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l-单甲基-精氨酸对兔实验性膝关节骨关节炎Caspases-3、Bax和Bcl-2的影响

中国医院药学杂志 2013年第12期33卷 946-950页

作者：芦北极王贵清查振刚杨立群黎绍华谭小波暨南大学附属清远医院骨科广东清远511500

目的:阐明l-单甲基-精氨酸(l-NG-monomethyl-arginine,l-NMMA)对兔实验性膝关节骨关节炎关节软骨细胞凋亡的影响机制。方法:选取30只实验性大白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、l-NMMA低剂量治疗组(C组)、l-NMMA中剂量治疗组(D组)... 详细信息

目的:阐明l-单甲基-精氨酸(l-NG-monomethyl-arginine,l-NMMA)对兔实验性膝关节骨关节炎关节软骨细胞凋亡的影响机制。方法:选取30只实验性大白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、l-NMMA低剂量治疗组(C组)、l-NMMA中剂量治疗组(D组)和l-NMMA高剂量治疗组(E组),总共5个组,每组6只。采用原位凋亡染色(TUNEl)和流式细胞术检测软骨细胞的凋亡状况;采用蛋白质印迹(western-bloting)法检测各组软骨组织半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspases-3)的表达;采用免疫组织化学方法检测软骨组织Bcl-2相关X蛋白(Human Bcl-2 associated X protein,Bax)和重组人B细胞淋巴瘤因子2(B-Cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达。结果:(1)模型组兔关节软骨细胞的凋亡率和凋亡指数明显高于正常组(P<0.01),且随着l-NMMA治疗浓度的提高,凋亡率和凋亡指数明显下降(P<0.05);(2)模型组兔关节软骨组织Caspases-3的表达水平明显高于正常组(P<0.01),随着l-NMMA治疗浓度提高,Caspases-3表达水平明显下降(P<0.05);(3)模型组兔关节软骨组织Bax的表达水平明显高于正常组(P<0.01),随着l-NMMA治疗浓度提高,Bax的表达水平明显下降(P<0.05);模型组兔关节软骨组织Bcl-2的表达水平与正常组无明显差异性(P>0.05),随着l-NMMA治疗浓度的提高,Bcl-2的表达水平明显上升(P<0.05);随着l-NMMA治疗浓度的提高,Bcl-2/Bax数值明显上升(P<0.05)。结论:l-NMMA可明显降低关节软骨组织Caspases-3的表达水平,可能通过上调Bcl-2/Bax的数值而抑制关节软骨细胞的凋亡,从而为发现阻止OA病变进展的新治疗方法提供实验依据。

关键词： l-单甲基-精氨酸膝关节骨关节炎关节软骨凋亡

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l-NMMA对过量氟暴露引起的小鼠MC3T3E1成骨细胞中NO/iNOS表达的影响

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贵州医科大学学报 2023年第3期48卷 266-271页

作者：王文彦何文雯刘宇平桂传枝王龙陈莹邓明芬南楠段筱娟官志忠贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004 贵黔国际总医院病理科贵州贵阳550018 广州医科大学附属第四医院病理科广东广州511300 贵阳市第一人民医院病理科贵州贵阳550002 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨l-单甲基-精氨酸(l-NMMA)与过量氟化钠(NaF)共培养对小鼠颅顶前成骨(MC3T3E1)细胞中一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将MC3T3E1成骨细胞分为空白组(只含培养基)、NaF染毒组(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ... 详细信息

目的探讨l-单甲基-精氨酸(l-NMMA)与过量氟化钠(NaF)共培养对小鼠颅顶前成骨(MC3T3E1)细胞中一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将MC3T3E1成骨细胞分为空白组(只含培养基)、NaF染毒组(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/l)及l-NMMA染毒组(0、5、10、20、40、80 mol/l),采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞存活率,并筛选最佳染氟浓度和最佳l-NMMA用药浓度;再将MC3T3E1成骨细胞分为对照组(0.0 mmol/l NaF)、低氟组(1.0 mmol/l NaF)、高氟组(4.0 mmol/l NaF)、低氟+l-NMMA组(1.0 mmol/l NaF+20μmol/l l-NMMA)、高氟+l-NMMA组(4.0 mmol/l NaF+20μmol/l l-NMMA)、l-NMMA组(20μmol/l l-NMMA),处理24 h,采用硝酸还原酶法检测细胞中NO含量,蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法分别检测iNOS蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/l NaF染毒组及80μmol/l l-NMMA染毒组MC3T3E1成骨细胞存活率降低(P<0.05),选择1.0 mmol/l和4.0 mmol/lNaF为染氟浓度、20μmol/ll-NMMA用药浓度进行后续实验;与对照组比较,低氟组、高氟组MC3T3E1成骨细胞中NO含量增加(P<0.05),低氟+l-NMMA组中NO含量低于低氟组(P<0.05),高氟+l-NMMA组细胞中NO含量低于高氟组(P<0.05);与对照组相比,高氟组MC3T3E1成骨细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);与高氟组比较,高氟+l-NMMA组细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论过量氟可致MC3T3E1成骨细胞损伤、iNOS蛋白和mRNA表达增强、细胞中NO含量增加,l-NMMA与氟共培养后可减弱这一效应,提示l-NMMA对过量氟所致MC3T3E1成骨细胞损伤有一定的保护作用。

关键词：氟诱导型一氧化氮合酶一氧化氮 l-单甲基-精氨酸 MC3T3E1细胞

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l-单甲基—精氨酸对减少关节软骨细胞凋亡的机制研究

L-单甲基—精氨酸对减少关节软骨细胞凋亡的机制研究

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作者：芦北极苏州大学

学位级别：博士

目的目前,我国社会人口已经出现老龄化趋势,经相关流行病学的调查结果显示退变性骨关节炎(Osteoarthritis,OA)的发病率已呈逐年升高趋势,预计在不久的将来,此疾病必将成为我国成年男性丧失劳动能力的主要原因之一。以往的研究已显示退... 详细信息

目的目前,我国社会人口已经出现老龄化趋势,经相关流行病学的调查结果显示退变性骨关节炎(Osteoarthritis,OA)的发病率已呈逐年升高趋势,预计在不久的将来,此疾病必将成为我国成年男性丧失劳动能力的主要原因之一。以往的研究已显示退变性骨关节炎的病理学特征主要为关节部位的软骨细胞呈现明显的凋亡现象,软骨细胞外基质的降解过程呈明显进行性。一些研究还显示,一氧化氮(NO)及其附属产物的浓度表达水平与关节软骨细胞的凋亡数目,以及骨关节炎疾病的严重程度呈显著的正相关性,在疾病的早期阶段,NO及其附属产物会刺激和诱导关节软骨细胞发生凋亡,使关节软骨出现病理性降解。l-单甲基-精氨酸(l-NG-monomethyl-arginine, l-NMMA)是l-精氨酸的一种同类物,可与l-精氨酸竞争一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase,NOS)的结合部位,对3种NOS均有抑制作用,选择性不明显,随着作用时间延长,使诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)不可逆地失活。鉴于l-单甲基-精氨酸对兔实验性膝关节骨关节炎关节软骨细胞凋亡的影响机制尚未完全阐明,本文拟选择这一课题进行研究,以阐明其作用机制。方法选取30只实验性大白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、l-NMMA低剂量治疗组(C组)、l-NMMA中剂量治疗组(D组)和l-NMMA高剂量治疗组(E组),总共5个组,每组6只。采用HE染色法检测各组的病理表现;检测各组兔关节滑液中NO和血清NO的表达水平;采用原位凋亡染色(TUNEl)和流式细胞术检测软骨细胞的凋亡状况;采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoadsordent assay,ElISA)法检测各组兔血清骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-,TGFβ1)的表达水平;采用蛋白质印迹(western-bloting)法检测各组软骨组织半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspases-3)的表达;采用免疫组织化学方法检测软骨组织Bcl-2相关X蛋白(Human Bcl-2associated X protein,Bax)和重组人B细胞淋巴瘤因子2(B-Cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达。结果 1.正常组苏木精-伊红染色法(hematoxvlin-eosin staining, HE)染色显示：软骨表层平整、光滑,细胞分布均匀,无簇聚软骨细胞,潮线完整;HE染色均匀,无失染现象;模型组HE染色显示：表层变薄,有裂隙深至软骨下骨;细胞排列紊乱,有大量簇聚软骨细胞,潮线消失;HE染色不均匀,全层明显失染;随着l单甲基精氨酸治疗浓度提高,软骨组织结构的破坏程度在组织学上呈现明显缓解。模型组兔关节软骨Mankin评分明显高于正常组(P<0.01),且随着l-单甲基-精氨酸治疗浓度提高,兔关节软骨Mankin评分明显下降(P<0.05)。 2.模型组兔关节液和血清NO的表达水平明显高于正常组(P<0.01),且随着l单甲基精氨酸治疗浓度的提高,关节液和血清NO的表达水平明显下降(P<0.05)。 3.模型组兔关节软骨细胞的凋亡率和凋亡指数明显高于正常组(P<0.01),且随着l单甲基精氨酸治疗浓度的提高,凋亡率和凋亡指数明显下降(P<0.05)。 4.模型组兔血清BMP2、TGF β1的表达水平明显低于正常组(P<0.01),且随着l-单甲基-精氨酸治疗浓度的提高,兔血清BMP2、 TGFβ1的表达水平明显上升(P<0.05)。 5.模型组兔关节软骨组织Caspases-3的表达水平明显高于正常组(P<0.01),随着l-单甲基-精氨酸治疗浓度提高,Caspases-3表达水平明显下降(P<0.05)。 6.模型组兔关节软骨组织Bax的表达水平明显高于正常组(P<0.01),随着l-单甲基-精氨酸治疗浓度提高,Bax的表达水平明显下降(P<0.05);模型组兔关节软骨组织Bcl-2的表达水平与正常组无明显差异性(P>0.05),随着l-单甲基-精氨酸治疗浓度的提高,Bcl-2的表达水平明显上升(P<0.05);随着l-单甲基-精氨酸治疗浓度的提高,Bcl-2/Bax数值明显上升(P<0.05)。结论 l-单甲基-精氨酸(l-NG-monomethyl-arginine, l-NMMA)可明显降低关节液和血清NO及关节软骨组织Caspases-3的表达水平,升高血清BMP2、TGFβ1的表达水平,可能通过上调Bcl-2/Bax的数值而抑制关节软骨细胞的凋亡,l-NMMA在未来可作为骨关节炎的治疗方法之一,用于临床。

关键词： l-单甲基-精氨酸膝关节骨关节炎关节软骨凋亡

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多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究

多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究

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作者：唐伟安徽医科大学

学位级别：硕士

目的: 研究NCI-H292细胞在多聚左旋精氨酸（Poly-l-arginine）联合脂多糖（lipopolysaccharide,lPS）作用于下白介素-6（interleukin-6,Il-6）、Il-8、Il-13、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达水平，以及肝素和l-单甲基-精氨酸（l-NG-monomethyl-arginine,l-NMMA）对其细胞因子表达的影响。方法: 1.细胞培养及哮喘微环境模型的建立将NCI-H292细胞培养在含10%胎牛血清的常规培养基中，每周传代两次；选择生长状态良好的细胞以3×105/500μl密度接种于24孔培养板中，用lPS预先将气道上皮细胞激活，模拟哮喘气道上皮细胞模型。 2.细胞因子水平的测定按照实验设计分为空白对照组(培养液)、lPS组(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸组(Max=40μg/ml)、lPS+poly-l-arginine组、lPS+poly-l-arginine+肝素(100u/l)组、lPS+poly-l-arginine+l-NMMA(Max=0.8mM)组，并依照分组要求加入不同浓度的多聚左旋精氨酸、lPS、肝素、l-NMMA；共培养20小时，收集细胞上清液。按照试剂盒说明采用ElISA法检测各组Il-6、Il-8、Il-13、Eotaxin的表达水平，并比较各组间的差异。 3.统计学处理实验数据采用SPSS16.0统计分析软件分析，数据以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA）；两两比较时方差齐时采用lSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果: 1.在多聚左旋精氨酸作用下，Il-6、Il-8、Eotaxin的表达水平明显增高，且在多聚左旋精氨酸为5μg/ml时，Il-6、Il8的表达水平最高；在多聚左旋精氨酸为20μg/ml时，Eotaxin的表达水平最高；但各浓度之间的差异无统计学意义；而单独lPS组、多聚左旋精氨酸组与对照组比较，Il-6、Il-8、Eotaxin的水平差异无统计学意义(P>0.05)。 2.在多聚左旋精氨酸作用下，Il-13的表达未见明显改变；各组Il-13的水平差异无统计学意义(P>0.05)。 3.将多聚左旋精氨酸、lPS及肝素共同作用NCI-H292细胞时，Il-6、Il-8、Eotaxin的表达水平明显低于lPS+poly-l-arginine组(P<0.05)。 4.将多聚左旋精氨酸、lPS及l-NMMA共同作用NCI-H292细胞时，l-NMMA对各组Il-6、Il-8的表达无影响(P>0.05)。结论: 1.多聚左旋精氨酸能够促进lPS诱导的NCI-H292细胞Il-6、Il-8、Eotaxin的表达水平，但对Il-13的表达水平没有影响。 2.肝素能够抑制多聚左旋精氨酸联合lPS诱导的NCI-H292细胞Il-6、Il-8的表达水平，而l-NMMA对Il-6、Il-8的表达水平没有影响。

关键词：哮喘细胞因子多聚左旋精氨酸肝素 l-单甲基-精氨酸

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l-单甲基-精氨酸对山羊实验性TMJOA关节软骨细胞凋亡的影响

L-单甲基-精氨酸对山羊实验性TMJOA关节软骨细胞凋亡的影响

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第四届中国国际暨第七次全国口腔颌面外科学术会议

作者：高占巍王大章刘宝林李鹏卫生部中日友好医院四川大学华西口腔医学院第四军医大学口腔医学院浙江省嘉兴市第一人民医院

目的研究一氧化氮合酶抑制剂l-单甲基-精氨酸对山羊实验性颞下颌关节骨关节病关节软骨细胞凋亡的影响。方法通过双侧颞下颌关节上腔内注射胶原酶制造骨关节病模型,从注射胶原酶第4周起,在右侧关节上腔内每隔3天注射0.5%l-单甲基-精氨酸0... 详细信息

目的研究一氧化氮合酶抑制剂l-单甲基-精氨酸对山羊实验性颞下颌关节骨关节病关节软骨细胞凋亡的影响。方法通过双侧颞下颌关节上腔内注射胶原酶制造骨关节病模型,从注射胶原酶第4周起,在右侧关节上腔内每隔3天注射0.5%l-单甲基-精氨酸0.5ml,共注射7次,左侧同期注射生理盐水0.5ml。注射胶原酶后12周处死所有动物,取双侧关节标本作组织学检查和TUNEl 法染色,结果l-NMMA 治疗侧关节软骨细胞凋亡数明显少于对照侧,两者比较的统计学差异有高度显著性（P＜0.01）结论l-单甲基-精氨酸关节腔内注射对山羊实验性颞下颌关节骨关节病软骨细胞的凋亡有抑制作用,其作用机制可能与l-单甲基-精氨酸抑制一氧化氮合酶产生过多的NO,降低关节组织局部NO 含量有关。

关键词：骨关节病 l-单甲基-精氨酸凋亡

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l-NMMA对颞下颌关节骨关节病软骨细胞凋亡的影响

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实用口腔医学杂志 2008年第1期24卷 33-36页

作者：高占巍刘宝林王大章马海欢北京中日友好医院整形外科 100029 西安第四军医大学口腔医学院颌面外科教研室四川大学华西口腔医学院颌面外科教研室

目的:研究l-NMMA在TMJOA发生发展过程中对关节软骨细胞凋亡的影响,探讨其对TMJOA的治疗作用。方法:采用山羊作为实验动物,以关节上腔内注射胶原酶制造TMJOA动物模型,制造模型后第4周起,在左侧关节注射l-NMMA,右侧注射生理盐水作为对照。... 详细信息

目的:研究l-NMMA在TMJOA发生发展过程中对关节软骨细胞凋亡的影响,探讨其对TMJOA的治疗作用。方法:采用山羊作为实验动物,以关节上腔内注射胶原酶制造TMJOA动物模型,制造模型后第4周起,在左侧关节注射l-NMMA,右侧注射生理盐水作为对照。8周时取关节标本,TUNEl染色观察软骨细胞凋亡。结果:两侧软骨细胞凋亡率有明显差异,实验侧细胞凋亡率低于对照侧。结论:l-NMMA在TMJOA发生发展过程中,对软骨细胞的凋亡起着明显的抑制作用。

关键词：颞下颌关节骨关节病软骨细胞凋亡 l-单甲基-精氨酸

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l-单甲基-精氨酸对颞下颌关节骨关节病治疗作用的实验研究

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中华口腔医学杂志 2003年第4期38卷 295-297,I002页

作者：高占巍胡静王大章李继华四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科成都610041

目的　研究一氧化氮合酶抑制剂l 单甲基精氨酸对山羊实验性颞下颌关节骨关节病的治疗作用及可能机制。方法　通过双侧颞下颌关节上腔内注射胶原酶建立骨关节病模型 ,从注射胶原酶第 4周起 ,在左侧关节上腔内每隔 3d注射 0 5 %l 单甲... 详细信息

目的　研究一氧化氮合酶抑制剂l 单甲基精氨酸对山羊实验性颞下颌关节骨关节病的治疗作用及可能机制。方法　通过双侧颞下颌关节上腔内注射胶原酶建立骨关节病模型 ,从注射胶原酶第 4周起 ,在左侧关节上腔内每隔 3d注射 0 5 %l 单甲基精氨酸 0 5ml,共 7次 ,右侧同期注射生理盐水 0 5ml。注射胶原酶后 1 2周处死所有动物 ,取双侧关节标本作组织学检查并根据改良Mankin骨关节病评价标准评分。结果　评分结果 :l 单甲基精氨酸侧为 3 83 ,而对照侧为 6 33 ,两者比较差异有高度显著性 (P <0 0 1 )。结论　l 单甲基精氨酸关节腔内注射对山羊实验性颞下颌关节骨关节病的发展有抑制作用 ,其作用机制可能与l 单甲基

关键词： l-单甲基-精氨酸颞下颌关节骨关节病治疗 OA 一氧化氮合酶 NOS

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