检索结果-内蒙古大学图书馆

分子植物育种 2022年

作者：常悦韩平安孙瑞芬唐宽刚石海波薛春雷梁亚晖李晓东吴新荣内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古自治区甜菜品种遗传改良与种质创制重点实验室

目前草甘膦作为全球用途最广的广谱性除草剂，其广泛的使用使培育抗草甘磷转基因(EPSPS)作物成为研究热点。为解决内蒙古地区玉米生产过程中的草害问题，培育抗除草剂玉米新品系，以玉米幼胚为受体，通过农杆菌介导法将抗草甘膦基因转... 详细信息

目前草甘膦作为全球用途最广的广谱性除草剂，其广泛的使用使培育抗草甘磷转基因(EPSPS)作物成为研究热点。为解决内蒙古地区玉米生产过程中的草害问题，培育抗除草剂玉米新品系，以玉米幼胚为受体，通过农杆菌介导法将抗草甘膦基因转入玉米自交系B104中，获得了转基因植株。PCR及RT-qPCR检测，表明目的基因EPSPS已经成功整合到玉米基因组中，并在转录水平上获得表达。数字PCR检测，获得了EPSPS基因低拷贝插入的转基因植株2株。建立了农杆菌介导的玉米B104遗传转化体系，为培育抗除草剂新品种奠定基础，对解决玉米草害问题，提高玉米产量具有重大意义。

关键词：玉米抗草甘膦基因(EPSPS) 农杆菌介导法 gus瞬时表达数字PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系

引用

林业科学 2020年第2期56卷 79-88页

作者：刘闵豪徐郡儡叶靖李周岐范睿深李龙西北农林科技大学林学院

【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可... 详细信息

【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可能,为杜仲基因功能的研究与定向改良奠定基础。【方法】以杜仲成年植株叶片为材料诱导愈伤组织,通过添加不同浓度植物生长调节剂与大量元素的MS培养基进行不定芽的诱导与增殖,确定最适培养基。在此基础上,在培养基中添加不同浓度抗生素及抑菌剂,研究愈伤组织对其敏感性。以获得的叶片愈伤组织受体系统为基础,通过L16(45)的正交试验,探索不同转化因子对农杆菌介导叶片愈伤组织遗传转化的瞬时转化效率的影响,建立最适瞬时转化体系。使用获得的瞬时转化体系对愈伤组织进行遗传转化操作,筛选抗性芽,对抗性芽进行gus组织化学染色与PCR检验。【结果】再生体系优化的结果表明,3/4大量元素浓度的MS培养基能够促进杜仲愈伤组织不定芽的诱导及生长;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0.27μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,诱导率为83%±10.0%;不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,平均伸长长度为(2.47±1.33)cm。抗生素与抑菌剂敏感性试验表明,遗传转化的选择培养基中,抑菌剂头孢霉素的最适浓度为200 mg·L^-1,筛选用的抗生素卡那霉素最适浓度为70 mg·L^-1。转化因子的正交试验表明,最适的农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的转化因子组合为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天。使用最适瞬时转化体系对约200个愈伤组织进行遗传转化操作,共筛选获得3个抗卡那霉素的抗性芽;gus组织化学染色显示gus基因在抗性芽中得到了表达,PCR检测证明这些抗性芽中存在NPTⅡ基因。【结论】杜仲叶片愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0.27μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA。农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织瞬时转化体系为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天,筛选培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA+200 mg·L^-1 Cef+70 mg·L^-1 Km。利用此体系共获得3个抗性芽,PCR分析和gus组织化学染色都表明T-DNA已整合到抗性芽基因组中。

关键词：杜仲农杆菌介导遗传转化再生体系 gus瞬时表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆沙冬青AnGolS2基因的克隆及表达调控研究

新疆沙冬青AnGolS2基因的克隆及表达调控研究

引用

作者：易萌萌沈阳农业大学

学位级别：硕士

近几年对植物抗逆性的研究已经越来越深入,而植物对逆境的应答及适应的机理也越来越受到人们的关注。植株在面对逆境时会做出相应的应答,从而更好地适应恶劣的环境（包括低温、高盐、干旱等等）。而启动子在调控基因的表达中起到了重要... 详细信息

近几年对植物抗逆性的研究已经越来越深入,而植物对逆境的应答及适应的机理也越来越受到人们的关注。植株在面对逆境时会做出相应的应答,从而更好地适应恶劣的环境（包括低温、高盐、干旱等等）。而启动子在调控基因的表达中起到了重要的作用,因此对基因启动子与逆境应答机理的关系研究逐渐成为热点。本研究选用了新疆沙冬青为实验材料,运用基因克隆技术,成功的克隆了An GolS2以及该基因的启动子,并且利用软件预测了该启动子的顺式作用元件,根据顺式作用元件设计缺失载体,最后进行瞬时表达分析,得到的试验结果如下:1.根据干旱胁迫转录组中找到的GolS基因的EST序列设计该基因特异性引物,用RACE扩增技术,以cDNA为模板对基因3’端及5’端进行扩增,之后对序列进行测序及拼接,得到基因全长序列1168 bp,其中编码区为987 bp。2.根据AnGolS2的编码区设计特异性引物,以新疆沙冬青DNA为模板,利用染色体步移技术,克隆得到821 bp的启动子序列,然后通过PLACE和plant CARE网站进行预测分析,得到顺式作用元件。预测结果表明该启动子序列除了TATA-Box和CAAT-Box等核心元件,还含有一些与非生物胁迫及激素应答相关的顺式作用元件。3.对新疆沙冬青的根茎叶三个部位进行低温、高盐和干旱胁迫的不同时间处理后进行实时荧光定量,发现在不同逆境胁迫下根茎叶中AnGolS2基因的表达量发生了不同的变化,推测An GolS2可能涉及到叶片光合产物的运输和储存过程。用ABA、IAA、NAA、GA3、MeJA、ETH对新疆沙冬青植株进行诱导后进行荧光定量分析,发现在不同的激素诱导下An GolS2基因的表达量发生变化,因此我们推测激素可能涉及到An GolS2基因表达调控。4.构建乙烯相关元件的缺失载体,含有乙烯元件的缺失体（385 bp）,不含有乙烯元件的缺失体（378 bp）,将两个缺失体和启动子全长序列一同连接到表达载体p CAMB IA 3301上,得到三个重组表达载体。利用农杆菌介导转化的方法,以gus基因为检测报告基因进行瞬时表达分析,结果表明:注射含有乙烯元件的启动子缺失片段表达载体的叶片经过乙烯诱导后有显色反应,注射不含有乙烯元件的启动子缺失片段表达载体的叶片用乙烯诱导后无显色反应,不用乙烯诱导的叶片无论注射哪个启动子缺失片段表达载体都没有颜色,说明An GolS2启动子上的这个乙烯转录因子结合位点可能对An GolS2基因的表达有调控作用,但这一元件的启动作用明显低于全长启动子,暗示在全长启动子的其它部位可能还存在着响应乙烯诱导的顺式作用元件。

关键词： AnGolS2 启动子 gus瞬时表达乙烯诱导新疆沙冬青

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

苦豆子遗传转化体系建立及SaLDC启动子缺失分析

引用

中国中药杂志 2017年第10期42卷 1853-1859页

作者：陆姗姗孟祥善李娟杨毅刘萍刘妍宁夏大学农学院宁夏银川750021

药用植物遗传转化体系的建立对其功能基因研究具有重要意义,该研究在已有苦豆子再生体系的基础上,对农杆菌菌液浓度、农杆菌侵染时间、农杆菌与苦豆子愈伤组织的共培养时间、愈伤组织预培养时间、乙酰丁香酮添加方式和乙酰丁香酮浓度6... 详细信息

药用植物遗传转化体系的建立对其功能基因研究具有重要意义,该研究在已有苦豆子再生体系的基础上,对农杆菌菌液浓度、农杆菌侵染时间、农杆菌与苦豆子愈伤组织的共培养时间、愈伤组织预培养时间、乙酰丁香酮添加方式和乙酰丁香酮浓度6个遗传转化因子进行优化,结果表明在预培养15 d的苦豆子愈伤组织中农杆菌菌液浓度A600为0.9、侵染时间15min、农杆菌与愈伤组织共培养48 h、并在侵染液中添加AS 200μmol·L^(-1)时,gus瞬时转化效率高达83.33%。以苦豆子基因组DNA为模板克隆获得Sa LDC上游1 260 bp的启动子序列(Gen Bank登录号KY038928),将不同长度(310,594,765,924,1 260 bp)的启动子缺失片段分别与gus报告基因融合,构建的植物表达载体经农杆菌介导转化苦豆子愈伤组织,gus瞬时表达结果显示,5个不同长度的Sa LDC启动子片段均可驱动gus在苦豆子愈伤组织中的表达,表明克隆所得的Sa LDC启动子具有启动活性,以310 bp的片段启动活性最强,为进一步分析该启动子功能奠定了基础。

关键词：苦豆子赖氨酸脱羧酶(LDC) 启动子基因 gus瞬时表达功能分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

α-硫辛酸对大豆农杆菌介导gus瞬时表达和芽诱导的影响

引用

大豆科学 2011年第4期30卷 552-556页

作者：杨晓凤卢涛周正剑寿惠霞唐桂香浙江大学农业与生物技术学院作物科学研究所浙江杭州310058 浙江大学生命科学学院植物科学研究所浙江杭州310058

以适宜转化大豆受体YC-2为材料,研究了抗氧化剂α-硫辛酸对农杆菌介导gus瞬时表达和芽诱导率的影响。结果表明:在共培养基中添加不同浓度的抗氧化剂可显著降低外植体的褐化率,随α-硫辛酸浓度的增加外植体褐化率明显减少,但白化率增加,... 详细信息

以适宜转化大豆受体YC-2为材料,研究了抗氧化剂α-硫辛酸对农杆菌介导gus瞬时表达和芽诱导率的影响。结果表明:在共培养基中添加不同浓度的抗氧化剂可显著降低外植体的褐化率,随α-硫辛酸浓度的增加外植体褐化率明显减少,但白化率增加,且这些白化的外植体在后期不易产生诱导芽;共培养中添加不同浓度的α-硫辛酸可增强gus瞬时表达率和芽诱导的再生率,且以25 mg·L-1效果最佳。

关键词：大豆 α-硫辛酸 gus瞬时表达芽诱导率

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导小麦遗传转化方法的优化与应用

引用

河南农业大学学报 2017年第6期51卷 781-785页

作者：张磊李国领张建周张德奇河南省农业科学院科研管理处河南郑州450002 河南省农业科学院小麦研究所河南郑州450002

为了优化农杆菌介导小麦遗传转化方法,以郑麦9023幼胚愈伤组织为材料,研究了60Coγ射线辐照对农杆菌介导法遗传转化的影响。结果表明,在辐照剂量为4 Gy,辐照处理后以继代培养24 h时β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因瞬时表达率最高。负压抽拉处... 详细信息

为了优化农杆菌介导小麦遗传转化方法,以郑麦9023幼胚愈伤组织为材料,研究了60Coγ射线辐照对农杆菌介导法遗传转化的影响。结果表明,在辐照剂量为4 Gy,辐照处理后以继代培养24 h时β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因瞬时表达率最高。负压抽拉处理结果表明,抽拉10次可明显提高农杆菌介导的遗传转化效率。转基因抗性再生植株bar基因分子标记检测结果表明,利用改良的遗传转化处理方法(4 Gy辐照+辐照后培养24 h+负压抽拉处理10次),可将遗传转化效率由2.2%提高至3.5%,优化后的小麦农杆菌转化方法可应用于小麦遗传转化。

关键词：小麦再生体系农杆菌遗传转化辐照负压处理 gus瞬时表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

‘突尼斯软子’石榴遗传转化体系建立及转化ICE1基因的研究

‘突尼斯软子’石榴遗传转化体系建立及转化ICE1基因的研究

引用

作者：赵玉洁河南农业大学

学位级别：硕士

石榴具有悠久的栽培历史,在我国被广泛种植。由于石榴具有较高的营养价值和保健功能,近年来石榴越来越受到消费市场的青睐,石榴产业在国内外迅速发展。‘突尼斯软子’石榴抗旱、抗病、栽培适应范围广,但其抗寒性较差,温度低于-10℃时,... 详细信息

石榴具有悠久的栽培历史,在我国被广泛种植。由于石榴具有较高的营养价值和保健功能,近年来石榴越来越受到消费市场的青睐,石榴产业在国内外迅速发展。‘突尼斯软子’石榴抗旱、抗病、栽培适应范围广,但其抗寒性较差,温度低于-10℃时,容易受冻害,抗寒性差制约其在我国范围内的推广和栽培。现代分子生物技术,尤其是植物组织培养和基因工程的发展,为石榴定向改良和新品种选育提供了重要的技术支持;而遗传转化技术的出现使得快速培育石榴抗寒新种质成为可能。本试验以‘突尼斯软子’石榴胚培苗的子叶、叶片、上胚轴和下胚轴为外植体,利用农杆菌介导法进行遗传转化,通过比较gus瞬时表达率对不同的预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、AS浓度进行了优化,建立‘突尼斯软子’石榴四种不同外植体的高效遗传转化再生体系;并在此基础上,利用根癌农杆菌介导法将抗寒基因ICE1转入石榴基因组,对转化所得抗性芽进行PCR检测;此外,为解决石榴遗传转化研究中不定芽生根率低的问题,对石榴试管嫁接技术进行初步的研究。主要研究结果如下:1.石榴四种不同外植体遗传转化体系的建立通过比较gus瞬时表达率,确定了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度等的最适处理。结果表明,以子叶为外植体时,预培养3 d,菌液浓度OD600为0.5,常规方法侵染25 min,共培养培养基添加30.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后gus瞬时表达率最高,为60.0%;以叶片为外植体时,预培养3 d,菌液浓度OD600为0.7,常规方法侵染25 min,共培养培养基添加20.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后gus瞬时表达率最高,为73.3%;以上胚轴为外植体时,预培养2 d,菌液浓度OD600为0.5,常规方法侵染20 min,共培养培养基添加30.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后gus瞬时表达率最高,为70.0%;以下胚轴为外植体时,预培养2 d,菌液浓度OD600为0.5,常规方法侵染25 min,共培养培养基添加30.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后gus瞬时表达率最高,为73.3%。2.农杆菌介导石榴不同外植体转化ICE1基因试验以石榴胚培苗子叶、叶片、上胚轴和下胚轴为外植体,利用农杆菌介导法进行ICE1基因遗传转化研究,试验初步获得大量抗性愈伤组织和少量抗性芽;并对获得的抗性芽进行PCR检测发现没有目的条带;抗性愈伤组织的扩繁和后续试验正在进行中。3.石榴试管嫁接技术研究在石榴遗传转化的研究中发现外植体诱导出的不定芽生长细弱、黄化,不利于生根得到完整植株,而试管嫁接技术能克服无根试管苗生根困难的问题;石榴试管嫁接试验采用改良劈接法,以带四片叶片茎尖(四叶一心)为接穗、根和下胚轴连接体(不带子叶)为砧木的组合是石榴试管嫁接的最佳处理组合,嫁接成活率达70.0%,显著高于其他处理组合。

关键词：石榴 gus瞬时表达 ICE1基因遗传转化试管嫁接

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

甘蔗SPSⅢ基因组DNA及5'侧翼序列的克隆与分析

引用

农业生物技术学报 2014年第1期22卷 1-9页

作者：周平何炜金光高玉娜叶冰莹陈由强陈如凯福建省农业科学院果树研究所福建省农业科学院水稻研究所/农业部闽台农作物种质资源利用重点开放实验室福建师范大学生命科学学院农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室

甘蔗是我国南方地区重要的糖料作物。为达到增糖的育种目标,对甘蔗蔗糖积累主要限速步骤的研究是必不可少的。蔗糖磷酸合成酶(SPS)作为蔗糖合成途径的关键限速酶,对甘蔗中蔗糖合成和碳水化合物分配有着重要的影响。本研究采用长距离PCR... 详细信息

甘蔗是我国南方地区重要的糖料作物。为达到增糖的育种目标,对甘蔗蔗糖积累主要限速步骤的研究是必不可少的。蔗糖磷酸合成酶(SPS)作为蔗糖合成途径的关键限速酶,对甘蔗中蔗糖合成和碳水化合物分配有着重要的影响。本研究采用长距离PCR法(LD-PCR)克隆到两条不同长度的甘蔗(Saccharum ***95-1702)SPSⅢ基因组DNA片段。序列分析表明,所得的片段基因结构相同,均含有13个外显子和12个内含子,其开放读码框(ORF)编码964个氨基酸,序列提交GenBank,获得查询登陆号EU278617、EU278618。以此为基础,继续从甘蔗基因组中扩增出先前未知的SPSⅢ基因5’侧翼序列,申请GenBank登陆号KC422670。转录因子结合位点生物信息学分析表明,该序列含有顺式DNA作用元件和启动子TATA启动盒。为进一步验证5’侧翼序列的启动子活性,分别截取5段不同长度的SPSⅢ基因5’侧翼序列与报告基因gus融合,构建嵌合基因表达载体质粒,基因枪微弹轰击甘蔗愈伤组织观测瞬时表达,证实了所克隆到的5’侧翼序列具有启动子活性,是甘蔗SPSⅢ基因的启动子,且具有一定的表达特性。本研究通过克隆分析SPSⅢ基因以其启动子,为研究基因结构和生物学功能提供了基础资料。

关键词：甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因组DNA序列 5’侧翼序列 gus瞬时表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导Δ6-脂肪酸脱氢酶基因转化棉花体系的优化

农杆菌介导Δ6-脂肪酸脱氢酶基因转化棉花体系的优化

引用

作者：王静新疆大学

学位级别：硕士

将本实验室已经克隆到的新疆软紫草△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因连接到植物双元表达载体pCAMBIA2301.1上构建成表达载体pCAMBIA2301.1-D6D，并用电击转化的方法将载体转入到农杆菌EHA105中。以新疆主栽棉花品种新陆早19号和新陆早23号... 详细信息

将本实验室已经克隆到的新疆软紫草△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因连接到植物双元表达载体pCAMBIA2301.1上构建成表达载体pCAMBIA2301.1-D6D，并用电击转化的方法将载体转入到农杆菌EHA105中。以新疆主栽棉花品种新陆早19号和新陆早23号下胚轴为外植体，研究了不同浓度的卡那霉素(kanamycin)对棉花出愈率的影响以确定合适的卡那霉素筛选浓度，结果表明当培养基中卡那霉素浓度达到25mg/L时，低于5%的下胚轴能够长出愈伤，当培养基中卡那霉素的浓度达到或高于30mg/L时两个品种的棉花下胚轴均不能长出愈伤，因此，选30mg/L的卡那霉素为后续转化的筛选浓度。以gus基因为报告基因，通过检测gus基因在转化后棉花下胚轴中瞬时表达情况及下胚轴在筛选培养基上的出愈率，分析了菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮浓度、超声波辅助处理、共培养温度和共培养时间等因素对农杆菌介导转化新疆棉花的影响。结果分析表明在菌液浓度OD600=0.5，浸染时间15min，共培养基中添加50～100μmol/L乙酰丁香酮，24°C共培养48h的条件下新陆早19和新陆早23棉花品种均能够获得较好的转化效果。抗性愈伤经gus组织染色显示出蓝色，提取抗性愈伤基因组DNA经D6D基因特异性引物XAM/APAL PCR扩增，说明有目的基因转入抗性愈伤中。以茎尖为外植体的转化获得抗性苗，抗性植株叶片经gus组织染色显现蓝色，叶片基因组DNA经D6D基因特异性引物XAM/APALPCR扩增，说明目的基因转入到棉花茎尖中。本实验研究了不同处理对转化的影响建立了高效的新疆棉花农杆菌介导的遗传转化体系，为利用基因工程技术进行新疆棉花抗病育种及种质改良提供技术基础。

关键词：遗传转化 gus瞬时表达农杆菌棉花

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导转化新疆棉花体系的优化

引用

新疆大学学报（自然科学版） 2013年第2期30卷 218-223页

作者：王静聂祥祥李冠新疆大学生命科学与技术学院新疆乌鲁木齐830046

以新疆主栽棉花品种新陆早19号和新陆早23号下胚轴为外植体,以gus基因为报告基因,通过检测gus基因在转化后的棉花下胚轴中瞬时表达情况,分析了菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮浓度、超声波辅助处理、共培养温度和共培养时间等因素对gus... 详细信息

以新疆主栽棉花品种新陆早19号和新陆早23号下胚轴为外植体,以gus基因为报告基因,通过检测gus基因在转化后的棉花下胚轴中瞬时表达情况,分析了菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮浓度、超声波辅助处理、共培养温度和共培养时间等因素对gus瞬时表达的影响.实验结果表明:菌液浓度OD600=0.5,浸染时间15 min,乙酰丁香酮浓度100μmol/L,24 C共培养72 h的转化条件下gus基因瞬时表达率最高.

关键词：植物学遗传转化 gus瞬时表达农杆菌棉花

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：