检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：许倩倩中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

目的:1.建立leber遗传性视神经病变(leber＇s hereditary opticneuropathy,LHON)遗传家系及散发病例的资料收集和保存的标准化操作系统。2.分析HN001、HN002、HN003家系的临床表型、遗传特征,筛查其致病突变位点。3.研究leber遗传性视... 详细信息

目的: 1.建立leber遗传性视神经病变(leber＇s hereditary opticneuropathy,LHON)遗传家系及散发病例的资料收集和保存的标准化操作系统。 2.分析HN001、HN002、HN003家系的临床表型、遗传特征,筛查其致病突变位点。 3.研究leber遗传性视神经病变可能存在的性别修饰基因,揭示LHON男女发病率不同的分子机制。方法: 1.对门诊就诊的LHON家系先证者和散发病例进行详细的临床检查。分析临床资料,调查病史、家族史,进行线粒体致病基因筛查,明确LHON诊断及鉴别诊断。入选课题组研究对象签署《知情同意书》。采集家系相关发病信息,填写解放军总医院眼科中心统一设计的LHON调查表。采集被研究对象外周静脉血,提取全血基因组DNA并编号。绘制家系图,建立科学的LHON遗传资源数据库,备存纸质和电子版的资料。 2.使用聚合酶链反应(PCR)扩增HN001、HN002、HN003家系线粒体DNA11778、3460、14484位点,限制性内切酶酶切扩增片断,并进行直接测序反应。用专业遗传学软件genetool将测序结果与修正的线粒体DNA剑桥参照序列进行比对,寻找碱基改变位点,并在国际遗传学专业网站中查找碱基改变位点的信息,最终确定HN001、HN002、HN003家系致病突变。 3.应用微卫星荧光标记全基因组扫描技术分析HN001家系部分成员已知X染色体连锁位点(DXS8090、DXS984、DXS7、DXS7487),分析单倍体型,应用Linkage analysis Package 5.0分析数据,判断X染色体修饰基因是否与选择的已报道的基因标记连锁,从而判断X染色体修饰基因的存在与否。结果: 1.建立了规范、科学、符合国际、国内遗传资源采集研究原则的leber遗传性视神经病变遗传资源的收集、保存标准化操作系统。 2.在HN001、HN002、HN003家系中发现G11778A突变,在HN001家系发现另外4个碱基改变位点,分别是:G11719A、G14476A、C14766T、T14783C。 ***00l家系4个已知X色体连锁位点(DXS8090、DXS984、DXS7、DXS7487)的单倍体型分析未发现共分离单倍体,连锁分析计算LOD值均为负值。结论: 1.建立leber遗传性视神经病变遗传资源收集格保存的标准化操作系统是十分必要的,确保了资料的完整性、规范性、延续性,为今后LHON家系的陆续收集、研究提供了很好的工作模式,为今后的后续研究和流行病学统计提供了可能。 ***00l、HN002、HN003家系为LHON遗传病家系,以G11778A为致病突变。G14476A为新的线粒体多态位点。该位点未引起编码蛋白质的改变,属无义突变。该多态位点在100例正常人中携带比例为3%。 ***090、DXS984、DXS7、DXS7487位点不存在修饰基因。由于X染色体修饰基因遗传方式可能非X染色体隐性遗传,或是存在种族差异,即中国人种的修饰基因位点与西方人不同,因此,是否存在X染色体修饰基因需进一步研究。

关键词： leber遗传性视神经病变线粒体DNA 连锁分析多态现象遗传

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leber遗传性视神经病变14484位点突变的中医体质学研究

Leber遗传性视神经病变14484位点突变的中医体质学研究

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作者：孙艳红北京中医药大学

学位级别：硕士

leber遗传性视神经病变(LHON)是一种由线粒体DNA突变引起的母系遗传的线粒体疾病。因其视力损害严重,不仅给患者心理上造成极大的痛苦和障碍,也给家庭和社会带来沉重的负担。本课题在中医体质理论指导下,从流行病学角度研究LHON14484点... 详细信息

leber遗传性视神经病变(LHON)是一种由线粒体DNA突变引起的母系遗传的线粒体疾病。因其视力损害严重,不仅给患者心理上造成极大的痛苦和障碍,也给家庭和社会带来沉重的负担。本课题在中医体质理论指导下,从流行病学角度研究LHON14484点突变的临床特征和中医体质分型,进一步探讨LHON发病与体质类型的相关性,希望从更深层次认识LHON,为进一步研究LHON的预防和治疗奠定理论基础。论文主要包括文献综述和临床观察两部分。文献综述主要包括:《leber遗传性视神经病变》和《leber遗传性视神经病变中医基础理论研究》两部分。在《leber遗传性视神经病变》中,对leber遗传视神经病变的生化基础,基因检测,组织病理学,临床特征,诊断与鉴别诊断,治疗,预后及遗传咨询等方面进行了简要评述。在《leber遗传性视神经病变中医基础理论研究》中,则对LHON的中医学病名、病因病机、辩证分型及中医眼科各学说的认识进行简要回顾。临床观察部分:目的:从流行病学角度研究LHON14484点突变的临床特征和中医体质分型,进一步探讨LHON发病与体质类型的关系。方法:对2003年7月至2006年4月间10例来自不同家系的14484点突变患者进行追踪随访。收集169例母系亲属的相关临床和病史资料,绘制家系图。同时采用《中医体质调查表》,对135例母系家族成员进行体质类型调查。结果:10家系169位母系亲属LHON外显率为27.8%(47/169)。所有患者均为急性或亚急性发病,双眼受累。经过平均235.81月的随访,71.4%(30/42)患者视力恢复,女性视力恢复率(78.3%)高于男性(50%)。135例母系亲属接受体质调查,各种体质类型的发病率由高至低依次为气郁质(55.56%)、气虚质(40%)、湿热质(33.33%)、阴虚质(31.82%)、瘀血质(20%)、痰湿质(16.67%)、正常质(12.5%)。对九种体质类型发病率整体比较有统计学差异(P<0.05)。剔除样本量小于10的四种体质类型后,其余五种体质类型两两比较,正常质-气郁质的发病率差异显著(P<0.01),其余体质类型间发病率无统计学意义。结论:LHON14484位点突变的临床特征与其他位点突变相似。体质类型与LHON发病相关。气郁质对LHON的发病影响显著。

关键词： leber遗传性视神经病变 14484位点突变分子生物学流行病学中医体质

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leber遗传性视神经病变的眼底荧光血管造影分析及玄府相关理论探讨

Leber遗传性视神经病变的眼底荧光血管造影分析及玄府相关理论探讨

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作者：谢万坤北京中医药大学

学位级别：硕士

leber遗传性视神经病变是公认的最为常见的线粒体疾病。随着分子遗传学的发展,目前该病的诊断已趋成熟,但人们对其发病机制的认识仍十分有限,对其不同临床表现和遗传学特征也不能给出合理的解释,而针对眼底表现和相关机制的研究更不系... 详细信息

leber遗传性视神经病变是公认的最为常见的线粒体疾病。随着分子遗传学的发展,目前该病的诊断已趋成熟,但人们对其发病机制的认识仍十分有限,对其不同临床表现和遗传学特征也不能给出合理的解释,而针对眼底表现和相关机制的研究更不系统。本课题综合比较了24例LHON患者的基本信息,发病时间和临床表现,并对其中15例患者进行眼底荧光血管造影检查,试图对国内本病患者的眼底荧光血管造影规律有进一步的认识。并在中医玄府学说理论的指导下,进一步探讨玄府与眼底变化的相关性,希望从现代医学角度对玄府有进一步的认识。为LHON的治疗提供理论依据。本论文主要包括文献综述和临床观察两部分。文献综述主要包括:《leber遗传性视神经病变》和《青盲相关理论研究》两部分。在《leber遗传性视神经病变》中,对leber遗传视神经病变的历史沿革、生化基础、组织病理学、动物模型、临床特征、治疗、遗传咨询等方面进行了简要评述。在《青盲相关理论研究》中,则对青盲的中医学病名、病因病机、辩证分型及玄府理论对青盲认识进行简要回顾。临床观察部分:目的:探讨LHON各期眼底荧光血管造影的特征。方法:记录24例经mtDNA基因检测确诊的LHON患者的基本信息、发病时间、临床特征和眼底荧光血管造影表现。根据病程长短和眼底表现分为临床前期、急性期和萎缩期三期,分析各期眼底表现的特点,并运用玄府理论对眼底表现进行探讨。结果:临床前期眼底表现视乳头充血色红,轻度水肿,盘缘毛细血管扩张、迂曲,视盘周围弧形神经纤维层肿胀,小动脉管径不均匀和弯曲。FFA表现为视盘边缘毛细血管扩张,动静脉分流,晚期视盘荧光着染,但无荧光素渗漏。急性期眼底表现为视盘充血及血管扩张明显,神经纤维层水肿混浊呈灰白色,反光增强。FFA可见视盘周围毛细血管扩张,动静脉血流循环时间缩短,血流加快。乳头黄斑束血管床减少,充盈迟缓;动静脉分流减少,动脉逐渐变细。FFA过程中自始至终无荧光渗漏,仅晚期有视盘荧光染色。萎缩期眼底表现为视盘苍白,边界清而锐利,血管明显减少,血管僵硬,神经纤维层反光消失。FFA示视盘荧光充盈迟缓、视盘周围血管消失。晚期视盘荧光潴留,但无荧光素渗漏。结论:LHON的FFA表现在临床前期、急性期和萎缩期有明显不同,11778、14484、11696位点突变患者的眼底表现未发现明显差别。玄府在LHON的发病中,可能是通过mtDNA、视网膜血管、视网膜神经节细胞来发挥作用的。

关键词： leber遗传性视神经病变眼底荧光血管造影玄府

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leber遗传性视神经病变患者线粒体ATPase6基因的变异分析

Leber遗传性视神经病变患者线粒体ATPase6基因的变异分析

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作者：高敏温州医科大学

学位级别：硕士

目的:　　1.收集全国各地的leber遗传性视神经病变家系和健康正常对照者，然后建立临床和家系资料以及分子遗传学资料数据库。　　2.对leber遗传性视神经病变患者的线粒体ATPase6基因变异进行筛查，并绘制该基因的突变频谱。　　3.探讨... 详细信息

目的:　　1.收集全国各地的leber遗传性视神经病变家系和健康正常对照者，然后建立临床和家系资料以及分子遗传学资料数据库。　　2.对leber遗传性视神经病变患者的线粒体ATPase6基因变异进行筛查，并绘制该基因的突变频谱。　　3.探讨线粒体ATPase6基因变异对leber遗传性视神经病变发生与发展的影响。　　方法:　　1.通过与北京中医药大学东方眼科医院、中国中医科学院眼科医院、河北邢台眼科医院和温州医科大学附属眼视光医院合作，以及全国其它医院送过来的家系，构建视神经萎缩病变家系的各地收集网络。首先经所有受试者同意和温州医科大学伦理道德委员会的许可，再签署相应的知情同意书后，最后采集外周静脉（肘静脉）血样3～5mL，并收集临床和家系详细资料（其中包括用Cyrillic软件绘制系图）。　　2.对受试对象（包括患者和正常对照）进行详细具体的眼科临床检查，包括检测视力（应用标准国际对数视力表），色觉检查（应用俞自萍色觉图），视野检查（应用Humphrey视野计），VEP(应用德国罗兰电生理仪)以及拍摄眼底（应用佳能眼底数码彩照）。　　3.用经典的酚-氯仿抽提法或DNA提取试剂盒法提取全基因组DNA(包含mtDNA)并以其作为PCR扩增模板，对先证者及家系母系成员原发突变G11778A、G3460A和T14484C所在的3个区域进行PCR扩增，对PCR产物进行纯化后，最后应用自动测序仪进行测序。　　4.为了更进一步分析探讨线粒体突变ATPase6在LHON发病过程中的作用和影响，使用相对应的引物对618个先证者和359个正常对照者的mtDNAATPase6序列进行PCR目的条带扩增、纯化和测序。对先证者线粒体ATPase6基因进行PCR扩增，对PCR产物进行纯化后，最后应用自动测序仪进行测序。　　5.使用生物软件（包括DNAStar5.0、Chromas2.24、Clustal X1.83等）对测序结果与剑桥序列进行比对分析，寻找ATPase6线粒体基因变异位点，通过密码子表确定编码的氨基酸是否改变。　　6.计算线粒体ATPase6基因中各位点的变异频率，绘制该地区leber遗传性视神经病变患者线粒体ATPase6基因的突变频谱。　　7.采用Clustal X1.81软件和相关的蛋白质数据库，分析线粒体ATPase6基因变异位点的保守性和氨基酸改变情况;Predictprotein在线蛋白质二级结构预测软件预测线粒体ATPase6基因变异对其蛋白质二级结构的影响;PolyPhen-2和SIFT蛋白功能预测软件预测线粒体ATPase6基因变异对其亚基功能性的影响，并用统计学的方法探讨线粒体ATPase6基因变异与leber遗传性视神经病变的相关性。　　8.综合评估可能与leber遗传性视神经病变相关的线粒体ATPase6基因变异　　结果:　　1.本研究对618例leber遗传性视神经病变患者进行线粒体ATPase6基因的扩增和测序分析，共发现98个变异。　　2.采用PredictProtein软件预测病例组中的错义突变能否改变线粒体ATPase6蛋白二级结构，结果表明在病例组中未发现对蛋白二级结构产生较大影响的变异位点。　　***和PolyPhen-2蛋白功能预测软件检测结果表明A8530G、A8563G、T8821G、G8921A、T8972A、T9017C、G9025A、T9038C、C9099A、T9119C、G9145A和A9181G变异可能对线粒体ATPase6亚基造成功能性的损害。　　4.在病例组中共筛查到98处变异，变异发生频率为14.39×10-2/bp;在对照组中共发现62处变异，变异发生频率为6.32×10-2/bp。且经x2检验，P值=0.002＜0.05，即病例组和对照组的基因变异频率存在显著差异，具有统计学意义。　　结论:　　1.在618例LHON患者的线粒体ATPase6基因中检测出大量的变异位点，其中大多数是线粒体DNA的多态性位点，但是部分位点可能增强了LHON的发生。　　2.线粒体ATPase6基因中高度保守的错义突变可能会影响复合体V的功能，损伤线粒体的氧化磷酸化功能，可能leber遗传性视神经病变的发生发展过程。　　3.病例组中线粒体ATPase6基因的变异频率高于对照组，这表明线粒体ATPase6基因变异可能与leber遗传性视神经病变相关。　　4.本研究为LHON的后续研究提供一定的工作基础。

关键词： leber遗传性视神经病变病理机制 ATPase6基因基因突变

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leber遗传性视神经病变患者的流行病学特征、视觉功能和光学相干断层扫描分析

Leber遗传性视神经病变患者的流行病学特征、视觉功能和光学相干...

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作者：王锦翠汕头大学

学位级别：硕士

目的leber遗传性视神经病变(leber hereditary optic neuropathy,LHON)是线粒体视神经病变的主要类型,其特征是由于mtDNA中的点突变导致的双眼先后发生的急性视神经病变。2018年5月11日,国家卫健委等5个部门共同制定了《第一批罕见病目... 详细信息

目的leber遗传性视神经病变(leber hereditary optic neuropathy,LHON)是线粒体视神经病变的主要类型,其特征是由于mtDNA中的点突变导致的双眼先后发生的急性视神经病变。2018年5月11日,国家卫健委等5个部门共同制定了《第一批罕见病目录》,LHON正式被纳入了我国的罕见病管理体系,引起了更多眼科医师的关注。本研究的目的在于分析LHON住院患者的流行病学和临床特征,利用OCT测量视盘RFNL、黄斑ILM-RPE和GCIPL厚度,分析不同发病时长和不同突变位点LHON患者的视网膜超微结构的变化趋势,进一步揭示LHON患者自然病程及其疾病发展转归。方法回顾性观察性研究。收集2010年8月～2021年2月在中国人民解放军总医院眼科医学部派驻第一医学中心神经眼科确诊为LHON患者的临床资料,筛选符合纳入标准的194例LHON住院患者。整理并分析患者的人口学资料、基因突变位点、临床特征、视野检查(visual field,VF)和光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)等各项基本信息和检查数据。根据发病时间分为4个亚组(≤90天、90～180天、180～360天、>360天),比较不同的发病时长以及不同的突变位点LHON患者的最佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)、视野(VFI、MD和PSD)以及OCT(视盘RNFL、黄斑ILM-RPE和GCIPL厚度)变化规律。使用SPSS26.0进行统计学分析。不同发病时长的LHON患者的视野(VFI、MD和PSD)和视盘RNFL、黄斑ILM-RPE和GCIPL等主要OCT指标的对比使用单因素方差分析;不同突变位点之间患者的视野(VFI、MD和PSD)、视盘RNFL、黄斑ILM-RPE和GCIPL等主要OCT指标的对比使用协方差分析,以剔除发病时间对于OCT相应部位厚度改变的影响;不同发时长与LHON患者最佳矫正视力(BCVA)之间的比较使用Spearman相关性分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。结果1、LHON患者突变位点排名前五位的依次是m.11778(54.1%)、m.14484(18.0%)、m.11696(5.6%)、m.3460(5.2%)和m.14502(5.2%),其他的少见突变位点LHON患者共23例(11.9%),两个或者三个位点同时发生突变的LHON患者共16例(8.2%)。2、194例LHON患者中,男性患者160例(82.5%),女性患者34例(17.5%),男女比为4.7:1;首次的发病年龄为3～71岁,中位数为17岁,平均发病年龄(21.2±12.5)岁;140例(72.3%)患者首次发病年龄集中分布在11岁至30岁之间;首次发病年龄≤10岁的LHON患者22例(11.3%),男女比为1.8:1,首次发病年龄>45岁的LHON患者13例(6.7%),男女比为1.6:1;双眼同时发病患者107例(55.2%),双眼先后发病患者70例(36.1%),单眼发病患者17例(8.8%)。3、发病时长≤90天的LHON患者矫正视力低于0.02有26只眼(16.6%),发病时长90～180天的LHON患者视力低于0.02有23只眼(30.3%),发病时长180～360天的LHON患者视力低于0.02有31只眼(48.4%),发病时长>360天的LHON患者视力低于0.02有20只眼(27.0%)。不同发病时长LHON患者的BCVA差异具有显著性差异,发病时长与LHON患者的Log MAR-BCVA具有弱的正相关性(相关系数R=0.137,P=0.017)。m.11778位点突变的患者BCVA低于0.02的比例最高,m.14484位点突变的患者BCVA低于0.02的比例最低,不同突变位点的LHON患者BCVA差异具有统计学意义(P=0.001)。4、发病时长≤90天的LHON患者的VFI、MD和PSD平均值依次为0.64±0.25、-12.38±7.37和8.14±3.15,发病时长90～180天的LHON患者的VFI、MD和PSD平均值依次为0.40±0.29、-17.99±9.17和8.34±3.12,发病时长180～360天的LHON患者的VFI、MD和PSD平均值依次为0.26±0.27、-20.42±10.95和7.59±3.38,发病时长>360天的LHON患者的VFI、MD和PSD平均值依次为0.66±0.21、-11.55±6.13和8.07±2.94。LHON患者视野检查的VFI和MD值从急性期开始出现一个逐渐变小的过程,发病时长大于360天以后VFI和MD值逐渐恢复(P<0.001)。使用协方差分析,去除发病时长对视野参数的影响,没

关键词： leber遗传性视神经病变光学相干断层扫描突变位点最佳矫正视力流行病学视野

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leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变的研究

Leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变的研究

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作者：贺江梅山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨leber遗传性视神经病变患者的线粒体DNA(mtDNA)突变,以明确其突变类型及特点,为此病的诊断、治疗及发病机制的研究提供参考依据。方法:分别应用等位基因特异性PCR(MSP-PCR)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和聚... 详细信息

目的:探讨leber遗传性视神经病变患者的线粒体DNA(mtDNA)突变,以明确其突变类型及特点,为此病的诊断、治疗及发病机制的研究提供参考依据。方法:分别应用等位基因特异性PCR(MSP-PCR)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)联合DNA测序的方法,对12个LHON家系的40位成员进行线粒体DNA突变位点的检测。结果: (1)对mtDNA 11778位点应用等位基因特异性PCR方法进行检测,有35例发现有突变,5例未见突变。在35例突变阳性者中有19人发病(男12人,女7人),16人未发病,突变外显率为54.3%; (2)对mtDNA 3460位点应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法进行检测,有2例发现有突变且为杂合性突变,38例未见突变。在2例突变阳性者中有1人发病(男性),1人未发病,突变外显率为50%; (3)在聚合酶链反应-单链构象多态性分析中发现有2例电泳迁移速率与正常对照者不同,且2例均为男性患者。经DNA测序后,结果与1981年剑桥标准序列相比较只有1例发现4258位点发生A→G的突变,这1例突变者并不伴随11778、3460原发突变的存在。 (4)综上三种检测结果,12个LHON家系的40位成员突变阳性者为38人,有临床症状者21人,外显率为55.2%,其中男14人,女7人,男性患者明显多于女性患者。结论: (1)原发突变位点11778在中国有着极高的突变率,本实验中该位点突变率为87.5%(35/40);原发突变位点3460则较为少见,本实验中该位点突变率仅为5%(2/40);新发现的4258(A→G)位点突变可能是LHON线粒体DNA新的突变位点,也可能是基因多态性,需要进一步研究来证实。 (2)携带线粒体DNA突变者并非全部发病,LHON具有明显的不完全外显性和性别偏向。 (3)由于11778在我国LHON患者中有着极高的突变率,因此对临床视神经萎缩病人及其家系人员应常规行mtDNA突变检测以明确诊断。 (4)RFLP和MSP—PCR两种方法是针对突变部位及性质明确的PCR检测方法,具有简便、特异、经济的特点,适用于临床的常规检测和实验研究;PCR-SSCP联合DNA测序的方法操作尽管比较繁琐,但它为新的突变位点的筛选和检测提供了有力的手段。

关键词： leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变 MSP-PCR PCR-RFLP PCR-SSCP DNA序列分析

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leber遗传性视神经病变家系的临床和分子遗传学研究

Leber遗传性视神经病变家系的临床和分子遗传学研究

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作者：赵福新温州医学院

学位级别：硕士

第一部分leber遗传性视神经病变患者筛查及资料收集\n第二部分leber遗传性视神经病变T14484C突变家系分子机制研究\n 目的：1.在全国各地收集视神经病变家系,建立临床资料和分子遗传学资料数据库.\n 2.对收集到的家系三个原发位点... 详细信息

第一部分leber遗传性视神经病变患者筛查及资料收集\n第二部分leber遗传性视神经病变T14484C突变家系分子机制研究\n 目的：1.在全国各地收集视神经病变家系,建立临床资料和分子遗传学资料数据库.\n 2.对收集到的家系三个原发位点(G3460A、Gll778A、T14484C)进行检测是否在中国人群中存在及统计突变发病频谱.\n 3.对其中T14484C家系进行线粒体基因组全序列测序,分析继发位点和其它影响功能的突变位点对T14484C家系的外显率和发病严重程度的影响.\n 4.了解T14484C突变在中国人群中的临床表现、外显率、发病年龄、男女发病比例;分析其它因素(如核基因、环境因素、单倍型和生理心理因素等)对外显率和发病严重程度的影响.\n 方法：1.通过温州医学院眼视光医院与北京中医药大学东方医院眼科和福建医科大学附属第一医院合作,建立起视神经病变家系收集网络,另外还有全国各地医院和科研院所送来的少量家系资料.经温州医学院伦理道德委员会及辛辛那提儿童医院医学中心委员会许可,病人及所有受试者同意,签署知情同意书,采集血样,了解家系情况,并建好数据库.\n 2.对该家族中的所有成员进行眼科临床检查,包括标准对数视力表检测视力,俞自萍色觉图检查,Humphrey视野计按程序SITA检查(Humphrey Visual Field AnalyzerIIi,SITAStandard),德国罗兰电生理仪(Roland Consult RETI port gamma,pattern or flash VEP)检查视觉诱发电位(VEP)以及佳能眼底数码彩照(Canon CR6-45NM fundus camera)拍摄眼底.\n 3.对采集的血样提取基因组DNA,并设计包含三个原发位点的三对引物进行PCR扩增、纯化和测序.\n 4.对其中检测出的T14484C家系设计出扩增线粒体基因组全序列的24对引物,然后进行PCR扩增、纯化并测序.\n 5.使用各种生物软件分析测序结果,找出所有的多态性位点和突变位点,分析其对功能的影响.\n 6.对收集的临床资料进行整理,分析其与各个突变位点之间的关联性.\n 结果：1.我们共收集了345个视神经病变的家系,其中检测出LHON三个原发位点(G11778A、G3460、T14484C)的家系共129个,在患者中没有发现三个原发位点同时出现两个或三个突变位点的情况.其中发生T14484C突变的家系有15个,占三个原发位点发病率的11.6%(15/129).而其它位点(G3316A、C3394T、T3497C)家系21个,G11696A突变家系14个,G11696A和G11778A双位点突变家系3个,另外也发现了影响功能突变位点(A4435G、A15951G、A10059G)的家系各1个.\n 2.对其中6个T14484C突变家系研究,发现患者发病年龄从6岁到26岁不等,平均18.9岁;视力损害程度从正常到重度不等,多为中度到重度;各个家系男女发病比分别为3:0、1:0、1:0、3:0、2:0、1:1,而男女发病比为11:;各个家系外显率分别为18.8%、5.9%、16.7%、23.1%、22.2%、15.4%,平均为16.2%.\n 3.通过对以上6个leber遗传性视神经病变T14484C突变的家系线粒体基因组全序列进行测序后分析,除了T14484C突变外,这些家系先证者线粒体DNA呈现一种独特的多态性:在D-loop区总共有36个变异位点,都已经被报道过;而在13个多肽编码区存在着更多的变异位点,共有65个,其中25个还没有被报道过,但大多数为同义突变,共有30个,而错义突变位点有25个,未曾报道过的错义突变位点有11个,分布于13个多肽编码区上;在12S rRNA基因区存在3个已报道的多态位点,在16S rRNA基因区也存在3个多态位点,其中1719InsG未见报道;另外在为22个tRNA基因编码区也存在多态性位点共2个:tRNA<\'Cys>G5821A和tRNA<\'Gly>T10031C.另外在家系WZ147中存在一个与LHON有关的其它突变位点(G3316A).对其它RNA基因区的变异位点和编码区因突变发生改变的氨基酸在人、牛、鼠、蟾蜍中进行比对,发现它们在进化上并不保守.\n 4.线粒体DNA单体型的分析发现这6个家系的mtDNA分别属于R11、D4、C、C4、C、M8a,说明他们不是来自于一个中国祖先,发病呈散发现象.\n 结论：1.在中国人群中存在T14484C突变,并可使携带者致病,但并不是每个携带者都发病,发病外显率为16.2%,与G11778A相比明

关键词： leber遗传性视神经病变线粒体DNA 原发突变视力障碍分子遗传学基因组全序列

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leber遗传性视神经病变的分子生物学检测

Leber遗传性视神经病变的分子生物学检测

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作者：胡宏阁郑州大学

学位级别：硕士

目的leber遗传性视神经病变（leber hereditary optic neuropathy，LHON）是一种主要累及视盘黄斑束纤维，导致视神经退行性变的母系遗传性疾病。多见于男性，成年早期发病。该病1871年由德国眼科医生Theodor leber首先报告为一种独立... 详细信息

目的leber遗传性视神经病变（leber hereditary optic neuropathy，LHON）是一种主要累及视盘黄斑束纤维，导致视神经退行性变的母系遗传性疾病。多见于男性，成年早期发病。该病1871年由德国眼科医生Theodor leber首先报告为一种独立性疾病，1988年Wallace和他的同事发现该病患者mtDNA第11778位点存在单个核苷酸的替换，由鸟嘌呤G替换为腺嘌呤A，此突变造成呼吸链上还原型辅酶Ⅰ（NADH）脱氢酶第四个亚单位（ND4）基因编码的第340位氨基酸由精氨酸变为组氨酸。此后又有其他位点突变相继被发现，目前报道有20多个突变位点与此病有关。从临床、遗传学、生化等方面看，因为线粒体DNA第11778、14484、3460位点突变能单独致病，被称为原发突变位点，其他位点突变被看作是继发突变。11778、14484、3460三个位点的突变分别导致了呼吸链上还原型辅酶Ⅰ的ND4、ND6、ND1三个亚单位的氨基酸替换，绝大多数病人的发病是由此三个原发突变所导致，但三者的表达、严重程度和视力的恢复不同。对mtDNA的分子生物学检测有助于疑似病例，尤其是散发病人的确诊。目前国内已有人开始从事此方面的工作，但仅限于对11778、14484和3460三个原发突变位点的检测，方法也多采用限制性片断长度多态性和突变特异性引物聚合酶链反应，其他位点突变的研究尚未见报道。本研究在对5个LHON家系调查的基础上，采用聚合酶链反应扩增结合单链构象多态性分析（PCR-SSCP）和DNA测序，对三个家系的30个母系成员的血样进行了11个位点的分子生物学检测，目的是研究LHON的发病特点及分子生物学改变；为LHON的诊断、治疗、发病机制的研究提供参考依据；早日确诊疑似病人，使其避免不必要的治疗；为病人及其家系成员的就业、婚育作出指导；郑州大学2（X）1研究生毕业论文让bet遗传性视神经病变的分子生物学检测材料与方法共调查了河南、安徽两省5个符合临床诊断的LHON家系，其中三个家系同意检测，在这三个家系中抽取了母系成员的血样30份作为实验组，抽取无视力障碍的正常人血样32份作为对照组，两组的男女比例（x’=0 .06，挤0.81）及年龄分布（t=0.72，p二0.47）相匹配。在无菌条件下抽取外周静脉血，2%EDTA抗凝，有机酚法提取DNA。752紫外线分光光度计进行DNA定量及纯度测定，用4对引物聚合酶链反应扩增出4个线粒体DNA片断，涵盖3394、3460、4136、4160、4216、11696、11778、 14459、14482、14484、14498共11个突变位点，琼脂糖凝胶电泳验证DNA扩增产物的产量和纯度。扩增产物用于单链构象多态性分析和DNA测序（DNA sequencing）。本实验的参照mtDNA序列是剑桥标准mtDNA序列。结果5个家系的母系成员共78人（男36人，女42人），发病31人，发病率39. 74%，男女比例20:11，平均发病年龄29.01岁。男性外显率55.55%，女性外显率26.19%。其中三个家系（樊氏、毛氏、石氏）患者发病年龄随传递代数的增加而减小，呈现遗传早发现象。用第一对引物p，、PZ扩增340bp片段（片段1），自npl 1641至npll980，其中含11778、11696两个位点。实验组30例单链构象多态性（SSCP）检测结果全部为异常，对照组32例SSCP检测结果全部正常。对片段1测序，测序结果与剑桥标准mtDNA 序列比对，30个实验组样本均含有1 1778位点突变，对照组均无此位点的突变。实验组和对照组所有样本都出现11719位点的突变。11696位点测30个样本，其中实验组19 个，对照组11个，均未发生突变。第二对引物P3、p;扩增338bp片段（片段2），自np14200 到np14538，其中含14459、14482、14484、14498四个位点，SSCP检测发现仅一例 LHON 病人的结果有异常，反复验证排除假阳性，其余29人未发现异常，对照组32人均未发现异常。片段2测序23个样本，其中实验组14个，对照组9个，所含4个目的位点均未发生突变。SSC

关键词：线粒体DNA leber遗传性视神经病变聚合酶链式反应:单链构象多态性 DNA序列测定

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leber遗传性视神经病变视网膜后极部非对称性特点的研究

Leber遗传性视神经病变视网膜后极部非对称性特点的研究

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作者：高芷澳湖北中医药大学

学位级别：硕士

【目的】通过分析leber遗传性视神经病变(leber’s Hereditary Optic Neuropathy,LHON)视网膜后极部非对称性来评价后极部视网膜厚度(Posterior Pole Retinal Thickness,PPRT)的变异性,以此观察leber遗传性视神经病变视网膜后极部非对... 详细信息

【目的】通过分析leber遗传性视神经病变(leber’s Hereditary Optic Neuropathy,LHON)视网膜后极部非对称性来评价后极部视网膜厚度(Posterior Pole Retinal Thickness,PPRT)的变异性,以此观察leber遗传性视神经病变视网膜后极部非对称性的特点,评估在诊断LHON中的临床应用价值。【方法】临床病例-对照研究。选取2017年11月至2021年11月来湖北省中医院眼科就诊,经线粒体DNA检测确诊的基因突变位点为m.11778G>A的leber遗传性视神经病变(LHON)患者共30例60只眼作为leber组,同期于本院选取年龄与性别相匹配的健康人24例48只眼作为对照组,运用海德堡光学相干断层扫描(OCT)仪的Posterior Pole(后极部)模式进行视网膜后极部和黄斑区的扫描,对leber组以及对照组受试者分别进行后极视网膜厚度非对称性检查,选取后极部以黄斑中心凹为中心30°×25°的范围;记录后极部视网膜厚度数据结果,生成后极部视网膜厚度地形图,将后极部视网膜厚度地形图分成分为六个面积相等的区域,分别记录为:鼻上区、鼻下区、颞下区、颞上区、黄斑视乳头区、周边区;通过定量分析比较不同区域LHON患者与对照组PPRT的差异;对比leber组以及对照组后极部视网膜厚度地形图特点,以及各区域PPRT平均值,并分析LHON后极部视网膜厚度的变化特点分布规律以及不对称性。【结果】与对照组相比,leber组患者后极部视网膜平均厚度普遍出现明显变薄,并且leber组患者视网膜后极部各区域象限的平均厚度对比正常人来说也有显著变薄的趋势,双眼都呈现T5区域变化最大的特点,T5区域相对应的正是视乳头黄斑束区域;T2区域变化位居第二,相对应的是视网膜后极部鼻下区域;而T4区域相对而言变化较小;OCT后极部非对称性分析检测的leber组后极部视网膜厚度较对照组相比眼间视网膜后极部非对称性分析(Posterior Pole Asymmetry Analysis,PPAA)比较差异均具有统计学意义(P<0.05),具有明显的非对称性改变,在眼内下半球区域PPAA比较差异均具有统计学意义(P<0.05),眼内上半球区域PPAA比较差异无统计学意义(P>0.05),不存在非对称性变化(P>0.05);对照组组内眼内和眼间PPAA比较差异无统计学意义(P>0.05)。leber组眼内非对称性差异异均具有统计学意义(P<0.05),而眼间比较差异无统计学意义(P>0.05)【结论】leber遗传性视神经病变患者PPRT分布存在区域性特征,OCT的PPAA模式能够检测LHON后极部视网膜厚度非对称性的改变,并且两组存在一定的非对称性,提示PPAA也许对LHON的诊断有所帮助。

关键词： leber遗传性视神经病变后极部视网膜厚度特点光学相干断层扫描

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leber遗传性视神经病变的光学相干层析成像特征及视力影响因素

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中国眼耳鼻喉科杂志 2022年第5期22卷 458-462,468页

作者：冯超逸陈倩孙兴怀田国红复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031 国家卫健委及中国医学科学院近视眼重点实验室(复旦大学) 上海200031

目的采用光学相干层析成像(OCT)观察不同病程阶段leber遗传性视神经病变(LHON)患者内层视网膜结构的变化。方法单中心队列研究。纳入2017年2月~2022年5月间在本院首次确诊的LHON患者,按照其病程分组,评估不同病程之间视网膜内层结构... 详细信息

目的采用光学相干层析成像(OCT)观察不同病程阶段leber遗传性视神经病变(LHON)患者内层视网膜结构的变化。方法单中心队列研究。纳入2017年2月~2022年5月间在本院首次确诊的LHON患者,按照其病程分组,评估不同病程之间视网膜内层结构的差异,并分析视力的影响因素。结果共纳入71例患者(142眼),年龄中位数18.0岁(P=11.5,P=30.0),其中未发病7眼(4.9%),病程<1个月28眼(19.7%),1~3个月46眼(32.4%),> 3个月61眼(43.0%)。小数视力中位数0.05(P=0.01,P=0.1)。OCT显示急性期视盘周围视网膜神经纤维层(RNFL)水肿增厚,随着时间的延长,厚度逐渐下降,至慢性期明显变薄。黄斑区神经节细胞-内丛状层(GCIPL)急性期即出现萎缩变薄,其厚度随病程持续下降。多因素回归分析结果显示,黄斑区GCIPL厚度和不同原发突变对最佳矫正视力(BCVA)的影响具有统计学意义。结论 LHON以乳斑束优先受累为特点,视网膜内层结构改变甚至早于视觉功能下降之前。黄斑区GCIPL和不同原发突变位点是视力的独立影响因素。

关键词： leber遗传性视神经病变光学相干层析成像视盘周围视网膜神经纤维层黄斑区神经节细胞-内丛状层

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