胰高血糖素样肽-1（Glucagon like peptide-1,GLP-1）是人体肠道L细胞分泌治疗2型糖尿病的内源性生物分子,具有“肠促胰素效应”的血糖依耐性调节的显著优势。GLP-1类似物治疗糖尿病的效果不言而喻,但是目前给药途径还是侵入式,病人的...
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胰高血糖素样肽-1（Glucagon like peptide-1,GLP-1）是人体肠道L细胞分泌治疗2型糖尿病的内源性生物分子,具有“肠促胰素效应”的血糖依耐性调节的显著优势。GLP-1类似物治疗糖尿病的效果不言而喻,但是目前给药途径还是侵入式,病人的依从性较差;并且药物需要低温冷藏,不易方便携带。基于上述原因,本课题组准备依托纳米载体技术,构建GLP-1类似物靶向纳米载药体系。本研究将从以下两个方面进行靶向纳米载药体系前期条件的初步探索:（1）建立GLP-1类似物活性检测的cho模型,可以用于GLP-1类似物的筛选与活性验证;（2）探索“口服高吸收药物分子介导载体转运模式”的可行性:选取6种口服高吸收的药物,Caco-2细胞模型筛选其中转运效率相对较高的3种药物分子进行结构修饰并接到纳米金表面,Caco-2细胞模型探索其跨膜转运的效率。以中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,cho）细胞为模型细胞,构建真核表达载体pEGFP-N1/hGLP-1R-EGFP,并将其转染至cho中,经过G418抗性筛选和流式细胞仪分选富集后有限稀释,筛选获得一株稳定高表达的单克隆细胞株。倒置荧光分析、流式分析以及RT-PCR实验结果显示,此模型细胞转录和翻译了hGLP-1R-EGFP基因,并且表达的受体蛋白位于细胞膜侧。以利拉鲁肽和艾塞那肽作为模型药物进行活性检测分析,实验结果显示该检测模型具有极高的药物灵敏度,不同代数模型细胞测活相对稳定。并且进一步探索了影响GLP-1类似物EC50测量值的因素,主要包括模型细胞受体表达量、胎牛血清以及其单一组分BSA。构建Caco-2单层细胞模型,并从细胞跨膜电阻值、碱性磷酸酶表达量和微绒毛结构三个指标来评价模型构建成功。苯酚红渗透性实验进一步论证了Caco-2单层细胞膜的完整性。从药典及其他参考资料筛选出6种胃肠道口服高吸收药物,进行Caco-2细胞毒理实验,结果表明,当药物浓度低于120?M时,药物分子对于Caco-2细胞均没有明显的毒性。应用构建好的Caco-2细胞模型筛选了相对转运效率较高的吲哚美辛、美西律和普鲁卡因胺,其中吲哚美辛和美西律经过结构修饰可以稳定接入到纳米金的表面。将药物修饰的纳米金进行跨膜效率的探索,结果显示,经过药物修饰的纳米金能够促进纳米金黏附于Caco-2细胞层,是否跨膜吸收还有待进一步验证。
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