检索结果-内蒙古大学图书馆

植物病理学报 2018年第5期48卷 700-706页

作者：孙晓辉高利利刘锦王少立乔宁刘永光赵静竺晓平山东农业大学植物保护学院、山东省蔬菜病虫生物学重点实验室、山东果蔬优质高效生产协同创新中心泰安271018 荣成市港湾街道办事处荣成264309 潍坊科技学院寿光262700

根据番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)热激蛋白70(Hsp70)的基因序列,设计ToCV实时荧光定量pcr特异引物。利用重组质粒ToCV-1为标准品建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法。针对引物浓度、退火温度、特异性、灵敏度、重复性和... 详细信息

根据番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)热激蛋白70(Hsp70)的基因序列,设计ToCV实时荧光定量pcr特异引物。利用重组质粒ToCV-1为标准品建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法。针对引物浓度、退火温度、特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行系列优化。结果表明,最适退火温度为63℃,最适引物浓度为0.3μmol·L^(-1)。熔解曲线为特异性单峰,表明其特异性良好。建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量pcr较常规pcr灵敏100倍,且具有良好的重复性和稳定性。基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量pcr技术建立的ToCV检测方法,速度快、特异性强、灵敏度高、重复性好,可以用于ToCV的定量检测。

关键词：番茄褪绿病毒 SYBR Green i实时荧光定量pcr 病毒检测

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鸡马立克氏病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr检测方法的建立

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四川农业大学学报 2013年第4期31卷 427-432页

作者：程洋冯泽清杨辉林刘益平朱庆四川农业大学动物科技学院四川雅安625014

【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测鸡马立克氏病病毒(MDV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法。【方法】针对马立克氏病毒特异的Meq基因序列设计引物,利用SYBR GreenⅠ染料建立检测马立克氏病毒的实时荧光定量pcr方法,进行敏感性... 详细信息

【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测鸡马立克氏病病毒(MDV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法。【方法】针对马立克氏病毒特异的Meq基因序列设计引物,利用SYBR GreenⅠ染料建立检测马立克氏病毒的实时荧光定量pcr方法,进行敏感性、特异性、重复性试验,并应用该方法检测了罗曼蛋鸡、AA肉鸡、二郎山山地鸡SD02和SD03品系4种鸡只感染组和对照组样本的脾、法氏囊、胸腺等组织中的病毒拷贝数。【结果】该方法建立的定量标准曲线荧光阈值循环数(Threshold cycle,Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r=0.996),扩增效率(E)为96%,熔解曲线分析显示其pcr扩增具有良好的特异性,敏感性和重复性试验证明该方法具有较高的灵敏度和稳定性,最低检测浓度为102拷贝/μL。同时运用该方法对试验样本进行检测,结果显示在4个感染组鸡只的肝,脾,肾,胸腺,法氏囊组织中均检测出Meq的拷贝,并计算出了待测样品的病毒拷贝数,相反在未感染组却没有检测出任何Meq的拷贝。试验结果还发现二郎山山地鸡两品系各组织中MDV的拷贝数显著低于AA肉鸡和罗曼蛋鸡各组织。【结论】建立的检测方法能够快速检测马立克氏病毒,结果准确,成本低廉,可以将其作为生产上监控马立克氏病的一个重要手段。

关键词：马立克氏病毒 Meq基因 SYBR Green i实时荧光定量pcr 检测

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SYBR Green Ⅰ实时荧光定量pcr检测乳腺癌患者血浆miRNA-155的表达

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西南医科大学学报 2017年第5期40卷 445-448页

作者：季星利钟霞王丽西南医科大学基础医学院四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心四川泸州646000

目的:通过建立成熟的SYBR Green i实时荧光定量pcr检测血浆中mi R-155的表达,并探讨mi RNAs与乳腺癌的关系。方法:选取符合纳入标准的41例乳腺癌患者作为研究对象、25例乳腺良性疾病(包括乳腺囊性增生病、乳房纤维腺瘤和乳管内乳头状瘤... 详细信息

目的:通过建立成熟的SYBR Green i实时荧光定量pcr检测血浆中mi R-155的表达,并探讨mi RNAs与乳腺癌的关系。方法:选取符合纳入标准的41例乳腺癌患者作为研究对象、25例乳腺良性疾病(包括乳腺囊性增生病、乳房纤维腺瘤和乳管内乳头状瘤)患者作为良性对照组、38例健康体检者作为健康对照组,采用茎环引物的SYBR Green i实时荧光定量pcr检测外周血浆中mi R-155的含量。结果:SYBR Green i实时荧光定量pcr能特异性检测血浆中mi RNA-155的扩增信号,熔解曲线峰值单一,产物特异;乳腺癌患者血清中mi RNA-155水平明显高于乳腺良性疾病(P<0.05),而乳腺癌患者手术切除后血清中的mi RNA-155水平明显下降(P<0.05)。结论:SYBR Green i实时荧光定量pcr法具有灵敏度高、操作简单且成本低廉等特点,利用此法检测mi R-155的表达,对乳腺癌的早期诊断和预后判断有很好的应用前景。

关键词： SYBR Green i实时荧光定量pcr miRNA-155 乳腺癌

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乙型肝炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr方法的建立及临床应用

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现代检验医学杂志 2016年第3期31卷 98-101页

作者：何维娜吕东月刘和录韩杰辉何玥李培培广州医科大学附属深圳沙井医院

目的建立 SYBR Green i实时荧光定量 pcr检测乙型肝炎病毒 DNA的快速方法，并探讨其临床应用价值。方法根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物，建立SYBR Green i实时荧光定量pcr，并对反应体系和扩增程序进行优化。... 详细信息

目的建立 SYBR Green i实时荧光定量 pcr检测乙型肝炎病毒 DNA的快速方法，并探讨其临床应用价值。方法根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物，建立SYBR Green i实时荧光定量pcr，并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得，同时以浙江省夸克公司 HBV DNA定量检测试剂盒作对照，应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR Green i 实时荧光定量 pcr 检出限范围为5＆#215;102 copies／ml～5＆#215;108 copies／ml，HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系，无交叉反应，整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中，与浙江省夸克公司的 HBV荧光定量 pcr检测试剂相比，建立的 SYBR Green i实时荧光定量pcr体系灵敏度100％，特异度92.5％。结论 SYBR Green实时荧光定量pcr快速、简便、灵敏度高、特异度强，可用于乙型肝炎患者病情监测，有效指导临床用药，准确评价 HBV感染者的病情。

关键词： SYBR Green i实时荧光定量pcr 乙型肝炎病毒DNA 快速检测公司产品对比

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转基因烟草中外源基因实时荧光定量pcr检测方法的建立

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南方农业学报 2015年第5期46卷 745-749页

作者：王盛谢芝勋谢丽基谢志勤黄莉罗思思邓显文黄娇玲刘加波广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001

【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以... 详细信息

【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法。【结果】构建RNR2基因、GFP基因实时荧光定量pcr的标准曲线,分别为y=-0.2858x+5.6695和y=-0.2826x+2.1048,R2分别为0.9994和0.9989,相关性较高。在检测的5株转基因烟草中GFP基因的拷贝数分别为5、8、19、28和45,非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0。【结论】建立的转基因烟草中外源基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量pcr检测方法具有简单、快速、准确等优点,可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析。

关键词：转基因烟草双标准曲线法外源基因拷贝数 SYBR Green i实时荧光定量pcr

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实时荧光定量pcr检测核桃胶胞炭疽菌

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东北林业大学学报 2018年第11期46卷 87-90,100页

作者：余鹏举朱天辉万雪琴李姝江王若梅韩珊四川农业大学成都611130

为快速灵敏检测核桃炭疽病病原菌,根据Gen Bank中炭疽属(Colletotrichum)不同种的iTS序列差异,设计了核桃炭疽病病原菌胶胞炭疽菌(C. gloeosporioides)的特异性引物YH1/YH2,并优化建立了检测核桃胶胞炭疽菌的SYBR Green i实时荧光定量PC... 详细信息

为快速灵敏检测核桃炭疽病病原菌,根据Gen Bank中炭疽属(Colletotrichum)不同种的iTS序列差异,设计了核桃炭疽病病原菌胶胞炭疽菌(C. gloeosporioides)的特异性引物YH1/YH2,并优化建立了检测核桃胶胞炭疽菌的SYBR Green i实时荧光定量pcr检测体系。结果表明:该引物能从实验室分离保存鉴定的13株核桃胶胞炭疽菌中特异性扩增出306bp的目的条带,而对于其他6种核桃常见病害病原菌、健康核桃植株组织及所有微生物总基因组DNA均未扩增出特异性条带;建立的实时荧光定量pcr检测体系灵敏度为1×10-3mg·L-1,是常规pcr检测方法的100倍;对10份采集于四川、陕西、湖北等地的林间感病核桃植株组织进行定量检测,实时荧光定量pcr的阳性检出率为80%,且样品病症表现越明显检测到的含菌量越高。建立的SYBR Green i实时荧光定量pcr检测方法可用于核桃感病组织内胶胞炭疽菌的分子鉴定和早期检测。

关键词：核桃胶胞炭疽菌 SYBR Green i实时荧光定量pcr 分子检测

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血清标本检测miR-29a实时荧光定量pcr方法的建立及临床初步应用

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临床和实验医学杂志 2016年第1期15卷 16-19页

作者：陈鑫陈曦韩霜臧素纲汪晓莺周玉贵南通大学附属东台医院检验科江苏东台224200 南通大学医学院免疫教研室江苏南通226001

目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green i实时荧光定量pcr方法检测血清miR-29a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-29a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得c DNA,进行SYBR Green i实时定量pcr扩增检测。制作***-miR-39... 详细信息

目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green i实时荧光定量pcr方法检测血清miR-29a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-29a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得c DNA,进行SYBR Green i实时定量pcr扩增检测。制作***-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,绝对定量血清中miR-29a的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-29a表达水平,熔解曲线呈单峰,pcr扩增产物特异,在10~3copies/μl至10~6copies/μl范围内有良好的线性关系(r^2=0.991),并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-29a表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。结论所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green i实时荧光定量pcr方法能敏感、特异地检测血清中miR-29a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。

关键词： SYBR Green i实时荧光定量pcr miR-29a 糖尿病

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poly(A)加尾的实时荧光定量pcr检测血清miR-124a表达及临床初步应用

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国际检验医学杂志 2015年第9期36卷 1176-1178页

作者：陈鑫臧素纲韩霜王伟汪晓莺周玉贵南通大学附属东台医院检验科江苏东台224200 南通大学医学院免疫教研室江苏南通226001

目的建立ploy（A）聚合酶加尾的SYBR Green i实时荧光定量pcr方法检测血清微小RNA（miR）-124a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-124aploy（A）聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green i实时定量pcr扩增检测。... 详细信息

目的建立ploy（A）聚合酶加尾的SYBR Green i实时荧光定量pcr方法检测血清微小RNA（miR）-124a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-124aploy（A）聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green i实时定量pcr扩增检测。制作***-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,定量血清中miR-124a的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-124a表达水平,熔解曲线呈单峰,pcr扩增产物特异,在103∽106 copies/uL范围内有良好的线性关系（r2=0.999）,并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-124a表达水平明显高于健康体检者（P〈0.05）。结论所建立的ploy（A）聚合酶加尾SYBR Green i实时荧光定量pcr方法能敏感、特异地检测血清中miR-124a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。

关键词： SYBR Green i实时荧光定量pcr 微小RNA-124a 糖尿病

来源：评论

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高致病性禽腺病毒4型中国流行株在LMH细胞中的增殖规律

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畜牧与兽医 2018年第3期50卷 82-86页

作者：刘延珂万文妍王贝贝吴艳阳杨东东高冬生李永涛王新卫常洪涛陈陆王川庆赵军 YANG Xia 河南农业大学牧医工程学院

为研究禽腺病毒4型（FAd V-4）中国流行株在鸡肝癌上皮细胞系（LMH）中的生长特性和增殖规律,分别利用SYBR Green i实时荧光定量pcr和病毒滴度测定方法检测FAd V-4感染LMH细胞后12、24、36、48、60、72、84、96和120 h的基因组复制和病... 详细信息

为研究禽腺病毒4型（FAd V-4）中国流行株在鸡肝癌上皮细胞系（LMH）中的生长特性和增殖规律,分别利用SYBR Green i实时荧光定量pcr和病毒滴度测定方法检测FAd V-4感染LMH细胞后12、24、36、48、60、72、84、96和120 h的基因组复制和病毒粒子增殖动态。结果显示,FAd V-4中国流行株在LMH中能够很好增殖,不同时间点的病毒滴度与病毒基因组拷贝数呈正相关,病毒收获的最佳时间为感染后60 h。研究结果为防控鸡肝炎-心包积液综合征疫苗的研发和生产提供一定的依据和参考。

关键词：禽腺病毒4型鸡肝癌上皮细胞系 SYBR Green i实时荧光定量pcr 增殖规律

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魔芋内生拮抗菌的定殖研究

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湖北农业科学 2014年第3期53卷 613-616页

作者：程海丽陈磊乐超银三峡大学生物技术研究中心湖北宜昌443002

采用抗魔芋(Amorphophallus rivieri Durieu)软腐病的内生芽孢杆菌BS-8发酵液灌根魔芋植株,定期测定该内生拮抗菌在魔芋叶片中的定殖情况。根据该内生菌16S rRNA特异性保守区域设计引物,定期4次采样,提取魔芋叶片DNA,通过SYBR Green i... 详细信息

采用抗魔芋(Amorphophallus rivieri Durieu)软腐病的内生芽孢杆菌BS-8发酵液灌根魔芋植株,定期测定该内生拮抗菌在魔芋叶片中的定殖情况。根据该内生菌16S rRNA特异性保守区域设计引物,定期4次采样,提取魔芋叶片DNA,通过SYBR Green i实时荧光定量pcr法检测该内生拮抗菌在魔芋叶片中的定殖情况。结果表明,经内生拮抗菌灌根培养的魔芋叶片中芽孢杆菌数量均明显大于对照,该内生芽孢杆菌能大量定殖在魔芋叶片中。

关键词：魔芋(Amorphophallus rivieri Durieu)软腐病内生拮抗菌 SYBR Green i实时荧光定量pcr

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