检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：仝明薇中国农业科学院

学位级别：博士

犬瘟热病毒（cdv）感染引起的犬瘟热（CD）是水貂致死性疾病中的主要传染病之一,给水貂养殖业带来了严重的经济损失。该病没有有效的治疗方法,主要通过疫苗免疫进行预防,但是越来越多的文献表明,免疫过疫苗的动物仍能够发病。如何有效防... 详细信息

犬瘟热病毒（cdv）感染引起的犬瘟热（CD）是水貂致死性疾病中的主要传染病之一,给水貂养殖业带来了严重的经济损失。该病没有有效的治疗方法,主要通过疫苗免疫进行预防,但是越来越多的文献表明,免疫过疫苗的动物仍能够发病。如何有效防控cdv感染一直是研究者们关注的热点。病毒与宿主之间的相互平衡和制约决定了疾病进程和转归,因此更好的了解病毒-宿主之间相互作用关系有助于发掘潜在的抗病毒靶标。本研究首次利用iTRAQ技术对cdv感染前后的***细胞进行了比较蛋白质组学分析,并且对TLR3对cdv感染和复制增殖的影响和作用机制进行了研究,以期为有效防控水貂cdv感染提供一定的理论依据。为了揭示cdv与水貂细胞内蛋白之间的互作关系,我们利用蛋白质组学技术对cdv PS毒株感染前后24 h的***细胞内的蛋白表达变化情况进行了分析。共鉴定到520个差异蛋白,包括151个上调蛋白和369个下调蛋白。利用DAVID和UniProt数据库进行功能富集分析表明,差异蛋白参与多种生物学过程。Network和KEGG通路分析显示差异蛋白主要涉及NF-κB信号通路,此外还参与了NLRs和TLRs等通路。进一步利用Western Blot和激光共聚焦显微镜检测了cdv感染后NF-κB P65的磷酸化和核转移情况,结果显示,cdv感染***细胞确实能够激活NF-κB信号通路。为了确定TLRs是否参与了cdv感染***细胞诱导的免疫应答过程,以及进一步研究TLRs在cdv感染***细胞诱导的NF-κB激活过程中是否发挥作用。本研究利用qRT-PCR技术首先检测了cdv感染***细胞后,TLR3,TLR7和TLR8 mRNA的表达变化情况,同时利用MYD88抑制剂和TLR3抑制剂干扰相关蛋白的表达后,用双荧光素酶实验检测了cdv感染***细胞中TLRs对NF-κB相对活性的影响。结果表明TLRs确实参与了cdv感染***细胞的过程,同时也参与了cdv感染***细胞诱导的NF-κB激活过程。在上述研究基础上,进一步分析了TLR3对cdv复制增殖的影响及具体的作用机制。首先,利用RACE技术首次克隆了水貂TLR3全长基因,并成功构建水貂TLR3的真核表达质粒pCMV-myc-TLR3。随后利用TLR3过表达和TLR3抑制剂检测了不同处理下cdv的复制情况。结果发现,过表达TLR3能够抑制细胞中病毒mRNA和蛋白的合成,相反,抑制TLR3表达能够促进cdv的复制。为了揭示其中的作用机制,我们分析了cdv感染***细胞中TLR3对IFN-β,Mx1和NF-κB表达的影响,并利用NF-κB抑制剂研究了NF-κB对cdv复制的影响。结果表明,TLR3能够促进cdv感染***细胞中IFN-β,Mx1和NF-κB的表达,而抑制NF-κB激活能够促进cdv增殖。综合以上结果表明,TLR3在cdv PS感染***细胞中具有一定的抗病毒作用,可以通过促进NF-κB的激活发挥作用,也可能通过促进IFN-β和Mx1的产生来发挥抗病毒作用。本课题从蛋白质组学入手比较了cdv感染***细胞前后对水貂细胞内蛋白质表达的影响,从总体水平分析了病毒-宿主细胞之间的复杂的网络互作关系,从而筛选出对cdv感染反应强烈且与免疫应答紧密相关的蛋白进行下一步研究。后续通过分子水平研究相关基因对cdv复制增殖的影响及作用机制。本研究结果有助于深入了解cdv感染宿主细胞诱导的天然免疫应答的分子机制,为发掘潜在的抗病毒靶标和有效防控水貂cdv感染提供了实验依据。

关键词： cdv 蛋白质组学 TLR3 先天性免疫应答

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cdv疫苗毒在Vero细胞内包涵体形成规律的研究

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中国兽医科技 1991年第8期21卷 5-6页

作者：金扩世于永仁解放军兽医大学军事兽医研究所

采用Vero细胞生产cdv(犬瘟热)弱毒疫苗是目前国内外生产cdv疫苗的主要方法。若提高cdv疫苗的效价,必须掌握细胞株的选择、培养方法、收毒时间、疫苗的保存及疫苗的使用时机。为了把好疫苗的培养及收毒时间关,我们进行了cdv疫苗毒在Vero... 详细信息

采用Vero细胞生产cdv(犬瘟热)弱毒疫苗是目前国内外生产cdv疫苗的主要方法。若提高cdv疫苗的效价,必须掌握细胞株的选择、培养方法、收毒时间、疫苗的保存及疫苗的使用时机。为了把好疫苗的培养及收毒时间关,我们进行了cdv疫苗毒在Vero细胞内生长规律的试验。cdv病毒可在细胞内产生包涵体,用G和HE染色后在普通显微镜下即可进行检查。本试验结果表明,cdv疫苗毒在Vero细胞中生长。

关键词： cdv 疫苗毒 Vero细胞形成规律

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犬瘟热病毒(cdv) RPA-SYBR Green Ⅰ 检测方法的建立与应用

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中国兽医学报 2021年第5期41卷 905-910页

作者：郝镯张珊珊李楠田多李吉平孟轲音万忠海穆玉堂李忠义王承宇军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(cdv)的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)与SYBR GreenⅠ相结合,根据cdv N基因序列中同源性相对较高的保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引... 详细信息

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(cdv)的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)与SYBR GreenⅠ相结合,根据cdv N基因序列中同源性相对较高的保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,优化反应条件和体系,分析其灵敏性及特异性,最后建立一种可以进行临床应用的,特异性检测cdv的RPA-SYBR GreenⅠ方法。结果显示,成功构建检测cdv的RPA-SYBR GreenⅠ方法,此方法的最佳反应条件为实验人员闭合手掌中孵育10 min,引物与探针的最佳比例为2∶1。该方法的最低检测下限为1×10^(1)~1×10^(0) TCID_(50)/mL,能够特异地检测出cdv。应用本方法检测临床样品的结果与ELISA、RT-PCR方法的结果一致。结果表明,本试验所建立的cdv RPA-SYBR GreenⅠ检测方法特异性强,灵敏度高,操作简单,可应用于临床。

关键词： cdv RPA SYBR GreenⅠ N基因重组酶聚合酶扩增

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靶向H、N基因siRNA抑制Vero细胞中cdv的增殖研究

靶向H、N基因siRNA抑制Vero细胞中CDV的增殖研究

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作者：袁龙吉林大学

学位级别：硕士

犬瘟热(canine distemper,CD),是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,cdv)感染犬科等动物引起的一种高接触性的烈性传染病。该病传染性强,死亡率高,范围遍布全世界,给动物保护和经济养犬业造成了巨大的损失。目前该病以预防为主,尚无... 详细信息

犬瘟热(canine distemper,CD),是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,cdv)感染犬科等动物引起的一种高接触性的烈性传染病。该病传染性强,死亡率高,范围遍布全世界,给动物保护和经济养犬业造成了巨大的损失。目前该病以预防为主,尚无有效治疗手段。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象,是古老的生物体内的自我防御机制。RNA干扰技术现已经广泛应用于病毒病、治疗和靶点选择、保护宿主免受病毒感染、病毒基因组转录调控、表达目的蛋白、抑制抗原表达,揭示病毒与宿主相互作用的影响。cdv核衣壳蛋白(nucleocapsid,N)是包裹在RNA外的一层螺旋状蛋白,是cdv基因中最保守的区域。N蛋白基因组中存在9个碱基的T细胞表达基因。cdv血凝素蛋白(hemagglutinin,H)是存在于病毒囊膜表面的蛋白,主要功能是介导病毒粘附宿主细胞膜,在病毒入侵宿主细胞过程中起着重要作用。本实验以cdv的H基因和N基因作为靶基因,进行si RNA抑制病毒增殖的研究,为cdv的防控和治疗提供新思路及方法。本实验研究cdv在Vero细胞中的增殖特性。采用五种检测方法对Vero细胞接种cdv后不同时间段的增殖情况进行了检测。免疫荧光(IFA)结果显示,感染cdv 12h后观察到少量细胞出现绿色荧光,48h后大多数细胞出现绿色荧光;细胞病变(CPE)分析发现,感染cdv 36h后细胞开始出现病变,48h后大多数细胞出现明显病变;半数细胞感染量(TCID50)结果显示,感染cdv在36h-48h之间,病毒滴度值明显增高,表明病毒进入指数增殖期,48h后增殖速度减缓;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印记(western blot)检测结果发现cdv增殖趋势与TCID50结果一致。综合上述结果表明,cdv感染细胞12h后可以检测到子代病毒;36h后进入指数增殖期;48h后病毒增殖速度减缓;在72h病毒滴度达到峰值。针对cdv H基因和N基因设计并合成si RNA各三对,转染细胞后感染病毒。经过如下方法检测:IFA结果表明,转染细胞感染cdv 48h后,6个干扰组细胞出现的绿色荧光明显少于对照组;CPE结果表明,6个干扰组细胞病变比正常对照组少;TCID50结果表明:6个干扰组病毒感染滴度分别是对照组的1/293、1/11、1/29、1/83、1/302、1/90;Real-time PCR结果显示,6个干扰组的cdv基因拷贝数分别是对照组的12.96%、57.75%、23.47%、31.82%、12.82%、15.58%。western blot结果显示,干扰组病毒蛋白表达量少于对照组。以上结果表明,6对si RNAs均对cdv在vero细胞中的复制具有不同程度的抑制作用。其中H基因中以si H2效果最好,N基因中以si N1效果最好。针对RNAi技术中si RNA转染时机进行研究。分别设计如下实验组:A感染病毒前进行转染;B感染病毒后0-12h进行转染;C感染病毒12h后进行转染。通过五种检测方法检测cdv增殖情况。IFA结果表明,在接种病毒前进行转染的实验组几乎没有绿色荧光,而其他实验组大多数细胞产生荧光效果;CPE结果表明,在接种病毒前进行转染的实验组细胞病变比其他实验组少;TCID50结果表明,在接种病毒前进行转染的实验病毒滴度明显低于其他实验组;Real-time PCR结果与TCID50结果一致。western blot检测结果同样表明接种病毒前进行转染的实验组病毒蛋白表达量减少。以上结果表明,感染cdv前转染si RNA对病毒抑制效果最好,有效抑制时间为72-84h。该实验结果能为抗cdv感染提供参考依据;同时,也为cdv感染过程中病毒的基因功能分析提供新思路。

关键词： RNAi cdv N基因 H基因

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2.5G传输容量的光传送网络芯片cdv验证

2.5G传输容量的光传送网络芯片CDV验证

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作者：门福珍西安电子科技大学

学位级别：硕士

随着设计规模的不断增加,芯片的平均设计门数已经超越百万门级,验证已经成为设计流程中的主要制约瓶颈之一。目前,凭借其简单的操作以及直观、高效的特性,基于cdv(coverage driver verification)的验证方法越来越受到验证工程师的青睐... 详细信息

随着设计规模的不断增加,芯片的平均设计门数已经超越百万门级,验证已经成为设计流程中的主要制约瓶颈之一。目前,凭借其简单的操作以及直观、高效的特性,基于cdv(coverage driver verification)的验证方法越来越受到验证工程师的青睐。本文基于功能覆盖率验证的方法,结合公司的研发项目,对一款光传送网(OTN)芯片开展了验证研究。该芯片业务时钟为155M,采用IBM的90nm CMOS工艺,规模为三千万门左右,主要处理客户业务向OTU1的映射、解映射,同时进行业务开销的提取监视和插入等工作。为了验证该芯片,本文搭建了一个高效的自动化系统,该系统能够提供接口,从抽象层次产生基于约束的激励,支持设计的时序行为验证和基于断言的功能覆盖率的验证。基于该系统,本文对客户到波分侧逻辑进行了功能覆盖率分析,完成了对功能点的100%覆盖。结合验证实践,详尽讨论了验证中的一些重要环节,并总结出一套比较完善的基于功能覆盖率的验证流程,按照这一流程可以对实际芯片的验证工作提供有益的借鉴。文中涉及的工作对百万门级专用集成电路成功实践,不仅是对基于功能覆盖率验证理论的证实,并且从验证的思路和方法上对后续芯片有一定的借鉴作用。

关键词： cdv 验证光传送网

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兽医微生物资源标准化平台中PRRSV和cdv的分离鉴定及保存

兽医微生物资源标准化平台中PRRSV和CDV的分离鉴定及保存

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作者：赵化阳山东农业大学

学位级别：硕士

兽医微生物菌种资源标准化平台建设是国家自然科技资源共享平台的一个重要组成部分。其目的旨在建设兽医微生物资源的信息互通、以共享为核心的制度体系,以及培育专业化技术管理人才。本实验为国家兽医微生物菌种资源标准化菌种收集的... 详细信息

兽医微生物菌种资源标准化平台建设是国家自然科技资源共享平台的一个重要组成部分。其目的旨在建设兽医微生物资源的信息互通、以共享为核心的制度体系,以及培育专业化技术管理人才。本实验为国家兽医微生物菌种资源标准化菌种收集的一个组成部分。作者分别对山东收集的一例PRRSV可疑病料和北京收集的两例cdv可疑病料进行处理,最终分离得到PRRSV病毒一株,命名为TA-2;cdv两株,分别命名为CAU-1、CAU-2。采集山东地区的疑似PRRS的病猪病料—肺、肺门淋巴结、脾脏和脑组织,碾磨破碎后,无菌条件下分别将其攻毒至生长良好的MARC-145细胞(含飞片),并逐日观察,发现在第3d后出现明显CPE;第5d后MARC-145细胞出现明显凋亡,并从细胞培养瓶脱落;第7d时,部分培养瓶内细胞出现空斑现象。此时取出细胞飞片进行IFA检测。在暗室内与PRRSV FITC荧光抗体作用,然后荧光显微镜下可发现部分样品会出现绿色荧光。另外将出现CPE的细胞裂解提取RNA后,进行RT-PCR检测。PCR产物电泳后染色显像系统观察,可见有与目的片段一致的条带。最后综合以上结果可确定,该病猪确诊为PRRSV。将分离得到的PRRSV命名为TA-2株。 cdv的分离来自中国农业大学动物医院的两只疑似犬瘟热患狗。将两只狗解剖后发现存在着不同程度的肝、肾、肺病变,镜下发现神经系统也出现一定病变:脑神经细胞肿胀,细胞变圆,并有卫星现象的形成。将无菌采取的病料攻毒致生长良好的VERO和MDCK细胞中,逐日观察可见明显CPE的出现。分别对临床病料和攻毒后的细胞进行RT-PCR检测,均得到阳性结果;将细胞培养扩增后的cdv通过蔗糖密度梯度离心后进行电镜观察,但结果并不理想;对细胞进行H.E.染色光镜观察,在细胞攻毒2天后细胞浆出现空泡,并有噬酸性胞浆包涵体。综合以上结果,可以确诊两只犬死前均患有犬瘟热。并得到两株cdv,分别命名CAU-1、CAU-2。综上所述,通过运用组织病理学检测方法、病毒的细胞培养和分离、荧光抗体技术和RT-PCR检测方法对病毒进行鉴定,并成功采用低温冻干保存法对鉴定的毒株进行保存。本实验的顺利完成不仅丰富了兽医微生物菌(毒)种库资源,而且为这两种病毒进一步的分子生物学研究和临床检测技术开发奠定了一定的基础。

关键词： PRRSV cdv 细胞培养 RT-PCR IFA 兽医微生物资源平台

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狐源cdv H、F、N基因序列分析及其TaqMan荧光定量RT-PCR诊断方法的建立

狐源CDV H、F、N基因序列分析及其TaqMan荧光定量RT-PCR诊断方法...

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作者：吕品山东农业大学

学位级别：硕士

为进一步研究犬瘟热病毒的防控与诊断,本研究采用分子生物学技术,分别设计合成了扩增cdv H基因、F基因和N基因的三对引物。采用RT-PCR分别扩增了狐源cdv泰安株(cdv-FOX-TA)的H基因、F基因和N基因,并将其分别克隆进pMD18-T载体,进行序列... 详细信息

为进一步研究犬瘟热病毒的防控与诊断,本研究采用分子生物学技术,分别设计合成了扩增cdv H基因、F基因和N基因的三对引物。采用RT-PCR分别扩增了狐源cdv泰安株(cdv-FOX-TA)的H基因、F基因和N基因,并将其分别克隆进pMD18-T载体,进行序列测定与分析。此外本研究还设计合成了一对特异性引物与TaqMan探针,对反应体系与条件进行优化,建立一种TaqMan荧光定量RT-PCR检测cdv的方法,试验结果表明: ***-FOX-TA H基因含有1个ORF,全长1824bp,共编码607个氨基酸,与cdv-A75/17株和部分野毒株编码的氨基酸数量相同,与cdv- Onderstpoort编码的604个氨基酸不同。cdv-FOX-TA H基因终止密码子不是AUU而是UGA。其上存在8个潜在的天冬酰氨糖基化位点,与野毒株和疫苗株均不同,与cdv-Onderstpoort、cdv-Convac、cdv-A75/17、cdv-LP的同源性分别为89.2%、90.6%、98.6%和98.7%。 ***-FOX-TA的F基因含有1个ORF,全长1889bp,共编码662个氨基酸。有4个翻译起始密码子,其中3个位于阅读框内,1个位于阅读框外, cdv-FOX-TA F基因翻译起始密码子不是第1个或第2框内ATG,因其461-463位置不是ATG而是AUA,而是可能利用与cdv-A75/17相同的第二个起始密码子,因为cdv-FOX-TA这一区域的核苷酸与cdv-A75/17是完全保守的。cdv各毒株的F基因存在较大的差异,信号肽区域变异很大,但是F0蛋白裂解点(RRQRR)、13个半胱氨酸残基、4个潜在的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区都高度保守。 ***-FOX-TA N基因含有1个ORF,全长1572bp,共编码523个氨基酸,编码的氨基酸序列可以分为三个区:N端可变区、C端可变区和中间高度保守区。cdv-FOX-TA N基因与cdv-Onderstepoort、cdv-Convac的N基因的同源性分别为96.0%和95.9%,与野毒的同源性介于98.4%-98.9%之间。cdv-FOX-TA与弱毒的差异主要表现在C端和N端,中间区域高度保守。 4.建立的cdv TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,具有高度特异性、敏感性、良好的可重复性和稳定性、而且简便、快速。

关键词： cdv H基因 F基因 N基因荧光定量RT-PCR

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cdv式新旅程 2011郑州日产车主大会（广东站）

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车主之友 2011年第6期 266-268页

热，广东和香港的天气；热，车主内心的激动情绪；热，东风郑州日产对车主的关心爱护。2011年郑州日产年主大会首站在广东拉开帷幕，自4月30日开始，至5月4日结束，历时5天，以独具魅力的海洋文化为主题，为广大车主们开启了一段精彩的... 详细信息

热，广东和香港的天气；热，车主内心的激动情绪；热，东风郑州日产对车主的关心爱护。2011年郑州日产年主大会首站在广东拉开帷幕，自4月30日开始，至5月4日结束，历时5天，以独具魅力的海洋文化为主题，为广大车主们开启了一段精彩的夏日旅程。

关键词：郑州日产车主广东 cdv 海洋文化

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cdv改装车助力全球公共交通建设郑州日产提倡无障碍出行

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经营者(汽车商业评论) 2012年第12期 60-61页

11月15日,中国国际福祉博览会在北京中国国际展览中心举行,来自美国、英国、丹麦、意大利等17个国家和地区的250余家展商,涉及8000余种展品参加了展示。展品内容涉及残疾人、老年人的衣食住行、康复医疗和护理保健等各个方面,丰富的展... 详细信息

11月15日,中国国际福祉博览会在北京中国国际展览中心举行,来自美国、英国、丹麦、意大利等17个国家和地区的250余家展商,涉及8000余种展品参加了展示。展品内容涉及残疾人、老年人的衣食住行、康复医疗和护理保健等各个方面,丰富的展品为行动不便人士日常生活的顺利进行提供了多种选择。值得注意的是,近年来社会广泛关注的无障碍车,也出现在了展示中。其中,郑州日产

关键词：改装车中国国际展览中心郑州日产无障碍 cdv

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基于GCRA(T,δ)的cdv成形算法及其实现

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通信技术 1997年第3期30卷 37-40页

作者：胡文华朱世伟陈雷陈锦江华中理工大学计算机系武汉430074

文章提出基于通用信元速率算法GCRA（T，δ）的cdv成形算法，该算法能有效地成形cdv使之符合GCRA（T，δ）算法对cdv容限的要求，并对cdv成形器的实现和操作进行了讨论。

关键词： ATM 成形算法 B-ISDN cdv

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