检索结果-内蒙古大学图书馆

食用菌学报 2018年第2期25卷 23-28页

作者：刘建雨张美彦张丹徐珍宋春艳李巧珍尚晓冬谭琦黄志勇胡卫红张引芳赵静王瑞娟上海市农业科学院食用菌研究所农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201403 上海雪榕生物科技股份有限公司上海201401 上海光明森源生物科技有限公司上海201400

以不完全酶解的金针菇(Flammulina velutipes)菌丝碎片作为转化受体,通过电击转化法将载体pYN6981导入金针菇单核体Dan3基因组中。结果显示:在复筛培养基上生长良好的转化子,其基因组中可扩增出潮霉素基因片段,通过激光共聚焦显微镜可... 详细信息

以不完全酶解的金针菇(Flammulina velutipes)菌丝碎片作为转化受体,通过电击转化法将载体pYN6981导入金针菇单核体Dan3基因组中。结果显示:在复筛培养基上生长良好的转化子,其基因组中可扩增出潮霉素基因片段,通过激光共聚焦显微镜可观察到绿色荧光,gus组织染色显示为蓝色,说明目的载体已经成功插入金针菇基因组中并获得表达。转化效率达16个转化子每10~6个菌丝碎片。有丝分裂稳定性分析显示80%的转化子可以稳定遗传。

关键词：遗传转化绿色荧光蛋白 gus组织染色

来源：评论

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辣椒CCR1基因启动子的克隆及瞬时活性表达分析

引用

分子植物育种 2022年第18期20卷 5938-5946页

作者：吴丹张丽平张威孙佩霞朱婕汪志伟邓勤成善汉海南大学园艺学院海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228

肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是木质素生物合成途径中的关键限速酶,本研究从三个不同辣度的辣椒品种‘美国厚肉圆椒’、‘琼海小米椒’、‘海南黄灯笼’基因组中克隆了CCR1基因的启动子,序列长度分别为2075、2102、2082 bp,序列AT含量都占71%... 详细信息

肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是木质素生物合成途径中的关键限速酶,本研究从三个不同辣度的辣椒品种‘美国厚肉圆椒’、‘琼海小米椒’、‘海南黄灯笼’基因组中克隆了CCR1基因的启动子,序列长度分别为2075、2102、2082 bp,序列AT含量都占71%,符合真核植物启动子特征。启动子分析软件PlantCARE预测CCR1基因启动子的序列除含有启动子基本核心元件CAAT-box以及TATA-box外,还包括一些激素、光照、生物胁迫及真菌诱导响应等顺式作用元件。瞬时转化烟草可以驱动gus基因表达,具有启动活性。本研究结果为阐明CCR基因参与辣椒木质素合成的调控机制及启动子转录作用机理研究奠定进一步的理论基础。

关键词：辣椒(Capsicum L.) CCR1基因启动子瞬时转化 gus组织染色

来源：评论

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水稻（Oryza sativa L.）苹果酸酶（NADP-ME3）基因的表达特性研究

水稻（Oryza sativa L.）苹果酸酶（NADP-ME3）基因的表达特性研究

引用

作者：李秀峰东北林业大学

学位级别：硕士

NADP-苹果酸酶（NADP-ME）是一类广泛存在生物界的氧化脱羧酶,在二价金属离子（Mg2+或Mn2+）存在下催化苹果酸氧化脱羧产生丙酮酸、CO2和还原性物质NADPH, NADP-ME在植物的生长代谢及发育过程中扮演着重要角色,对保持植物细胞的渗透势,... 详细信息

NADP-苹果酸酶（NADP-ME）是一类广泛存在生物界的氧化脱羧酶,在二价金属离子（Mg2+或Mn2+）存在下催化苹果酸氧化脱羧产生丙酮酸、CO2和还原性物质NADPH, NADP-ME在植物的生长代谢及发育过程中扮演着重要角色,对保持植物细胞的渗透势,稳定细胞质的pH和保持植物根系的离子吸收平衡起重要作用,是生物体生命活动中重要的酶之一。编码水稻（Oryza sativa L.） NADP-ME的是多基因家族,研究表明该家族由3个胞质型NADP-ME和1个质体型NADP-ME构成,本研究主要针对其中一个胞质型成员（命名为NADP-ME3）(GeneBank NM001061367)的表达特性进行初步研究。前期我们克隆得到了该基因的cDNA片段,应用生物信息学对其序列进行分析及预测,由序列分析结果可知,NADP-ME的ORF为1712bp,编码570个氨基酸,分子量为62.9kD,之后我们通过连接GFP报告基因研究该基因亚细胞定位情况,在转基因拟南芥中发现该基因定位于细胞质,属于NADP-ME基因家族的胞质型成员。为确认NADP-ME3基因的的组织表达特异性,我们克隆得到NADP-ME3基因5’端上游启动子区域,连接gus报告基因构建ME3-pro-gus表达载体转化拟南芥,在转基因拟南芥中检测到gus基因在植物生长不同时期表达于不同部位,主要表达于植物的主叶脉中。为检测NADP-ME3基因在NaCl、NaHCO3及PEG非生物逆境下的表达情况,选取水稻做各种胁迫处理,运用定量PCR的手段进行解析,结果显示,在NaCl胁迫下,NADP-ME3基因随浓度升高在叶表达增加在根部表达略有降低,在PEG干旱处理条件下,NADP-ME3在叶中的mRNA表达水平相对升高,而在根中表达情况一直持续很低,在碱性环境条件下,NADP-ME3的表达量是相对降低的,且根部降低程度大于叶中。该结果表明NADP-ME3能够响应多种非生物逆境,与植物的非生物胁迫有应答关系。为深入了解NADP-ME3基因在植物应对非生物胁迫条件中所发挥的作用,通过对过表达NADP-ME3转基因拟南芥的表型观察,发现NADP-ME3在一定程度上能够增加植物对非生物逆境的耐受性。

关键词：水稻 NADP-ME基因亚细胞定位启动子 gus组织染色转基因拟南芥

来源：评论

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木糖筛选系统在黄瓜转化中的应用

木糖筛选系统在黄瓜转化中的应用

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作者：崔丽巍东北师范大学

学位级别：硕士

随着转基因植物商业化,转基因植物的生物安全性,尤其是转基因植物中的抗性标记基因,受到了越来越多的关注。因为人们担心这些抗性标记基因能够潜在地流向杂草、微生物,对环境造成危害,以及植物产生意外的性状,从而引发食品或生态安全问... 详细信息

随着转基因植物商业化,转基因植物的生物安全性,尤其是转基因植物中的抗性标记基因,受到了越来越多的关注。因为人们担心这些抗性标记基因能够潜在地流向杂草、微生物,对环境造成危害,以及植物产生意外的性状,从而引发食品或生态安全问题。在植物遗传转化系统中,目前应用较为广泛的筛选标记基因主要有两大类:抗生素抗性酶基因和除草剂抗性酶基因。常用的抗性酶基因包括nptII基因、cat基因、hpt基因、bar基因等。转化的细胞可以在含有抗生素和除草剂的培养基中正常生长,因此利用这些标记基因的筛选体系都可能存在生物安全性问题,因而采用无害的正筛选系统进行植物遗传转化是基因工程的重要目标之一。木糖筛选是一种正选择筛选体系,木糖异构酶基因(XylA)是一种安全的标记基因。我们首先通过七组对照实验确定木糖作为选择剂的最佳浓度。本实验以大肠杆菌XylA作为选择标记基因,利用木糖作为选择剂获得能够表达带有gus报告基因的转基因黄瓜。同时,为了获得对肿瘤有积极作用的aFGF的单链抗体,本实验还构建了pX390-scFv载体,以木糖作为筛选剂,进行黄瓜遗传转化研究。本研究初步建立了农杆菌介导的基于木糖选择系统的黄瓜转化体系。以黄瓜真叶为外植体,预培养2天,以携带表达载体的农杆菌LBA4404侵染黄瓜,选择培养基添加1 mg/ml的2ip和1 mg/ml的2,4-D,待愈伤长出时,选择培养基添加0.3mg/ml的2ip。选择培养基中加入15g/L的木糖和15g/L的蔗糖,获得的转化效率较高。通过这套程序,我们获得了19株转基因黄瓜植株,通过PCR和gus组织染色,初步证明12株为阳性植株。

关键词： XylA aFGF单链抗体转基因黄瓜 gus组织染色

来源：评论

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