检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：洪乔军安徽医科大学

学位级别：博士

研究背景和目的肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤,因其高发病率和高死亡率以及症状隐匿和发展迅速,严重危害人类生命健康。在中国,肺癌的发病率为17.9%、死亡率达23.8%,是国内临床上发病率和死亡率均最高的恶性肿瘤且发病人数和死亡人数... 详细信息

研究背景和目的肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤,因其高发病率和高死亡率以及症状隐匿和发展迅速,严重危害人类生命健康。在中国,肺癌的发病率为17.9%、死亡率达23.8%,是国内临床上发病率和死亡率均最高的恶性肿瘤且发病人数和死亡人数均位居全球首位。肺癌是环境致病因素与自身遗传等多因素共同作用诱发的一种多基因、多因素的复杂疾病。近年,肺癌的发病诱因呈现多元化的趋势。肺癌诱发的因素包括吸烟、空气污染、职业暴露、遗传因素等。肺癌的治疗预后与临床分期密切相关,早诊断早治疗仍是最佳的治疗选择。然而,目前肺癌的诊断与治疗的手段尚未达到理想效果。因此,深入研究肺癌发病的相关异常基因和致癌信号通路,有助于我们更好的预防和治疗该疾病。纤维蛋白-2(Fibrillin-2,FBN2)是微纤维的重要组成部分,参与了人体结缔组织中弹性纤维的形成。FBN2基因表达异常与多种遗传性结缔组织疾病相关,包括先天性挛缩性蛛网膜下腔积液(CCA)、黄斑变性(MD)和肌病等。随着生物信息学研究技术的发展,FBN2被认为与癌症的发生发展有密切关系,在食道癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症组织中表达异常,并与其生存预后密切相关。在此基础上,我们推测FBN2基因可能在肺癌的发生与发展过程中发挥广泛的促癌作用。本课题在前期通过基因测序结合生物信息数据库分析肺癌与FBN2表达及其与预后的关系,明确FBN2作为肺癌诊断标志物及治疗靶点的潜能,并进一步分析FBN2在肺癌发生和发展的作用机制。第一部分FBN2基因与肺癌患者中表达异常研究目的探索肺癌临床样本的基因表达差异,寻找和研究与肺癌发病及恶性发展相关的异常基因,为肺癌的诊断与治疗提供诊断标志物及治疗靶点。研究方法本研究通过全外显子测序对5例临床收集的肺肿瘤样本及对应瘤旁组织进行多基因突变谱分析,探讨其与临床病理特征的关系,并寻找可以作为肺癌诊断和治疗靶点的突变基因;通过荧光定量PCR检测97例肺癌组织和对应的癌旁组织中FBN2基因的m RNA转录水平;通过石蜡包埋的肺癌组织切片并进行免疫组织化学实验分析FBN2蛋白在97例临床肿瘤样品中表达水平,并结合病理学分数分析FBN2蛋白表达水平与患者临床病理特征(年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、组织学类型、分化程度及吸烟史等)的相关性;通过TCGA数据库和GTEx数据库对比分析肺腺癌和肺鳞癌肿瘤组织及正常组织的FBN2基因表达差异及预后生存期的关联性,同时通过随访记录97例肺癌患者的实际生存情况并采用Kaplan-Meier法进行分析,采用COX法筛选影响肺癌进展的独立危险因素。绘制FBN2与常见肺癌血清标志物(NSE、SCC、CA50、CEA、VEGF)诊断肺癌的ROC曲线。结果全外显子测序分析结果显示,在肺癌早期基因突变以C-T置换的错义突变为主,其中突变频率最高的基因分别为TTN、OBSCN、SRPX、PIEZO1、PCNXL2、NEB、MDN1、MACF1、FBN2和BRCA2;基于分析结果和文献调研,本研究认为FBN2与肿瘤发生和发展有密切相关性。荧光定量PCR实验结果显示,FBN2基因的m RNA水平在肺肿瘤组织的显著升高(P<0.05);免疫组织化学分析结果显示,FBN2在肺肿瘤组织中高表达,主要分布于癌细胞边缘,且与患者的TNM分期、淋巴结转移及组织学类型、SCC和VEGF表达水平具有显著相关性,提示该基因的表达高低可能与肿瘤细胞的生长增殖具有相关性(P<0.05)。TCGA数据库和GTEx数据库分析结果显示,在肺鳞癌组织中,FBN2的表达显著升高,而肺腺癌组织则无明显差异,此外FBN2基因的表达高低与肺癌患者预后生存期具有相关性。分析97例患者的实际生存情况,结果显示不同TNM分期、VEGF表达水平、FBN2表达水平、远处转移情况与无进展生存期(Progression-free survival,PFS)显著相关,其中FBN2(-)患者的PFS显著长于FBN2(+)患者[(34.57±0.65)月vs(24.71±0.97)月,P<0.05]。COX分析结果也显示FBN2为影响肺癌预后的独立危险因素(P<0.05)。绘制FBN2与常见肺癌血清标志物(NSE、SCC、CA50、CEA、VEGF)诊断肺癌的ROC曲线,结果显示NSE、SCC的诊断价值较高(AUC均=0.81,P<0.01),CA50、FBN2诊断价值次之(AUC均=0.80,P<0.01)。结论FBN2在肺肿瘤组织中高表达,且与患者的TNM分期、淋巴结转移及组织学类型具有显著相关性;FBN2的高表达不利于肺癌患者预后。第二部分FBN2基因对肺癌细胞的恶性生物学功能影响及机制研究研究目的本研究前期发现FBN2的表达与肺癌预后存在显著关联性,为进一步探讨FBN2在肺癌中的作用机制,以及明确FBN2作为

关键词：肺癌 FBN2 EMT fak/erk信号通路侵袭与迁移

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

JAM-A通过调控fak/erk信号通路对宫颈癌细胞进展的影响

引用

中国优生与遗传杂志 2023年第9期31卷 1760-1766页

作者：赵晨阳彭丽秀邓赫男谭琛张玮何昌晖邓美林李琼郴州市第一人民医院/湘南学院第一附属医院湖南郴州423000

目的探讨连接黏附分子A(JAM-A)在宫颈癌细胞进展中的作用及其潜在分子机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测JAM-A在宫颈癌患者癌组织中的表达水平。将Vector、pcDNA-JAM-A、NC-siRNA、JAM-A-siRNA质粒分别转染至宫颈癌细胞中,C... 详细信息

目的探讨连接黏附分子A(JAM-A)在宫颈癌细胞进展中的作用及其潜在分子机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测JAM-A在宫颈癌患者癌组织中的表达水平。将Vector、pcDNA-JAM-A、NC-siRNA、JAM-A-siRNA质粒分别转染至宫颈癌细胞中,CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Western blotting分别检测细胞中JAM-A、PCNA、MMP-2、E-cadherin及fak/erk通路蛋白的水平。进行裸鼠皮下成瘤实验,检测JAM-A对宫颈癌细胞体内肿瘤生长的影响。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织中JAM-A mRNA和蛋白水平均显著上调。过表达JAM-A可显著增强细胞增殖、侵袭和迁移能力,升高JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达,降低E-cadherin蛋白表达。敲低JAM-A可显著抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力,降低JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达。pcDNA-JAM-A+PF-562271组细胞中p-erk2蛋白表达较pcDNA-JAM-A+Vehicle组显著降低。pcDNA-JAM-A组裸鼠皮下肿瘤的质量和体积较Vector组显著增加。结论过表达JAM-A通过调控fak-erk2信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移。

关键词：连接黏附分子A 宫颈癌侵袭迁移 fak/erk信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

肿瘤相关成纤维细胞COL10A1上调促进下咽癌上皮间质转化和血管生...

引用

作者：史金凤吉林大学

学位级别：博士

下咽癌是一种较少见的头颈部恶性肿瘤,发病率约十万分之1.6(年龄标化发病率)。由于缺乏特异性的临床表现和有效的监测指标,下咽癌的早期诊断率较低。同时,该病还具有侵袭转移率高、对放化疗不敏感等特点,导致手术和放、化疗治疗效果不佳... 详细信息

下咽癌是一种较少见的头颈部恶性肿瘤,发病率约十万分之1.6(年龄标化发病率)。由于缺乏特异性的临床表现和有效的监测指标,下咽癌的早期诊断率较低。同时,该病还具有侵袭转移率高、对放化疗不敏感等特点,导致手术和放、化疗治疗效果不佳,预后不良,5年生存率仅为30%-35%。尽管近年来下咽癌放疗、新辅助化疗、免疫治疗及保留功能的手术治疗等技术取得了长足进展,但其发病率及死亡率与2018年和2012年相比未见明显下降。因此,了解下咽癌的发病机制,探索有效的预后指标和药物靶点,对提高下咽癌患者的诊断、治疗和预后具有重要意义。肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤微环境中最重要的细胞成分之一,已有多项研究提示CAFs促进头颈鳞状细胞癌的转移、增加肿瘤血管生成、调节抗肿瘤免疫、介导对顺铂的耐药等,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用,成为肿瘤研究的热点之一。胶原蛋白家族是细胞外基质的主要成员,主要由成纤维细胞分泌,可与TME中众多细胞成分及肿瘤细胞相互作用并发挥促肿瘤作用。作为胶原蛋白的主要受体,整合素介导细胞粘附并将机械和化学信号通过fak等信号通路传递到细胞内部,促进肿瘤细胞增殖、EMT和肿瘤血管生成。高通量基因测序技术已经成为当前筛选肿瘤发生发展中多基因改变分子机制的重要工具,显著提高了癌症新靶标筛选效率。研究人员将组学数据与临床病理数据联合分析,为基础研究的临床转化、肿瘤的靶向治疗和联合治疗提供机会,提升了肿瘤精准诊断和治疗水平。目的:验证肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对下咽癌细胞恶性行为的促进作用。通过二代测序挖掘下咽癌CAFs与对应正常组织中成纤维细胞(NFs)的差异表达基因,观察CAFs表达的COL10A1对下咽癌细胞增殖、上皮间质转化(EMT)、血管生成拟态(VM)的作用及作用机制。方法:(1)遵循知情同意原则,收集吉林大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科进行手术的下咽癌患者的新鲜组织,分离培养下咽癌组织中CAFs和癌旁正常组织中成纤维细胞(NFs)。观察二者增殖及传代情况;采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测细胞因子表达情况;采用共培养方法观察CAFs和NFs对下咽癌细胞系FaDu增殖、迁移和侵袭能力的影响;采用免疫印迹方法检查CAFs对FaDu的EMT的影响。(2)提取CAFs和NFs的总RNA进行转录组测序,识别差异表达基因,构建差异基因共表达网络;识别并重聚类与临床特征相关的基因模块;对基因模块进行GO富集分析、构建PPI网络并鉴定HUB基因;在数据库中验证与下咽癌患者生存期密切相关的关键基因。(3)回顾78名下咽癌病例资料,分析其临床病理特征与关键基因之间的关系。CAFs转录组数据与分泌组学相印证挖掘下咽癌CAFs分泌组特点,并鉴定差异表达最明显且与临床病理相关的分泌蛋白编码基因COL10A1。采用双重荧光染色及免疫共沉淀检测下咽癌组织和高表达COL10A1的CAFs(CAF-H)、FaDu细胞中COL10A1及其受体的表达。(4)构建COL10A1过表达载体转染低表达COL10A1的CAF-L细胞得到稳定表达的CAF-L/OV细胞和转染空载体的CAF-L/Ve细胞;采用COL10A1si RNA寡核苷酸片段(oligo)转染高表达COL10A1的CAF-H细胞,分别用CAF-L/OV细胞和CAF-H/Si RNA细胞的培养基上清处理FaDu细胞,CCK8实验观察细胞活性、划痕实验检测细胞迁移能力。进行双向挽救验证COL10A1的生物学功能。(5)使用CAF-L/OV细胞和CAF-L/Ve细胞培养上清处理FaDu细胞,免疫印迹实验检测FaDu细胞中fak蛋白及磷酸化fak蛋白的表达变化,以及fak下游蛋白erk及其磷酸化的改变;免疫印迹实验检测FaDu细胞中与EMT相关的E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Twist表达情况;检测FaDu细胞中与血管生成相关的PDGFR、VEGFA和VEGFR的表达情况;检测FaDu细胞中与血管拟态相关的MMP9、MMP14和VE-Cadherin的表达水平。最后在上述体系中加入fak抑制剂,检测相关指标的变化。(6)CAF-L/OV、CAF-H/Si RNA和CAF-L细胞培养上清单独或与fak抑制剂共同处理FaDu细胞或HUVEC细胞,三维管形成实验观察细胞管形成能力的变化。(7)CAFs-L/OV和CAFs-L细胞分别与FaDu细胞共同植入裸鼠体内,观察移植瘤体积变化情况,免疫组织化学染色检测移植瘤中新生血管和血管生成拟态形成情况。结果:(1)原代培养CAFs表达α-SMA、FAP、Vimentin、S100、CD90等间质细胞标记;高表达IL6、IL8,在体外促进FaDu细胞增殖、迁移和侵袭能力,下调E-cadherin表达,并促进FaDu细胞中N-cadherin、

关键词：肿瘤相关成纤维细胞下咽癌 COL10A1 ITGA11 上皮间质转化血管生成拟态 fak/erk信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

补阳还五汤苷类组分抗内皮祖细胞衰老的作用机制

补阳还五汤苷类组分抗内皮祖细胞衰老的作用机制

引用

作者：孙正骥湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨补阳还五汤抗内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)衰老的作用及其机制,寻找该方主要药效物质,为其治疗内皮损伤性疾病提供依据,同时也为中药复方及新型组分中药的研究提供新思路。方法:(1)制备补阳还五汤及苷类组... 详细信息

目的:探讨补阳还五汤抗内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)衰老的作用及其机制,寻找该方主要药效物质,为其治疗内皮损伤性疾病提供依据,同时也为中药复方及新型组分中药的研究提供新思路。方法:(1)制备补阳还五汤及苷类组分干膏,对SD大鼠进行灌胃,提取含药血清,并对苷类成分进行鉴定。(2)分离提取SD大鼠骨髓EPCs,经t-BHP诱导建立EPCs衰老模型。(3)细胞随机分为空白组、模型组、补阳还五汤组、苷组、阿托伐他汀组。各组予以空白血清或含药血清预处理3小时后,经t-BHP诱导衰老模型,以β-半乳糖苷酶染色检测其衰老情况,CCK-8法检测其增殖率,细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测其迁移能力,体外成管实验检测其成管能力,Western bolt法检测整合素β3(integrinβ3,ITGβ3)、ITGβ6、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,fak)、磷酸化fak(p-fak)、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,erk1/2)、磷酸化erk1/2(p-erk1/2)蛋白表达情况。结果:(1)补阳还五汤及苷类组分干膏、含药血清中均检测到了芍药苷、苦杏仁苷、黄芪甲苷成分。(2)细胞提取后生长良好,经鉴定为EPCs。根据CCK-8及β-半乳糖苷酶染色结果,选择50μMol/L浓度的t-BHP诱导24小时构建EPCs衰老模型。(3)在细胞功能方面,与空白组相比,模型组细胞的衰老细胞率显著增加(P<0.001),细胞增殖率(P<0.01)、迁移能力(P<0.001)和成管功能(P<0.001)显著降低;与模型组相比,补阳还五汤苷类组干预后,细衰老胞率显著降低(P<0.001),细胞增殖率(P<0.001)、迁移能力(P<0.001)和成管功能(P<0.05)显著提升,且在衰老细胞率(P<0.001)和划痕实验(P<0.001)中作用强于补阳还五汤。Western blot检测相关蛋白表达情况,与正常组相比,模型组ITGβ3(P<0.001)、ITGβ6(P<0.001)、fak(P<0.01)、pfak(P<0.001)、p-erk1/2(P<0.001)蛋白表达均显著上调;与模型组相比,补阳还五汤能够显著下调ITGβ6(P<0.05)、p-erk1/2(P<0.05)蛋白表达,苷类组分能够显著下调ITGβ3(P<0.001)、ITGβ6(P<0.001)、p-fak(P<0.01)、p-erk1/2(P<0.001)蛋白表达。结论:补阳还五汤苷类组分能够通过促进EPCs增殖、迁移及成管等途径起到抗衰老作用,其机制可能与抑制ITGβ3和ITGβ6介导的fak/erk信号通路有关。

关键词：内皮祖细胞衰老补阳还五汤苷类组分整合素 fak/erk信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：