检索结果-内蒙古大学图书馆

洪湖碘泡虫SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr检测方法的建立及其应用

水生生物学报 2020年第2期44卷 268-274页

作者：罗丹赵媛莉刘新华章晋勇中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室农业部淡水养殖病害防治重点实验室淮安中心武汉430072 中国科学院大学北京100049

洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)引起的鲫“喉孢子虫病”严重危害我国异育银鲫养殖。病原丰度是决定病害发生的最重要因素之一,因此建立洪湖碘泡虫的定量检测方法,不仅可用于异育银鲫“喉孢子虫病”的早期诊断,也可应用于养殖系统中... 详细信息

洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)引起的鲫“喉孢子虫病”严重危害我国异育银鲫养殖。病原丰度是决定病害发生的最重要因素之一,因此建立洪湖碘泡虫的定量检测方法,不仅可用于异育银鲫“喉孢子虫病”的早期诊断,也可应用于养殖系统中洪湖碘泡虫的定量监测,为该病的暴发风险预警及防控措施的效果评价提供技术手段。研究根据洪湖碘泡虫的ITS基因序列,设计合成一对特异性引物HHF/R,建立了洪湖碘泡虫的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性及应用性进行了验证。结果显示,该方法能特异性检测出洪湖碘泡虫,而与多涅茨尾孢虫、倪李碘泡虫、普洛宁碘泡虫、吴李碘泡虫之间无交叉反应;最低检测限为3.02×101copies/μL,灵敏性较常规pcr高出1000倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法可定量检出洪湖碘泡虫全生活史阶段,包括鱼体内移行发育的前孢子阶段及养殖系统环境,如池塘水样及底泥样品中分布的洪湖碘泡虫。因此,所建立的洪湖碘泡虫SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr方法特异性好、灵敏度高、重复性稳定,可应用于异育银鲫全养殖阶段洪湖碘泡虫的定性、定量监测。

关键词：洪湖碘泡虫异育银鲫 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr 监测

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跨膜蛋白39A基因SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr检测方法的建立及评价

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浙江农业学报 2018年第11期30卷 1958-1964页

作者：李向茸王兴陇李倩马瑞仙张海霞李琼毅马忠仁冯若飞西北民族大学生物医学研究中心甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr方法。结果显示:标准... 详细信息

为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr方法。结果显示:标准品模板在3. 937×10~8～3. 937×10~3拷贝·μL^(-1)范围内呈良好的线性关系,R^2可达0. 999;该方法特异性较好,检测灵敏度可达3. 937×10~2拷贝·μL^(-1);组内和组间变异系数均小于1%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法能够检测出不同细胞中的TMEM39A含量,具有种属通用性。该研究方法的建立为临床上提供了一种TMEM39A的快速检测和定量分析技术。

关键词：跨膜蛋白39A SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr 特异性灵敏性

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牛冠状病毒SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr检测方法的建立及初步应用

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中国兽医杂志 2016年第6期52卷 22-24,27页

作者：沈付娆杨建乐赵贵民朱彤程凯慧王洪梅何洪彬山东省农业科学院奶牛研究中心山东济南250100 山东师范大学生命科学学院山东济南250000 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

针对牛冠状病毒(BCoV)N基因保守序列设计合成了1对特异性引物,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了检测BCoV的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr方法。在1个反应体系中模板最低检测限为7.8 copies/μL,比普通RT-pcr更加灵敏;与牛主要... 详细信息

针对牛冠状病毒(BCoV)N基因保守序列设计合成了1对特异性引物,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了检测BCoV的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr方法。在1个反应体系中模板最低检测限为7.8 copies/μL,比普通RT-pcr更加灵敏;与牛主要消化道和呼吸道病毒病病原均无交叉反应;批内、批间重复变异系数均低于1.5%;应用定量pcr检测了39份疑似临床病料,阳性检出率为51.28%(20/39),普通RT-pcr为41.03%(16/39)。结果表明,该方法特异性强、稳定性好、准确率高,本方法将为BCoV的临床诊断和流行病学调查提供技术保障。

关键词：牛冠状病毒 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr 病毒核酸检测

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SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr检测PRRSV方法的建立

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动物医学进展 2016年第4期37卷 1-5页

作者：罗忠永王印杨泽晓四川农业大学动物医学院动物检疫实验室四川成都611130

根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株... 详细信息

根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株验证该检测方法的稳定性;以10倍梯度稀释的质粒为标准品扩增并构建标准曲线,探究该检测方法的灵敏度,随机挑取10份保存的PRRSV阳性病料和10份阴性病料同时使用农业部推荐的PRRSV RT-pcr检疫标准方法和建立的方法进行检测,以确定2种方法检测的符合率。结果显示,使用建立的方法可以在54.4℃80min内完成对PRRSV的检测,该检测方法具有特异性和稳定性;检测灵敏度为6.8×10拷贝/μL;以Ct值为横坐标,扩增序列拷贝浓度的对数值为纵坐标,得到标准曲线,方程为y=-3.411 x+39.002,R2=0.999;对随机挑取的10份PRRSV阳性病料和10份阴性病料进行检测,结果2种方法检测结果的符合率100%。结果表明,成功建立了PRRSV SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr

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SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr检测结直肠癌中Tiam-1和HPA-1基因的表达

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中国现代普通外科进展 2010年第7期13卷 509-513页

作者：崔京远马红马文慧王贺周东风青岛市市立医院普外科山东青岛266011 青岛市市立医院风湿免疫科山东青岛266011 济南军区总医院干部三科山东济南250031 青岛市传染病医院肝病科山东青岛266033

目的:检测Tiam-1基因和HPA-1基因在结直肠癌组织中的表达水平,探讨两者与结直肠癌侵袭转移及预后的关系。方法:选取2009年8月-2010年1月我院行手术治疗的结直肠癌患者53例。采用SYBR greenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-pcr)方... 详细信息

目的:检测Tiam-1基因和HPA-1基因在结直肠癌组织中的表达水平,探讨两者与结直肠癌侵袭转移及预后的关系。方法:选取2009年8月-2010年1月我院行手术治疗的结直肠癌患者53例。采用SYBR greenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-pcr)方法检测Tiam-1 mRNA及HPA-1 mRNA在结直肠癌组织、癌旁组织(距癌2cm)及远离结直肠癌的手术切缘正常组织中(距癌5cm以上)的表达水平,并分析两者与结直肠癌临床病理参数的关系。结果:HPA-1 mRNA和Tiam-1 mRNA在结直肠癌中的表达水平(35.87±12.30,40.79±9.32)显著高于癌旁组织(13.13±6.71,12.39±5.38)和正常组织(4.06±3.55,6.09±4.86,P均<0.05),癌旁组织中二者的表达水平高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Tiam-1和HPA-1的基因表达水平在肿瘤的高/中分化和低分化之间,T1～T2和T3～T4之间,有淋巴结转移和无淋巴结转移之间、有血行转移和无血行转移之间及Ⅰ～Ⅱ和Ⅲ～Ⅳ期之间的差异均有统计学意义(P均<0.05)。Spearman等级相关分析证明了Tiam-1与HPA-1的表达呈正相关趋势(OR=0.46,P=0.048)。结论:Tiam-1 mRNA和HPA-1 mRNA在结肠癌组织中呈高表达,且二者的表达增强可促进结肠癌的侵袭转移,联合检测Syndecan-1及HPA-1对于指导结肠癌临床治疗及判断预后有重要价值。

关键词：结直肠肿瘤侵袭转移预后 Tiam-1 HPA-1 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr

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牛分枝杆菌SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr检测方法的建立

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南方农业学报 2012年第10期43卷 1584-1589页

作者：谢志勤谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢丽基彭宜范晴牟群莫文胜广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001 桂林市动物疫病预防诊断中心广西桂林541001 永福县动物疫病预防诊断中心广西永福541800

【目的】建立一种检测牛分枝杆菌的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr,为防控牛结核病提供技术支持。【方法】根据牛分枝杆菌特异性基因序列(***87961,gi9954088)设计合成一对扩增牛分枝杆菌的特异性引物,从引物设计、各成分配比、样品采集... 详细信息

【目的】建立一种检测牛分枝杆菌的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr,为防控牛结核病提供技术支持。【方法】根据牛分枝杆菌特异性基因序列(***87961,gi9954088)设计合成一对扩增牛分枝杆菌的特异性引物,从引物设计、各成分配比、样品采集及样品DNA提取等方面进行优化,并对建立的方法进行标准曲线、溶解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】牛分枝杆菌SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr的检测模板范围为1.0×109～1.0×10拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系,溶解曲线表现为单一波峰,Tm值为86.48～86.65℃。SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr的牛型分枝杆菌扩增结果为阳性,其他参试菌株均为阴性;可检测出10拷贝/μL的牛分枝杆菌DNA,敏感性是常规pcr的100倍;Ct值变异系数小于5%,重复性好;对50份PPD检测为阳性的牛鼻黏液、牛奶和淋巴结进行检测,其结果与常规pcr检测结果一致。【结论】建立的SYBR green Ⅰ实时荧光定量pcr具有快速、便捷、准确等优点,适合于牛分枝杆菌的鉴别诊断。

关键词：牛结核病牛分枝杆菌 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr 检测

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SYBR green Ⅰ荧光定量pcr检测类风湿关节炎患者血清miR-146a的表达及意义

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临床检验杂志 2014年第6期32卷 422-425页

作者：刘琴王伟张仙珍浙江省立同德医院检验科杭州310012 浙江省立同德医院肾内科杭州310012

目的用SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr法检测类风湿关节炎（RA）患者血清miR-146a的表达水平,探讨其在RA诊断中的意义。方法以U6为内参照,用SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr检测RA患者48例（活动期30例、缓解期18例）、骨性关节炎（OA）患者2... 详细信息

目的用SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr法检测类风湿关节炎（RA）患者血清miR-146a的表达水平,探讨其在RA诊断中的意义。方法以U6为内参照,用SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr检测RA患者48例（活动期30例、缓解期18例）、骨性关节炎（OA）患者22例和体检健康者25例血清miR-146a的表达水平,并进行ROC曲线分析;对各组进行红细胞沉降率（ESR）检测。结果 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr检测结果表明,活动期RA患者血清miR-146a水平为（2.42±0.75）,显著高于缓解期RA患者（1.66±0.29）、OA患者（1.12±0.43）和体检健康者（1.01±0.34）,差异均有统计学意义（P均〈0.05）;miR-146a诊断活动期RA的ROC曲线下面积（AUCROC）为0.914（95%CI：0.872~0.926）;以1.96为cut off值,敏感性为95.0%、特异性为87.5%、准确性为91.9%。活动期RA组ESR为（37.5±5.2）mm/h,缓解期RA组为（14.4±4.7）mm/h,OA组为（11.6±5.1）mm/h,健康对照组为（9.6±3.9）mm/h,各组间差异有统计学意义（F=177.01,P〈0.01）。结论建立的SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr可用于RA患者血清miR-146a的检测。miR-146a可用于诊断活动期RA。

关键词： SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr 微小RNA-146a 类风湿关节炎

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REAL-TIME pcr方法测定转基因小麦中外源基因拷贝数

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中国生物工程杂志 2010年第3期30卷 90-94页

作者：李淑洁张正英甘肃省农业科学院生物技术研究所兰州730070

采用SYBR greenⅠreal-time pcr方法检测7株转基因小麦中外源半夏凝集素基因的拷贝数。以小麦蜡质基因(wx012)作为内参基因,以未转基因小麦基因组DNA为内参基因标准品进行5倍梯度稀释得到内参基因CT值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-0... 详细信息

采用SYBR greenⅠreal-time pcr方法检测7株转基因小麦中外源半夏凝集素基因的拷贝数。以小麦蜡质基因(wx012)作为内参基因,以未转基因小麦基因组DNA为内参基因标准品进行5倍梯度稀释得到内参基因CT值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-0.2667x+6.98;以含半夏凝集素基因(pta)的质粒DNA为目的基的因标准品同样进行5倍梯度稀释,建立目的基因CT值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-0.2118x+4.53。通过SYBR greenⅠreal-time pcr分别获得每一样本中目的基因和内参基因的CT值,将CT值分别代入标准曲线计算该样本中内参基因和目的基因起始模板量,目的基因与内参基因起始模板量比值即是目的基因在该转基因植株中的拷贝数。计算结果为:单拷贝的有1株,2个拷贝1株,3拷贝和4拷贝的各有2株,其中有1株为假阳性植株。

关键词： SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr C_T值 pta wx012 转基因小麦拷贝数

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荧光定量pcr检测宫颈癌患者血清中miR-203表达水平及意义

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国际检验医学杂志 2015年第24期36卷 3552-3553页

作者：杨春兰申娴娟鞠少卿苏建友南通大学附属医院检验科江苏南通226001

目的建立SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr检测血清中miR-203的表达水平,并检测宫颈癌患者、良性宫颈疾病及健康对照者血清miR-203的表达水平。方法设计miR-203、U6茎环逆转录引物和pcr扩增引物进行荧光定量pcr,以U6为内参相对定量比较不同... 详细信息

目的建立SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr检测血清中miR-203的表达水平,并检测宫颈癌患者、良性宫颈疾病及健康对照者血清miR-203的表达水平。方法设计miR-203、U6茎环逆转录引物和pcr扩增引物进行荧光定量pcr,以U6为内参相对定量比较不同宫颈疾病患者血清中miR-203的表达水平。结果该研究建立的方法能特异性检测到血清中miR-203的扩增信号,熔解曲线单一,pcr产物特异。宫颈癌患者血清中miR-203表达水平明显高于子宫肌瘤、宫颈炎等其他良性宫颈疾病,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr是一种快速简便、灵敏度高、特异度好的检测方法,可能在宫颈癌辅助诊断中有较好的应用前景。

关键词： SYBR greenⅰ实时荧光定量pcr miR-203 宫颈癌

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