检索结果-内蒙古大学图书馆

东北农业大学学报 2019年第7期50卷 28-39页

作者：尹杰超苏明雪刘天艳杨甲瑞尹祺黄鹤张宇曹玉凯胡爽孙锐李思雨李德山东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 黑龙江省疾控中心哈尔滨150030

采用反向遗传操作技术构建新城疫病毒基因组NP/P 位点表达胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deaminase,cd)基因弱毒力重组新城疫病毒rClone30-cd和中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-cd。MTT检测结果表明,在协同5-氟胞嘧啶(5-Fluorocytosine,5-fc)条件... 详细信息

采用反向遗传操作技术构建新城疫病毒基因组NP/P 位点表达胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deaminase,cd)基因弱毒力重组新城疫病毒rClone30-cd和中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-cd。MTT检测结果表明,在协同5-氟胞嘧啶(5-Fluorocytosine,5-fc)条件下,两株重组新城疫病毒可在体外有效杀伤人肝癌细胞HepG2。通过Balb/c鼠尾静脉注射小鼠肝癌细胞H22构建小鼠肝癌细胞转移模型,经重组病毒协同5-fc联合治疗,荷瘤小鼠转移肿瘤体积显著缩小、肿瘤组织出现明显凋亡与坏死。体内试验结果表明,中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-cd抑瘤效果优于弱毒力重组新城疫病毒rClone30-cd。

关键词：肝癌肿瘤转移重组新城疫病毒 cd/5-fc系统反向遗传操作技术

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VP22-cd基因工程化载体对胶质瘤细胞体外杀伤作用的研究

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中华神经外科杂志 2016年第6期32卷 614-618页

作者：米蕊芳金贵善张俊文周益强徐恒周程森刘福生首都医科大学北京市神经外科研究所100050 首都医科大学附属北京天坛医院神经外科

目的构建cd以及VP22-cd基因工程化载体，并探讨其在体外对胶质瘤细胞的杀伤作用。方法利用聚合酶链式反应（PCR）得到cd以及VP22基因片段；利用In—fusion基因克隆方法将得到的基因片段插入到pEGFP—N1载体中，构建cd以及VP22-cd基因工... 详细信息

目的构建cd以及VP22-cd基因工程化载体，并探讨其在体外对胶质瘤细胞的杀伤作用。方法利用聚合酶链式反应（PCR）得到cd以及VP22基因片段；利用In—fusion基因克隆方法将得到的基因片段插入到pEGFP—N1载体中，构建cd以及VP22-cd基因工程化载体；利用脂质体转染的方法将构建的基因工程化载体转染到胶质瘤细胞c6及U87细胞中，并通过体外光镜及荧光显微镜观察转染率；利用MTT比色法评价加入前药5-氟胞嘧啶后对转染后胶质瘤细胞的杀伤率。结果（1）将cd基因或VP22-cd融合基因插入到pEGFP—cd载体中，构建得到pEGFP—cd以及pEGFP—VP22-cd载体。（2）pEGFP—cd及pEGFP—VP22-cd载体可转染入c6或U87胶质瘤细胞，转染率分别为2．5％和3．7％以及2．0％和4．1％。（3）在c6或U87细胞中转染pEGFP—cd或***载体并加入前药5．氟胞嘧啶后，细胞的存活率分别为（30．36±0．63）％和（11．75±1．01）％以及（28．78±3．62）％和（18．26±2．27）％，与转染pEGFP—N1组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（4）在C6或U87细胞中加入前药5-氟胞嘧啶后，转染pEGFP—VP22-cd组与转染pEGFP—cd组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论cd／5-fc系统在体外对恶性胶质瘤细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应；并且穿梭蛋白VP22可进一步促进系统对细胞的杀伤作用。

关键词：神经胶质瘤 cd/5-fc系统旁观者效应穿梭蛋白VP22

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cd/5-fc联合IL-24对肝癌细胞杀伤作用的影响及其机制的初探

CD/5-FC联合IL-24对肝癌细胞杀伤作用的影响及其机制的初探

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作者：张海清徐州医科大学

学位级别：硕士

目的：观察cd/5-fc自杀基因系统联合IL-24对人肝癌细胞株HepG2体内外杀伤作用的影响，并初步探讨其机制。　　方法：(1)应用脂质体介导法将fcy：Fur基因转染入人肝癌细胞株HepG2，经G418筛选2周后行有限稀释法获得稳定表达fcy：Fur基... 详细信息

目的：观察cd/5-fc自杀基因系统联合IL-24对人肝癌细胞株HepG2体内外杀伤作用的影响，并初步探讨其机制。　　方法：(1)应用脂质体介导法将fcy：Fur基因转染入人肝癌细胞株HepG2，经G418筛选2周后行有限稀释法获得稳定表达fcy：Fur基因的单克隆细胞，通过RT-PCR检测fcy：Fur基因mRNA的表达情况，鉴定细胞模型。(2)将IL-24基因克隆入慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen，构建重组慢病毒表达载体pHAGE-IL-24，然后将pHAGE-IL-24、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293T细胞进行慢病毒包装，同时包装慢病毒空载体作阴性对照，进而将包装的重组慢病毒感染包装细胞，通过倒置荧光显微镜观察GFP表达及Western blot检测IL-24蛋白表达，从而验证携带IL-24基因的重组慢病毒是否构建成功。(3)应用5-fc及携带IL-24的重组慢病毒分组处理稳定表达fcy：Fur基因的人肝癌细胞株HepG2，采用MTT法和流式细胞术检测cd/5-fc系统联合IL-24对人肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响。(4)裸鼠皮下接种稳定表达fcy：Fur基因的人肝癌细胞株HepG2，建立荷瘤小鼠模型。待肿瘤长至40-50mm3后，分组处理，予腹腔注射前体药物5-fc、瘤内注射慢病毒IL-24，隔天一次，共7次，30天后处死裸鼠，剥离肿瘤组织，HE染色观察肿瘤组织的病理形态，免疫组化法检测FasL表达，TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。　　结果(1)将重组逆转录病毒载体pLXSN-fcy：Fur，转染入人肝癌细胞株HepG2后，经RT-PCR鉴定，可见约1227bp左右处有一特异性条带，大小与目的基因一致。(2)将IL-24基因重组到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen载体，酶切鉴定的电泳结果显示，pHAGE-IL-24质粒含有650bp左右的插入基因片断，核酸序列测定后经Blast比对显示，克隆的基因序列和GenBank中已登记的IL-24基因序列完全一致，并获得了高滴度的重组慢病毒IL-24(5×106TU/ml)及慢病毒空载体Mock（滴度为2.5×106TU/ml）。(3)MTT法和流式细胞术结果显示：与PBS组相比，5-fc组、IL-24组、Mock+5-fc组和IL-24+5-fc组细胞均有显著抑制生长及促进凋亡作用（P＜0.05），并随着时间的增加，作用增强，IL-24+5-fc组细胞的生长抑制及促进凋亡作用明显高于它各组（P＜0.05）。(4)成功建立荷瘤小鼠模型，HE染色结果显示，各治疗组肿瘤细胞呈不同程度凝固性坏死，周围广泛纤维化，联合治疗后肿瘤细胞坏死更为严重，PBS组肿瘤细胞丰富，呈增殖样生长;免疫组织化学检测结果显示，与PBS组相比，5-fc组、IL-24组、Mock+5-fc组、IL-24+5-fc组细胞FasL的表达均有显著增高(P＜0.05)，IL-24+5-fc组FasL的表达高于其它各组(P＜0.05);TUNEL检测结果显示，与PBS组相比，5-fc组、IL-24组、Mock+5-fc组、IL-24+5-fc组细胞均有显著促凋亡作用（P＜0.05），且IL-24+5-fc组肿瘤促凋亡作用明显高于其它各组(P＜0.05)。　　结论：成功构建稳定表达fcy：Fur基因的人肝癌细胞株HepG2细胞模型及携带IL-24基因的重组慢病毒;cd/5-fc自杀基因系统联合IL-24具有体内外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖及促凋亡的作用，且这种作用可能是通过上调FasL而介导的，为临床治疗肝癌提供实验理论依据及一种新的思路或手段。

关键词： cd/5-fc系统肝癌细胞株 HepG2细胞动物模型促凋亡作用

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腺病毒介导cd—TK融合基因对肾癌细胞的杀伤作用

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中华实验外科杂志 2009年第12期26卷 1754-1755页

作者：赵国志郑少斌刘阳何方刚张勇姜耀东南方医科大学南方医院泌尿外科广州510150 武汉大学医学院

肾癌是常见的泌尿系肿瘤，发病率仅次于膀胱肿瘤。自杀基因治疗在晚期肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—TK）基因／无环鸟昔（GCV）及大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（cd）基因／5-氟胞嘧啶（5-fc）系统治疗机制不同... 详细信息

肾癌是常见的泌尿系肿瘤，发病率仅次于膀胱肿瘤。自杀基因治疗在晚期肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—TK）基因／无环鸟昔（GCV）及大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（cd）基因／5-氟胞嘧啶（5-fc）系统治疗机制不同，联合可产生协同效应。本研究旨在探讨联合TK／GCV、cd／5-fc系统在肾癌治疗中的价值。

关键词： cd/5-fc系统肾癌细胞融合基因腺病毒介导杀伤作用单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗 5-氟胞嘧啶

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cd/5-fc系统对结肠癌细胞的杀伤作用

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世界华人消化杂志 2003年第5期11卷 535-539页

作者：黎成金马庆久赖大年鲁建国王小军王青潘伯荣武永忠李金茂中国人民解放军第四军医大学唐都医院普通外科陕西省西安市710038 中国人民解放军第四军医大学学报编辑部陕西省西安市710032

目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,cd)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-fc)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动cd基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEAcdNa及非组织特异性逆转录病毒载体pcd2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-fc进行敏感试验.结果:LoVo-CEAcd及LoVo-cd比LoVo对5-fc的敏感性明显提高(P<0.01,t=5.688,n=9;P<0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEAcd及SW480-cd比SW480对5-fc的敏感性明显提高(P<0.01,t=3.437,n=9;P<0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEAcd比LoVo-cd对5-fc的敏感性明显增强(P<0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEAcd对5-fc的敏感性小于SW480-cd,SW480-CEAcd对前药5-fc的敏感性低于LoVo-CEAcd(P<0.05,t=2.504,n=9),转cd基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性cd/5-fc系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.

关键词：结肠癌细胞杀伤作用脂质体法前药转换基因系统 cd/5-fc系统

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腺病毒介导cd/5-fc系统治疗口腔鳞癌机制的研究

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实用口腔医学杂志 2003年第5期19卷 435-438页

作者：王安训黄洪章中山大学附属第一医院口腔科 510080 中山大学附属第二医院口腔颌面外科

目的 :研究腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因 (AdCMVcd) /5 氟胞嘧啶 (5 fc)自杀基因治疗口腔鳞癌的作用机制。方法 :AdCMVcd/5 fc系统治疗口腔鳞癌细胞 (Tca8113细胞株 )后分别应用3 H TdR掺入法、流式细胞仪 (fcM )、TUNEL法... 详细信息

目的 :研究腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因 (AdCMVcd) /5 氟胞嘧啶 (5 fc)自杀基因治疗口腔鳞癌的作用机制。方法 :AdCMVcd/5 fc系统治疗口腔鳞癌细胞 (Tca8113细胞株 )后分别应用3 H TdR掺入法、流式细胞仪 (fcM )、TUNEL法和透射电镜等方法进行检测。结果 :与对照组比较 ,cd/5 fc治疗组3 H TdR掺入率显著下降 (P <0 .0 0 1) ,且与 5 fc的浓度成反比 ;fcM显示S期比率显著升高 (P <0 .0 0 1) ,G2 +M期比率下降为 0 (P <0 .0 0 1) ,G1/G0 期的改变不明显 (P >0 .0 5 ) ;透射电镜及TUNEL法显示治疗后可观察到明显的细胞凋亡 ,其凋亡率由治疗前的 (4 .40± 0 .87) %上升到 (15 .80± 1.5 5 ) % (P <0 .0 0 1)。结论 :AdCMVcd/5 fc系统对口腔鳞癌细胞的杀伤作用可能通过抑制DNA的合成。

关键词：腺病毒治疗口腔鳞癌 cd/5-fc系统流式细胞仪 fcM

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cd/5-fc系统对胰腺癌裸鼠移植瘤的抗血管形成作用的初步探讨

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中华肝胆外科杂志 2002年第12期8卷 717-720页

作者：潘雪李兆申许国铭崔龙戴观荣龚燕芳屠振兴第二军医大学长海医院消化科上海市200433 第二军医大学长海医院普外科

目的　探讨自杀基因系统对胰腺癌裸鼠移植瘤的微血管形成的抑制作用。方法　构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,cd)基因的腺病毒穿梭载体 pAdTrack CMV cd ,与骨架载体pAdEasy 1在细菌内重组为 pAd cd ,经 2 93细胞包装... 详细信息

目的　探讨自杀基因系统对胰腺癌裸鼠移植瘤的微血管形成的抑制作用。方法　构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,cd)基因的腺病毒穿梭载体 pAdTrack CMV cd ,与骨架载体pAdEasy 1在细菌内重组为 pAd cd ,经 2 93细胞包装、扩增 ,氯化铯密度梯度离心制备纯化高效的cd腺病毒液 ,建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,观察cd基因的原位治疗及微血管形成抑制情况。结果　含cd基因腺病毒载体经酶切鉴定正确 ,包装纯化后 ,检测病毒滴度为 2× 10 11pfu/ml,体内实验显示cd基因原位转导对裸鼠胰腺癌移植瘤的微血管形成具有较明显的抑制效应。结论　腺病毒介导cd/ 5 fc自杀基因系统 ,不仅可以直接杀灭癌细胞 ,而且还可通过抑制移植瘤微血管的形成来抑制胰腺癌细胞的生长 ,可作为胰腺癌基因治疗的有效方法。

关键词：腺病毒胞嘧啶脱氨酶微血管形成基因治疗动物实验 cd/5-fc系统胰腺癌

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cd/5-fc系统对小鼠胃癌细胞杀伤作用的研究

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实用癌症杂志 2002年第5期17卷 471-474页

作者：姬舒荣刘晖张奕顾琴龙刘炳亚朱正纲林言箴同济大学附属同济医院 200065 上海第二医科大学瑞金医院 200025

目的探讨cd5-fc自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法以逆转录病毒载体介导cd基因转导小鼠胃癌细胞株Mfc,采用MTT法测定cd5-fc系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳... 详细信息

目的探讨cd5-fc自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法以逆转录病毒载体介导cd基因转导小鼠胃癌细胞株Mfc,采用MTT法测定cd5-fc系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞,同时采用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因的表达。结果转导cd基因可使Mfc对5-fc高度敏感,并且显示出强大的“旁观者”效应。经5-fc作用后,荧光染色可见到典型的凋亡细胞核形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯度,同时发现凋亡相关基因bcl-2基因表达下调,而bax与caspase-3基因表达上调。结论cd5-fc自杀基因系统对小鼠胃癌细胞Mfc具有强大的杀伤作用。

关键词： cd/5-fc系统小鼠胃癌细胞杀伤作用自杀基因系统作用机理胞嘧啶脱胺酶

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cd/5-fc系统治疗口腔鳞癌移植瘤的研究

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中华口腔医学杂志 2002年第6期37卷 477-477页

作者：王安训黄洪章陈剑经邝珠玑中山大学附属第一医院口腔科广州510080 中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科中山大学肿瘤防治中心

胞嘧啶脱氨酶基因（cd）/5-氟胞嘧啶（5-fc）自杀基因系统在多种恶性肿瘤治疗中具有强的杀伤作用，但在口腔鳞癌方面的研究仍较少，我们将cd/5-fc系统用于治疗口腔鳞癌移植癌。

关键词：胞嘧啶脱氨酶基因/5-氟胞嘧啶自杀基因系统疗效细胞凋亡透射电镜 cd/5-fc系统口腔鳞癌移植瘤

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腺病毒介导cd/5-fc系统联合照射对口腔鳞癌细胞的增敏研究

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中华放射肿瘤学杂志 2002年第3期11卷 147-147页

作者：王安训黄洪章中山大学附属第一医院口腔科广州510080 中山大学附属第二医院口腔科

放射治疗在口腔鳞癌治疗中起重要作用，对早期口腔鳞癌具有良好的疗效，然而对晚期的只能起姑息治疗作用。研究显示嘧啶类衍生物，如氟尿嘧啶（5-FU）可提高放射治疗的疗效。胞嘧啶脱氨酶基因/氟胞嘧啶（cytosine deaminase/5-fluorocyt... 详细信息

放射治疗在口腔鳞癌治疗中起重要作用，对早期口腔鳞癌具有良好的疗效，然而对晚期的只能起姑息治疗作用。研究显示嘧啶类衍生物，如氟尿嘧啶（5-FU）可提高放射治疗的疗效。胞嘧啶脱氨酶基因/氟胞嘧啶（cytosine deaminase/5-fluorocytosine, cd/5-fc）自杀基因系统可将5-fc代谢成5-FU，因此cd/5-fc系统联合照射将提高其对口腔鳞癌细胞的杀伤作用。笔者采用成克隆分析法研究口腔鳞癌细胞应用cd/5-fc系统治疗后，对放射的增敏作用。

关键词： cd/5-fc系统口腔鳞癌增敏放射治疗

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