检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张桂珍华北理工大学

学位级别：硕士

目的研究n-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（n-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP）通过调控刺猬（Hedgehog,HH）信号抑制SiO2诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞发生上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用及其机制。方法采用HOPE-MED8050动式染尘系统构建大鼠矽肺模型,实验分组:1)对照组;2)矽肺模型组;3)Ac-SDKP后处理组。体外培养小鼠MLE-12肺泡Ⅱ型上皮细胞,实验分组为:1)对照组、SiO2诱导组、Ac-SDKP组和SiO2+Ac-SDKP组;2)溶剂对照组、SiO2诱导组、GDC-0449组和SiO2+GDC-0449组;3)溶剂对照组、SiO2诱导组、GAnT61组和SiO2+GAn61组。天狼星红染色检测胶原沉积;免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscel actin,α-SMA）、音刺猬因子（sonic hedgehog,SHH）的定位与表达,免疫荧光染色法检测E钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）与ATP结合盒转运蛋白A3（ATP Binding Cassette Transporter A3,ABCA3）、SHH与E-cadherin、SHH与vimentin在组织中的共定位;免疫印迹法检测I型胶原蛋白（Collagen type Ⅰ,Col Ⅰ）、α-SMA、E-cadherin、SHH、Smoothened（SMO）、胶质瘤相关癌基因同源蛋白（Glioma-associated oncogene homolog,Gli）1、Gli2的蛋白表达水平。结果1)与对照组相比较,SiO2诱导组E-cadherin膜表达显著减弱,而α-SMA免疫细胞化学染色强度显著升高;免疫印迹结果显示,与对照组相比较,SiO2诱导组E-cadherin蛋白表达水平下调,Col Ⅰ和α-SMA蛋白表达水平上调,经方差分析差异均具有统计学意义（P<0.05）。2)予以不同浓度SiO2诱导,与对照组相比较,50μg/m L SiO2诱导组SHH、SMO及其下游转录因子Gli1、Gli2蛋白水平均显著上调,经方差分析差异均具有统计学意义（P<0.05）。3)与SiO2诱导组相比较,SiO2+GDC-0449组和SiO2+GAn61组E-cadherin蛋白表达上调,Col Ⅰ和α-SMA蛋白表达水平下调。4)与SiO2诱导组相比较,SiO2+Ac-SDKP组E-cadherin膜表达增强,α-SMA阳性表达减弱。免疫印迹结果显示,与对照组相比较,SiO2诱导组E-cadherin表达水平显著下调,Col Ⅰ、α-SMA、SHH、SMO、Gli1和Gli2蛋白表达水平显著上调;SiO2+Ac-SDKP组与SiO2诱导组相比较,E-cadherin表达水平显著上调,Col I、α-SMA、SHH、SMO、Gli1和Gli2蛋白表达水平显著下调,经方差分析差异均具有统计学意义（P<0.05）。5)天狼星红染色结果显示,与对照组相比较,矽肺模型组大鼠肺内出现典型的矽结节,而Ac-SDKP后处理组矽结节数量和矽结节面积均较矽肺模型组减少。免疫荧光染色结果显示矽结节内存在Vimentin与ABCA3共表达的细胞。免疫印迹结果显示,与对照组相比较,矽肺模型组Col Ⅰ、α-SMA蛋白水平显著上调,而E-cadherin蛋白表达水平显著下调;与矽肺模型组相比较,Ac-SDKP后处理组Col Ⅰ、α-SMA蛋白水平显著下调,而E-cadherin蛋白表达水平显著上调;经方差分析,差异均具有统计学意义（P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示,SHH主要定位于细胞浆,在对照组几乎无阳性表达的细胞,而在矽肺模型组,尤其是矽肺结节区域SHH强表达,在Ac-DKP后处理组,SHH阳性表达强度减弱,数量减少。免疫荧光染色结果可见矽结节内SHH与E-cadherin、SHH与vimentin共表达细胞。免疫印迹结果显示,与对照组相比较,矽肺模型组SHH、SMO、Gli1、Gli2蛋白水平显著增高;与矽肺模型组相比较,Ac-SDKP后处理组SHH、SMO、Gli1、Gli2蛋白水平显著下降,经方差分析,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论Ac-SDKP能够通过对HH信号的调节,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT进程,发挥抗矽肺纤维化的作用。图16幅;表8个;参156篇。

关键词：矽肺 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸 Hedgehog信号上皮-间质转化

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Ac-SDKP抑制SiO2介导的肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞向间质转化的作用及机制

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昆明医科大学学报 2020年第5期41卷 41-45页

作者：张桂珍张乙张诗汇李丹杨方徐洪华北理工大学基础医学院河北唐山063000

目的探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过调控刺猬(hedgehog,HH)信号通路,对二氧化硅(SiO2)诱导的肺泡II型上皮MLE-12细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法体外采用50μg/mL SiO2培养小鼠MLE-12肺泡Ⅱ... 详细信息

目的探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过调控刺猬(hedgehog,HH)信号通路,对二氧化硅(SiO2)诱导的肺泡II型上皮MLE-12细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法体外采用50μg/mL SiO2培养小鼠MLE-12肺泡Ⅱ型上皮细胞。实验分组为:(1)对照组、SiO2诱导组、Ac-SDKP组和SiO2+Ac-SDKP组;(2)溶剂对照组、SiO2诱导组、GDC-0449组和SiO2+GDC-0449组;(3)溶剂对照组、SiO2诱导组、GAnT61组和SiO2+GAn61组。免疫细胞化学染色法检测SMO和Gli1的定位表达。免疫印迹法检测I型胶原蛋白(collagen type I,Col I)、α-SMA、E-cadherin、SHH、Smoothened(SMO)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homolog,Gli)1、Gli2的蛋白表达水平。结果免疫细胞化学染色结果显示:与对照组相比,SiO2诱导组中SMO及Gli 1强阳性表达,给予Ac-SDKP处理后,阳性表达减弱。与SiO2诱导组相比较,SiO2+GDC-0449组和SiO2+GAn61组E-cadherin蛋白表达上调,Col I和α-SMA蛋白表达水平下调。与对照组相比较,SiO2诱导组E-cadherin表达水平显著下调,Col I、α-SMA、SHH、SMO、Gli1和Gli2蛋白表达水平显著上调;SiO2+Ac-SDKP组与SiO2诱导组相比较,E-cadherin表达水平显著上调,Col I、α-SMA、SHH、SMO、Gli1和Gli2蛋白表达水平显著下调,经方差分析差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论Ac-SDKP能够通过对HH信号的调节,抑制肺泡II型上皮细胞EMT进程,发挥抗矽肺纤维化的作用。

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸刺猬信号上皮-间质转化

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n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1的调节在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

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解剖学杂志 2009年第6期32卷 719-723页

作者：杨方陈萍王俐玻李倩张丽娟闫静波华北煤炭医学院实验中心唐山063000 泰达心血管病医院超声科塘沽300457 华北煤炭医学院校医院唐山063000 邢台市人民医院病理科邢台054031

目的：探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对大鼠肺内基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的调节在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法：气管内灌注染尘法制作大鼠矽肺模型... 详细信息

目的：探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对大鼠肺内基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的调节在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法：气管内灌注染尘法制作大鼠矽肺模型，将含有AcSDKP的微量药物释放泵埋入腹腔。实验动物随机分为矽肺模型对照4周组，矽肺模型对照8周组，矽肺模型4周组，矽肺模型8周组，抗纤维化治疗组及预防治疗组。H—E染色和免疫组织化学显色对矽肺纤维化病变和MMP-1和TIMP-1在肺组织内的表达进行形态学观察；免疫印迹法对肺内MMP-1和TIMP-1酶蛋白表达进行检测。结果：与模型对照组比较，矽肺大鼠肺内MMP-1和TIMP-1表达增强。与矽肺模型组比较，AcSDKP能够上调矽肺大鼠肺内MMP-1的表达，下调TIMP-1的表达，使MMP-1／TIMP-1的比值升高。结论：AcSDKP能够促进矽肺大鼠肺内MMP-1的表达，抑制TIMP-1的表达，从而加速了细胞外基质（包括胶原）的降解，这可能与AcSDKP抗矽肺纤维化的作用有关。

关键词：矽肺 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶组织抑制因子

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Ac-SDKP对矽肺纤维化内质网应激介导的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的抑制作用及其机制

Ac-SDKP对矽肺纤维化内质网应激介导的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的抑...

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作者：张丽娟河北医科大学

学位级别：博士

矽肺（又称硅肺）,是由于长期吸入大量含有游离二氧化硅（silicon dioxide,SiO2）粉尘所引起的以肺部广泛的结节性纤维化为主的慢性进行性职业病。矽肺目前已经成为我国重大的职业卫生安全问题之一。研究矽肺的发生、发展机制,探求有效... 详细信息

矽肺（又称硅肺）,是由于长期吸入大量含有游离二氧化硅（silicon dioxide,SiO2）粉尘所引起的以肺部广泛的结节性纤维化为主的慢性进行性职业病。矽肺目前已经成为我国重大的职业卫生安全问题之一。研究矽肺的发生、发展机制,探求有效的治疗靶点一直是世界范围内职业病研究领域的难点和热点问题。肺泡Ⅱ型上皮细胞被认为是肺泡的“防御细胞”,肺泡Ⅱ型上皮细胞的功能状态是决定肺损伤病理转归的决定因素之一。然而,矽肺纤维化过程中,SiO2刺激对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用及其机制仍需进一步的深入研究与探讨。n-乙酰-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（n-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP）一种具有生理活性的内源性四肽。研究发现,Ac-SDKP在其基础分泌水平就有抑制器官内胶原积聚的重要作用。课题组前期研究结果显示,Ac-SDKP可通过抑制成纤维细胞增殖以及肌成纤维细胞分化进而发挥抗矽肺纤维化的作用。本研究拟探讨SiO2对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的刺激作用及其机制,进一步观察Ac-SDKP能否通过抑制SiO2诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡进而发挥抗矽肺纤维化作用,探讨Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的分子机制。研究共分为三个部分:第一部分SiO2对人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的刺激作用及其机制目的:以人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549为研究对象,观察与分析SiO2对人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的刺激作用及其机制方法:1将人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549分为:1)对照组;2)SiO2（50μg/cm2）刺激组。2采用透射电镜观察比较正常对照组及SiO2刺激组A549细胞超微结构改变及凋亡现象的产生。3提取对照组及SiO2刺激组蛋白样品,经双向凝胶电泳分离后采用考马斯亮蓝染色显示蛋白点,用ImageMaster 6.0图像分析软件对凝胶进行分析,筛选出差异蛋白。以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术获得肽质量指纹谱并对蛋白质进行分析。4采用Western blot检测A549细胞中GRP78、CHOP以及Caspase-12的蛋白表达。结果:1.透射电镜观察,可见对照组A549细胞细胞膜表面完整,可见微绒毛,胞质密度均匀,无空泡,细胞器完整,染色质均匀,核仁清晰。SiO2刺激组A549细胞,细胞表面微绒毛减少,内质网扩张,胞浆空泡化,核固缩,染色质高度浓缩向核膜边集。2.经蛋白组学技术筛选出的差异蛋白点中,与对照组相比,SiO2刺激组有5个蛋白点表达上调,6个蛋白点表达下调。其中内质网应激的标志性蛋白——GRP78表达上调。*** blot结果显示,与对照组相比,SiO2刺激3 h后,GRP78蛋白水平显著增加（P<0.01）。CHOP和Caspase-12蛋白水平在SiO2刺激6 h至48h之内持续增加,具有时间依赖性（P<0.01）。第二部分Ac-SDKP对内质网应激的调节在抑制二氧化硅诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡中的作用及其机制目的:以人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549为研究对象,观察Ac-SDKP对SiO2诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞内质网应激的调节作用,探讨Ac-SDKP抑制SiO2诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的作用机理。方法:1将人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549分为:1)对照组;2)SiO2（50μg/cm2）刺激组;3)4-PBA（0.5mmol/L）处理组4)Ac-SDKP(10-8mol/L)处理组。2采用透射电镜观察Ac-SDKP及4-PBA对SiO2刺激的A549细胞超微结构的影响。3采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI染色法检测Ac-SDKP及4-PBA对SiO2刺激的A549细胞凋亡的影响。4免疫细胞化学染色法检测Ac-SDKP及4-PBA对SiO2刺激的A549细胞GRP78、CHOP以及Caspase-12蛋白表达的调节作用。5采用Western blot法检测Ac-SDKP及4-PBA对SiO2刺激的A549细胞GRP78、phospho-PERK、phospho-eIF2α、CHOP以及Caspase-12蛋白表达的影响。结果:1.透射电镜观察可见,Ac-SDKP、4-PBA的预处理显著改善了Si O2诱导的内质网扩张程度,无明显胞浆空泡化,核固缩以及染色质浓缩现象。2.流式细胞仪Annexin V-FITC/PI染色结果显示,与对照组相比,Si O2刺激后的细胞早期凋亡率和晚期凋亡/坏死细胞比例明显高于对照组,Ac-SDKP、4-PBA的预处理显著降低了SiO2诱导的A549细胞凋亡。Ac-SDKP处理组和4-PBA处理组细胞早期凋亡率分别为9.01%和9.52%,晚期凋亡/坏死细胞比例分别为3.09%和3.75%。3.免疫细胞化学染色结果显示,与对照组相比,SiO2刺激48h

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺肺泡II型上皮细胞内质网应激二氧化硅 4-苯基丁酸

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Ac-SDKP调控Gαs/Gαi信号抑制大鼠矽肺纤维化的作用

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第1期38卷 24-28页

作者：刘燕耿玉聪徐洪张丽娟王建辉王瑞雪胡启峰杨方华北理工大学基础医学院河北唐山063000 华北理工大学医学实验中心河北唐山063000 唐山市第二医院创伤科河北唐山063000

目的观察n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)能否通过调控激动型G蛋白α(Gαs)/抑制型G蛋白α(Gαi)信号对大鼠矽肺纤维化发挥保护作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=10):对照16周组,矽肺模型16周组,Ac-SDKP预防治... 详细信息

目的观察n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)能否通过调控激动型G蛋白α(Gαs)/抑制型G蛋白α(Gαi)信号对大鼠矽肺纤维化发挥保护作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=10):对照16周组,矽肺模型16周组,Ac-SDKP预防治疗组。采用HE染色观察肺组织病理形态的改变,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤连蛋白(Fn)、Gαs、Gαi2、Gαi3和环磷酸腺苷(cAMP)的含量,采用免疫荧光染色检测矽肺组织α-SMA/Gαi3的共表达。结果在矽肺模型16周组,HE染色显示肺组织内出现多个细胞性结节的融合和间质纤维化的形成,并可见细胞纤维性结节的形成。免疫荧光化学染色显示在纤维化病变区域α-SMA/Gαi3共表达增强。与对照组比较,矽肺模型16周组α-SMA、CollagenⅠ、Fn、Gαi2及Gαi3的蛋白表达明显升高,Gαs和cAMP的表达明显下降;与矽肺模型16周组相比,Ac-SDKP预防治疗组肺组织病理损伤减轻,α-SMA/Gαi3共表达减少,α-SMA、CollagenⅠ、Fn、Gαi2及Gαi3的蛋白表达显著降低,Gαs和cAMP的表达明显升高。结论 Ac-SDKP能够通过调节Gαs、Gαi促进cAMP的生成对矽肺大鼠肺纤维化产生保护作用。

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺病环磷酸腺苷激动型G蛋白α／抑制性G蛋白α

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Ac-SDKP调节CREB、Smad信号抑制矽肺纤维化的作用

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实用医学杂志 2017年第21期33卷 3539-3542页

作者：张乙刘燕李颖朱丽艳王建辉杨秀红徐洪杨方华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室河北省唐山市063210 华北理工大学基础医学院医学实验中心河北省唐山市063210

目的研究Ac-SDKP调节p-CREB、p-Smad2/3信号抑制矽肺纤维化的作用。方法 Wistar大鼠随机分为:对照组、矽肺模型组、Ac-SDKP抗纤维化治疗组、Ac-SDKP预防治疗组。Van Gieson染色观察肺组织形态,Western Blot检测α-SMA、cAMP、PKA、p-CRE... 详细信息

目的研究Ac-SDKP调节p-CREB、p-Smad2/3信号抑制矽肺纤维化的作用。方法 Wistar大鼠随机分为:对照组、矽肺模型组、Ac-SDKP抗纤维化治疗组、Ac-SDKP预防治疗组。Van Gieson染色观察肺组织形态,Western Blot检测α-SMA、cAMP、PKA、p-CREB和p-Smad2/3蛋白表达;免疫荧光检测p-Smad2/3与α-SMA的共表达。结果矽肺模型组,纤维化病变区域可见胶原沉积,α-SMA、p-Smad2/3蛋白表达明显增多,cAMP、PKA及p-CREB表达显著减少。经Ac-SDKP干预后,cAMP、PKA及p-CREB的表达显著增加,α-SMA、p-Smad2/3的蛋白表达明显降低,肺组织损伤减轻,胶原沉积减少。结论 Ac-SDKP可通过cAMP/PKA/p-CREB信号抑制p-Smad2/3的表达,发挥抑制矽肺纤维化的作用。

关键词：矽肺病环磷酸腺苷环磷腺苷应答元件结合蛋白 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸

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Ac-SDKP与AngⅡ信号交互作用对矽肺纤维化发生、发展的影响

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解放军医学杂志 2016年第9期41卷 709-713页

作者：刘燕耿玉聪高学敏彭海兵李世峰徐洪杨方华北理工大学基础医学院河北唐山063000 华北理工大学冀唐学院河北唐山063000 华北理工大学医学实验中心河北唐山063000

目的观察n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)和血管紧张素转换酶(ACE)/血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)轴在大鼠矽肺纤维化发生、发展过程中的表达变化及其对矽肺纤维化形成的影响。方法 60只雄性Wistar... 详细信息

目的观察n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)和血管紧张素转换酶(ACE)/血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)轴在大鼠矽肺纤维化发生、发展过程中的表达变化及其对矽肺纤维化形成的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为6组(n=10),分别染尘0、2、4、8、12、16周构建大鼠矽肺模型。HE染色观察肺组织形态,Western blotting检测矽肺大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、纤连蛋白(Fn)、ACE及AT1R蛋白的表达,ELISA法检测矽肺大鼠肺组织中Ac-SDKP和AngⅡ的含量。结果 HE染色结果显示,大鼠染尘2周后即可见肺泡壁增宽及巨噬细胞浸润,4周组偶见孤立的细胞性结节形成(主要由巨噬细胞构成),8周组和12周组大鼠肺泡间隔增宽明显,且细胞性结节数量增多,16周组肺组织内可见多个细胞性结节的融合和间质纤维化的形成,并可见细胞纤维性矽结节的形成。与对照组比较,矽肺模型4、8、12、16周组大鼠肺组织α-SMA、ColⅠ、Fn蛋白表达逐渐增高(P<0.05),2、4、8、12、16周组大鼠肺组织ACE、AngⅡ、AT1R蛋白表达逐渐增高(P<0.05),而大鼠肺组织中Ac-SDKP的表达水平在矽肺模型2周组明显高于对照组(P<0.05),随后逐渐降低,在12周和16周组已明显低于对照组(P<0.05)。结论矽肺局部组织ACE/AngⅡ/AT1R的表达在矽肺发生、发展过程中逐渐升高,而Ac-SDKP的表达逐渐降低。Ac-SDKP和AngⅡ信号参与了大鼠矽肺纤维化的过程。

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺肾素-血管紧张素系统

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Ac-SDKP活化cAMP信号抑制矽肺纤维化的作用及机制

Ac-SDKP活化cAMP信号抑制矽肺纤维化的作用及机制

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作者：刘燕河北医科大学

学位级别：博士

矽肺是由于在职业活动中长期吸入二氧化硅（Si O2）粉尘引起,其基本病理特征包括矽结节的形成和肺组织纤维化。现有研究显示,肺组织局部肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensinsystem,RAS）参与了肺纤维化的发生与发展。作为RAS的关键... 详细信息

矽肺是由于在职业活动中长期吸入二氧化硅（Si O2）粉尘引起,其基本病理特征包括矽结节的形成和肺组织纤维化。现有研究显示,肺组织局部肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensinsystem,RAS）参与了肺纤维化的发生与发展。作为RAS的关键酶,血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）含有n端和C端两个催化结构域。其中C端结构域能够催化血管紧张素I（angiotensin I,Ang I）转化为血管紧张素II（angiotensin II,Ang II）。而Ang II是RAS致纤维化效应重要的活性蛋白,其作用主要由血管紧张素II的1型受体（angiotensin II type 1 receptor,AT1R）介导,包括诱导炎症反应,促进成纤维细胞增殖和细胞外基质沉积。ACE n端结构域可特异性水解抗纤维化短肽n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（n-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP）,在ACE n端催化结构域缺陷的小鼠体内Ac-SDKP含量明显上调,发挥抗器官纤维化效应。同样,给予外源性Ac-SDKP,亦能够降低ACE野生型鼠肺损伤和肺纤维化程度。可见Ac-SDKP与RAS的交互作用,可能是其抗纤维化作用的重要分子机制之一。在本研究中,以Ang II信号在矽肺纤维化中的作用作为研究的切入点,观察Ac-SDKP能否通过抑制Ang II的作用调控矽肺纤维化的发生与发展。课题组前期研究发现,β2肾上腺素受体-激动型G蛋白（β2 adrenergic receptor-stimulatory G protein,ADRB2-Gs）复合物在矽肺模型中低表达,而在Ac-SDKP抗纤维化治疗组中表达显著上调,提示该蛋白是Ac-SDKP抗矽肺纤维化中的调控蛋白之一。ADRB2抗器官纤维化作用与其促进环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,c AMP）的合成有关。相关研究报道,c AMP信号和Ang II/转化生长因子（transforming gorwth factor-β1,TGF-β1）信号的交互作用在纤维化的发生中发挥了重要作用。c AMP信号能够抑制Ang II/TGF-β1诱导的成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原合成。Ang II/TGF-β1则能够通过上调磷酸二脂酶（phosphodiesterase,PDE）加速c AMP的水解。而Ac-SDKP对c AMP信号和Ang II信号的调控及Ac-SDKP能否通过c AMP信号调节Ang II信号,目前文献报道较少。综合以上研究,本实验通过构建矽肺动物模型结合Ang II诱导的肌成纤维细胞转化模型,观察Ac-SDKP与Ang II信号和c AMP信号的交互作用对矽肺纤维化发生、发展的影响,并分析Ac-SDKP能否通过活化c AMP,促进c AMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）信号及其下游的c AMP应答元件结合蛋白（c AMP-response element binding protein,CREB）,从而发挥抗矽肺纤维化的作用。以进一步揭示矽肺发生、发展及Ac-SDKP保护效应的可能机制。第一部分Ac-SDKP、Ang II信号和c AMP信号的动态变化对矽肺纤维化发生、发展的影响目的:通过建立矽肺动物模型,并体外观察Ang II诱导大鼠成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的效应,分析Ac-SDKP、ACE/Ang II/AT1R轴和c AMP信号的变化对矽肺纤维化发生、发展的影响。方法:1采用HOPE-MED8050动式染尘控制系统构建大鼠矽肺模型。染尘参数:染毒室容积0.3m3,柜内温度20～25℃,湿度70%75%,压力-50Pa+50Pa,氧气浓度20%,Si O2粉尘进入速度为3.0～3.5ml/min,柜内粉尘质量浓度2000 mg/m3,每只动物每天染尘3h。3周龄雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组10只。分别染尘0周、2周、4周、8周、12周、16周,观察大鼠矽肺形成的动态变化。2观察Ang II（10-7mol/L）诱导不同时间点（0、5min、15min、30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h）大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的效应。3采用HE染色、Masson染色法观察肺组织病理形态的改变,分别采用免疫组织化学法、Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、I型胶原、纤连蛋白（fibronectin,Fn）、波形蛋白（Vimentin）、Gαs、抑制型G蛋白（inhibitory G protei

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸肌成纤维细胞环磷酸腺苷肾素-血管紧张素系统矽肺病

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Ac-SDKP调节α-Ac-Tub对矽肺纤维化的抑制作用及其机制

Ac-SDKP调节α-Ac-Tub对矽肺纤维化的抑制作用及其机制

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作者：王小君河北医科大学

学位级别：博士

第一部分α-Ac-Tub在人体(煤)矽肺标本中的表达及其病理学意义目的:观察与分析α-Ac-Tub在人体(煤)矽肺标本中表达及其临床病理学的意义。方法:1(煤)矽肺患者样本来自于59例尸检病例,年龄最小30岁,最大77岁,平均年龄52岁。分别来自内蒙... 详细信息

第一部分α-Ac-Tub在人体(煤)矽肺标本中的表达及其病理学意义目的:观察与分析α-Ac-Tub在人体(煤)矽肺标本中表达及其临床病理学的意义。方法:1(煤)矽肺患者样本来自于59例尸检病例,年龄最小30岁,最大77岁,平均年龄52岁。分别来自内蒙、山西、湖南、河北等省煤矿以及水泥、陶瓷、耐火材料厂的工人(煤矿井下作业工人45例、其他作业工人14例)。其中Ⅰ期(煤)矽肺22例、Ⅱ期(煤)矽肺8例、Ⅲ期(煤)矽肺7例,(煤)矽尘性反应22例。最短接尘史7年,最长为46年,平均22年。13例对照组选取外科手术切除肺组织标本(均为年龄相近无接尘史的临床患者)。2 HE染色、Masson染色观察病理形态变化。免疫组织化学染色法用以检测肺组织中α-SMA、vimentin和α-Ac-Tub的表达情况。免疫荧光法检测α-Ac-Tub和vimentin以及α-Ac-Tub和SP-A的共定位表达情况。结果:1在人体(煤)矽肺标本中,能够较好的观察到矽肺病变发生演变的过程。既吞噬粉尘的巨噬细胞性肺泡炎---细胞性结节---细胞纤维性结节---纤维性结节(包括玻璃样变性的结节)。2α-SMA阳性标记的肌成纤维细胞定位分布于结节性病灶和弥漫性间质纤维化区域。3α-Ac-Tub可表达于正常肺组织的多种细胞(包括支气管上皮细胞、血管内皮细胞、肺泡上皮细胞和肺成纤维细胞等)。在人体(煤)矽肺标本中于病变区(结节性病灶和弥漫性间质纤维化区域)缺失表达。4免疫荧光结果显示在人体矽肺标本中有α-Ac-Tub和vimentin、α-Ac-Tub和SP-A阳性共定位表达的细胞,其中vimentin在病变纤维化区域的表达明显增强,而α-Ac-Tub和SP-A在病变的结节病灶和间质纤维化区域缺失表达。第二部分ac-sdkp靶向调节α-ac-tub的表达对抑制大鼠矽肺纤维化的调控作用目的:采用支气管灌注sio2构建矽肺大鼠模型,并予以ac-sdkp抗纤维化治疗和预防治疗。通过对α-ac-tub、hdac6和α-sma在矽肺大鼠肺组织中的定位、分布与表达的观察与分析,研究与探讨α-ac-tub在矽肺发生过程中的作用,以及ac-sdkp对α-ac-tub调节在抑制矽肺纤维化形成时的作用与机制。方法:1采用非暴露式一次性灌注sio2构建矽肺大鼠模型。实验分组为:1)对照4w组:在腹腔内埋入注有2ml生理盐水的微量缓释胶囊,支气管内灌注1ml生理盐水,饲养4w后处理动物;2)对照8w组:腹腔内埋入注有2ml生理盐水的微量缓释胶囊,支气管内灌注1ml生理盐水,饲养8w后处理动物;3)矽肺模型4w组:在腹腔内埋入注有2ml生理盐水的微量缓释胶囊,支气管内灌注含有50mgsio2的1ml生理盐水,饲养4w后处理动物;4)矽肺模型8w组:在腹腔内埋入注有2ml生理盐水的微量缓释胶囊,支气管内灌注含有50mgsio2的1ml生理盐水,饲养8w后处理动物;5)ac-sdkp抗纤维化治疗组:支气管内灌注含有50mgsio2的1ml生理盐水,在腹腔内埋入注有2ml生理盐水的微量缓释胶囊,4w后更换为含有800μg/kg/dac-sdkp的2ml生理盐水的微量缓释胶囊,持续至8w后处理;6)ac-sdkp预防治疗组:灌尘前48h腹腔内埋入含有800μg/kg/dac-sdkp的2ml生理盐水的微量缓释胶囊,支气管内灌注含有50mgsio2的1ml生理盐水,持续至8w后处理。2he染色观察肺组织病理形态;免疫组织化学染色检测α-ac-tub、α-sma、hdac6在肺组织中的定位、分布与表达。免疫荧光法检测α-ac-tub和α-tub、α-ac-tub和sp-a、α-ac-tub和vimentin、hdac6和α-ac-tub、hdac6和α-sma的共表达。免疫印迹法(westernblot)检测α-sma、α-ac-tub、hdac6和i型胶原的表达水平。结果:1he染色结果显示,对照4w组和8w组大鼠双侧肺组织结构清晰,未见明显异常。矽肺模型4w组可见肺泡壁增宽,多伴有巨噬细胞和炎细胞的浸润,可见细胞性矽结节的形成;矽肺模型8w组多见矽结节的融合,伴有间质肺纤维化的形成。无论是ac-sdkp抗纤维化治疗组还是预防治疗组,其矽结节的面积较矽肺模型8w组显著减小,肺组织内纤维化程度明显降低。2免疫组织化学染色结果显示,α-ac-tub除可强表达于支气管上皮细胞外,还可在肺泡壁上的肺泡Ⅱ型上皮细胞、成纤维细胞和内皮细胞中阳性表达,使用不同公司商品化抗体均获得一致的结果。免疫荧光结果显示α-ac-tub存在和sp-a以及vimentin阳性共表达细胞。3免疫组织化学染色结果显示,在对照组中,α-sma仅阳性表达于气管、血管的平滑肌细胞,而在矽肺模型组中,α-sma可强表达于矽结节和间质纤维化区。而

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺肌成纤维细胞微管蛋白乙酰化

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AcSDKP对器官产纤维细胞功能的影响

引用

现代生物医学进展 2016年第6期16卷 1161-1163,1160页

作者：王晶丁永年周达何玲楠陈源文上海交通大学医学院附属新华医院上海200092 新疆医科大学第二附属医院新疆乌鲁木齐830000

n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(n-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,AcSDKP)是广泛存在于哺乳动物体内的乙酰化小分子四肽,具有广泛的生理功能。近年来,AcSDKP参与组织器官细胞外基质沉积和纤维化调控的作用与机制越来越... 详细信息

n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(n-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,AcSDKP)是广泛存在于哺乳动物体内的乙酰化小分子四肽,具有广泛的生理功能。近年来,AcSDKP参与组织器官细胞外基质沉积和纤维化调控的作用与机制越来越受到国内外学者的重视,已有研究发现其对心、肝、肺、肾等器官纤维化有抑制作用,而这些作用与各器官的产纤维细胞关系密切。本文就AcSDKP对心、肝、肺、肾内的产纤维细胞功能影响的研究进展展开综述。

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸四肽成纤维细胞

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