沉淀法(Co-IP)检测蛋白的相互结合;采用免疫荧光(IF)及激光共聚焦方法(Confocal)观察自噬体及蛋白共定位等;采用流式细胞仪(Flow cytometry)检测细胞凋亡及ROS。结果BBM可明显增加乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞中自噬小体的数量:增加自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ的表达,但不影响促进自噬体形成的关键蛋白的表达。tfLC3双荧光质粒转染实验,确证BBM阻断了乳腺癌细胞的自噬降解。IP及Confocal研究发现BBM既不破坏溶酶体的酸性环境也不降低溶酶体膜标志蛋白LAMP1/LAMP2的表达,但可抑制自噬体与溶酶体的融合。进一步研究发现BBM可干扰SNAP29-VAMP8之间的结合,影响了自噬体-溶酶体融合所必需的SNARE蛋白复合物的形成,从而抑制自噬体-溶酶体的融合而阻断自噬降解。研究也发现BBM可以增加bnip3的mRNA转录水平及上调bnip3蛋白的表达;采用shRNA干扰的方法敲降bnip3后,可减轻BBM对SNAP29-VAMP8结合的干扰,减弱BBM对自噬体-溶酶体融合的抑制作用进而削弱BBM阻断自噬降解的作用。而通过Co-IP实验发现bnip3与SNAP29可以发生共沉淀,IF检测发现bnip3可以与SNAP29发生共定位;而过表达SNAP29可以减轻bnip3对SNAP29-VAMP8结合的干扰,促进自噬体-溶酶体融合,最终削弱bnip3阻断自噬降解的作用。MTT检测发现BBM可以抑制不同类型肿瘤细胞的增殖活性,也可协同增敏多种抗肿瘤药物的抗乳腺癌细胞作用;其中对多柔比星(DOX)的增敏作用最强;流式细胞和Western blot检测发现BBM联用DOX (BBM+DOX)可增加乳腺癌细胞的凋亡率,激活细胞凋亡途径;进一步的分子机制研究发现BBM+DOX是通过抑制自噬降解导致自噬体大量堆积,从而协同多柔比星诱导细胞出现氧化应激反应产生ROS,进而影响p38、ERK等MAPK信号通路蛋白的磷酸化水平而激活细胞凋亡途径,促进乳腺癌细胞发生凋亡而抑制其增殖活性。结论盐酸小檗胺是一新型的自噬降解抑制剂,可作为一种新的抗肿瘤药物增敏剂用于抗乳腺癌治疗。

关键词：盐酸小檗胺自噬 bnip3 多柔比星凋亡乳腺癌

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陈忠教授和张翔南教授团队提出永久性脑缺血的潜在治疗策略

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浙江大学学报（医学版） 2020年第5期49卷 662-662页

2020年8月12日,《自噬》(Autophagy)在线发表了陈忠教授、张翔南教授团队的最新研究成果“bnip3L/NIX degradation leads to mitophagy deficiency in ischemic brains”(https://***/doi/full/10.1080/15548627.2020.1802089)。

关键词： bnip3 永久性脑缺血张翔最新研究成果

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自噬及自噬相关分子在神经退行性疾病中的研究进展

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中国实验动物学报 2024年第9期32卷 1221-1221页

自噬是细胞内清除异常蛋白质或受损细胞器的重要途径之一,正常情况下,细胞自噬主要清除衰老的细胞器以及蛋白酶体系统难以清除的大分子蛋白,对维持细胞内能量和物质代谢的稳态起到重要作用。细胞内受损的细胞器主要通过选择性自噬降解,... 详细信息

自噬是细胞内清除异常蛋白质或受损细胞器的重要途径之一,正常情况下,细胞自噬主要清除衰老的细胞器以及蛋白酶体系统难以清除的大分子蛋白,对维持细胞内能量和物质代谢的稳态起到重要作用。细胞内受损的细胞器主要通过选择性自噬降解,神经元中异常的线粒体主要经线粒体自噬清除,包括以下多种途径:PINK1-Parkin通路以及心磷脂、bnip3L、FUNDC1、FKBP8等跨膜蛋白介导的非PINK1-Parkin通路。

关键词：线粒体自噬 bnip3 细胞自噬神经退行性疾病 PINK1 大分子蛋白心磷脂 Parkin

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