检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 248-250页

作者：张念马玉媛向思龙贾俊婷吴健敏章金刚吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心/病毒安全检测实验室北京100850 广西壮族自治区兽医研究所广西南宁530001

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98... 详细信息

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显g→a突变,并且偏好发生于gA、gg。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有g→a突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。

关键词：近交系五指山小型猪猪内源性反转录病毒囊膜基因 g→a突变

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中国特有小型猪内源性反转录病毒检测及变异特征研究

中国特有小型猪内源性反转录病毒检测及变异特征研究

引用

作者：张念吉林大学

学位级别：硕士

活细胞、组织、器官在不同物种间的移植被应用于缓解人源供体器官的短缺。考虑到器官大小、生理学特点、伦理道德等方面的问题，猪被认为是最合适的异种移植供体。然而猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retrovirus,PERV）感染人... 详细信息

活细胞、组织、器官在不同物种间的移植被应用于缓解人源供体器官的短缺。考虑到器官大小、生理学特点、伦理道德等方面的问题，猪被认为是最合适的异种移植供体。然而猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retrovirus,PERV）感染人源细胞系和重度联合免疫缺陷（severe combined immunodeficiency,SCID）小鼠的报道，使临床异种移植病原安全性成为人们关注的焦点。我国具有丰富的小型猪资源，其遗传稳定、繁殖周期短、耐粗饲等优点使其有望成为异种移植的优良供体。为了我国小型猪种资源的开发利用及提供安全可靠的供体器官，因此，在前期研究的基础上，深入开展PERV相关研究。一方面能够了解我国小型猪基因组中PERV的存在及表达状况、PERV分型及表达状况、PERV拷贝数，最终筛选出PERV低拷贝、PERV-C亚型阴性小型猪，为培育PERV阴性小型猪奠定基础；另一方面研究我国五指山小型猪PERV变异特征，为后期研究病毒的变异机制以及对异种移植病原安全性进行深入评价奠定基础。 1PERV低拷贝、PERV-C亚型阴性小型猪的筛选为了减低PERV感染风险，有必要筛选PERV低拷贝、PERV-C阴性小型猪。首先，根据PERV检测引物PERV-gag、pol、env，使用PCR及RT-PCR技术对108份小型猪样品（45份贵州小型猪、63份巴马小型猪）基因组DNA、cDNA进行检测，了解PERV存在及表达情况；其次，根据PERV通用分型引物对PERV进行分型鉴定及表达检测；最后，以TFRC为参考基因，SYBR greenⅠ染料法实时定量PCR检测PERV-C亚型阴性小型猪PERV-拷贝数。结果显示：（1）108份中国特有小型猪样品基因组中PERV存在及表达均为阳性。（2）PERV-A亚型、PERV-B亚型普遍存在于小型猪基因组中，PERV-A、PERV-B、PERV-C存在率分别为97.22（105/108）、97.22%(105/108)、39.81%(43/108)。其中贵州小型猪PERV-A、B亚型表达率为75.56%（34/45）、73.33%(33/45)，巴马小型猪表达率分别为77.78%(49/63)、76.19%(48/63)。贵州小型猪中PERV-C亚型存在率较高，可达95.56%(43/45)、其表达率为31.11%(14/45)，巴马小型猪PERV-C亚型存在及表达率均为0%（0/63）。（3）不同品系或同一品系不同个体基因组中PERV拷贝数不同，最低拷贝数2.48±0.59，最高可达57.62±8.18。对中国特有小型猪PERV亚型存在及表达进行检测，有助于了解PERV各亚型在不同小型猪品系中的分布。在此基础上筛选低拷贝、PERV-C阴性小型猪，在一定程度上能够减少病毒粒子的释放及传播，降低异种移植中PERV带来的风险，也为下一步培育PERV阴性小型猪奠定基础，对中国特有小型猪的开发利用具有重要意义。 2五指山小型猪内源性反转录病毒变异特征研究为了分析近交系不同代次五指山小型猪内源性反转录病毒变异特征，用常规PCR方法扩增近交系连续五代次（共15个样品）五指山小型猪PERV-env基因全长，全长为1981bp，共获得45条核苷酸序列，运用生物信息学方法将其与参考序列进行多重序列比对和遗传进化分析。结果显示：本实验获得的PERV-env核苷酸序列中有较多碱基突变，g→a突变数目相对其他碱基明显较多， g→a突变数最多可达40个，g→a突变率最高可达60.43%。单因素方差分析表明，连续五代次小型猪PERV g→a突变数目无明显差异， g→a突变点偏好发生于负链TC、CC，且在PERV-env核苷酸序列190bp和1875bp位置均有g→a突变发生。本实验所获得的PERV-env核苷酸序列与国外小型猪PERV-A序列亲缘关系很接近，但仍存在差异。本实验将有助于深入研究pA3F对五指山猪PERV病毒复制的影响及作用机制，为进一步开展异种移植中PERV的病毒安全性评价奠定基础。

关键词：拷贝数连续代次 PERV g→a突变中国特有小型猪

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